杨子超
- 作品数：38 被引量：97H指数：6
- 供职机构：哈尔滨医科大学附属第四医院更多>>
- 发文基金：黑龙江省自然科学基金黑龙江省教育厅科学技术研究项目国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- STUB1基因RNA干扰慢病毒载体的构建与鉴定被引量：3
- 2010年
- 目的:构建人STUB1基因RNA干扰(RNA interference,RNAi)慢病毒表达载体并进行鉴定。方法:针对筛选确定的人STUB1基因RNAi有效靶点序列,合成靶序列的Oligo DNA,退火形成双链DNA,与经AgeI和EcoRI酶切后的pMagic 4.0载体连接,产生短发卡RNA慢病毒载体。PCR筛选阳性克隆,测序鉴定,并包装成慢病毒颗粒。结果:PCR鉴定与DNA测序证实,合成的含STUB1 shRNA慢病毒载体寡核苷酸链插入正确。STUB1 shRNA慢病毒载体在293T细胞中成功包装成慢病毒颗粒。结论:成功构建人STUB1基因RNAi慢病毒载体以及包装成功慢病毒颗粒,为研究STUB1在胶质瘤发生发展过程中相关信号通路的作用,提供了稳定感染细胞的载体。
- 赵虹赵虹张惊宇徐万海杨子超
- 关键词：RNA干扰慢病毒载体LENTIVIRAL慢病毒表达载体胶质瘤发生阳性克隆
- 大鼠海马脑区脑源性神经营养因子慢病毒注射与表达的检测被引量：2
- 2009年
- 目的:建立成年大鼠海马脑区注射脑源性神经营养因子(BDNF)慢病毒表达载体的方法,并检测BDNF慢病毒载体体内表达目的基因的能力。方法:健康雄性SD大鼠随机分为假手术组(SH)、生理盐水组(NS)、GFP慢病毒注射组(GFP)和BDNF慢病毒注射组(BDNF),每组15只。所有实验大鼠在脑立体定位仪下定位海马组织。NS、GFP和BDNF组分别给予盐水(2μL)、GFP慢病毒(2μL)和BDNF慢病毒(2μL),SH组只实行手术操作。注射手术7d、14d和30d后,分别处死大鼠并进行在冰上取各组大鼠海马组织,分别提取海马总RNA和总蛋白质通过RT-PCR和Western blot检测各组大鼠海马组织BDNF mRNA和蛋白表达水平的变化。同时通过原位杂交方法检测BDNF的表达水平和脑区分布。结果:BDNF慢病毒注射成年大鼠7d、14d和30d后,均可以成功检测到BDNF在mRNA和蛋白水平在海马脑区都有明显的表达,同假手术组相比具有显著性差异;原位杂交检测显示BDNF慢病毒注射成年大鼠海马脑区7d、14d和30d的BDNF表达水平和脑区分布均保持稳定。结论:成功地建立了BDNF慢病毒注射成年大鼠海马脑区的方法,并可在注射后不同时间段检测到BDNF高水平的表达和均匀的海马脑区分布,为进一步将其应用于神经系统损伤性疾病的治疗奠定了基础。
- 张惊宇李金星孙永奇赵虹杨子超
- 关键词：BDNF慢病毒海马注射
- 微创钻颅联合病灶中心亚低温与病灶外侧局部亚低温治疗高血压脑出血疗效对比被引量：1
- 2007年
- 目的观察微创钻颅术后病灶中心局部亚低温对脑出血的临床疗效。方法将36例高血压脑出血患者随机分为两组,对照组20例在常规内科保守治疗的基础上行微创钻颅术及局部亚低温治疗,治疗组16例钻颅后病灶中心低温盐水持续灌注引流4小时后给局部亚低温,两组局部亚低温时间72小时。比较两组患者治疗有效好转死亡率,治疗前后神经功能缺损评分。结果两组患者有效率分别是82.5%、65%,死亡率分别是12.5%、15%,神经功能缺损评分高于对照组(P<0.05)。病灶中心亚低温治疗脑出血疗效优于局部病灶侧亚低温。结论病灶中心亚低温更能有效的起到脑保护作用,加快神经功能恢复。微创钻颅术联合病灶中心亚低温联合治疗高血压脑出血可明显降低病死率和致残率。
- 孙兴元杨子超
- 关键词：局部亚低温脑出血
- 小鼠NMNAT1基因的过表达和RNAi重组慢病毒的构建包装和检测
- 2011年
- 目的:针对小鼠烟酰胺单核苷酸腺苷酰转移酶1(NMNAT1)基因构建质粒并进行慢病毒包装,同时检测其表达水平和干扰效率,为进一步探讨该基因的功能提供研究工具和实验基础。方法:根据NMNAT1基因信息,用慢病毒载体pLenti6构建三种重组质粒,分别包含NMNAT1 cDNA全长、一个针对NMNAT1的小干扰序列和一个用于干扰对照的阴性序列。把这些质粒包装进慢病毒载体,并检测病毒滴度,再用慢病毒感染Hela细胞检测NMNAT1表达量和RNA干扰效率。结果:测序结果证明目的序列正确地插入到载体内。通过qPCR方法鉴定慢病毒包装成功,病毒滴度均为2×108 TU/ml以上。表达NMNAT1的重组慢病毒感染Hela细胞,该细胞能够高水平表达NMNAT1蛋白,而携带RNAi序列的慢病毒能够显著抑制其表达,干扰效率在70%以上。结论:针对NMNAT1的过表达和RNAi重组慢病毒制备成功,为进一步研究NMNAT1基因的功能和用慢病毒进行基因治疗提供了良好的研究工具。
- 赵虹杨子超张惊宇
- 关键词：慢病毒属基因过表达
- 进展性缺血性脑卒中的诊断、病因及处理(溶栓治疗及神经功能维护)
- 进展性缺血性脑卒中(progressive ischemic stroke)是一种病因(危险因素)多、发病机理复杂、诊断标准不明确、死亡率及致残率高、易造成医疗纠纷的临床上难治的缺血性脑血管病。约占我们病房缺血性卒中患者...
- 杨子超
- 关键词：缺血性脑卒中溶栓治疗
- 文献传递
- 17-β雌二醇对大鼠海马神经元保护作用的实验研究被引量：3
- 2012年
- 目的研究17-β雌二醇对大鼠海马神经元树突生长的影响及血清饥饿情况下对神经元存活率的影响。方法体外培养3d的海马神经元通过加入浓度为1nmol/L和2nmol/L的17-雌二醇,统计比较神经元树突的数目和长度;体外培养1d的海马神经元,加入17-雌二醇,培养6～7d后血清饥饿48h后进行NSE染色及MTT检测,检测神经元形态及神经元存活率。结果 17-雌二醇可显著增加存活神经元树突的长度和数量;并能够有效地抑制血清饥饿引起的细胞减少,增加其存活率。结论 17-β雌二醇对大鼠海马神经元的生长发育及存活具有保护性作用。
- 赵雪王宁王洪才蒋玉萌张惊宇杨子超
- 关键词：17-Β雌二醇海马神经元体外培养
- BRCA-1基因调控大鼠神经干细胞增殖的实验研究被引量：1
- 2008年
- 目的探讨BRCA-1基因在17β-雌二醇刺激下从大鼠分离培养的神经干细胞(NSCs)增殖中的作用。方法成体SD大鼠海马NSCs的分离、纯化和培养。分为对照组及加入不同浓度的17β-雌二醇溶液共6组。于1d、7d、14d、21d分别将各组细胞进行传代培养及Nestin、BrdU免疫荧光检测,激光共聚焦显微镜对其表达进行定量分析。收集以上各时间点的NSCs以荧光定量RT-PCR法检测BRCA-1基因的表达,Western Blot法检测BRCA-1蛋白表达。相关性分析研究神经干细胞增殖与BRCA-1基因表达的关系。结果与对照组相比,Nestin表达及BrdU荧光强度在10-5、10-6、10-717β-雌二醇组逐渐加强,各实验组BRCA-1 mRNA及蛋白表达增加,统计学差异均有显著意义。NSCs增殖量大时BRCA-1基因及蛋白的表达量也增高。相关性分析说明神经干细胞的增殖与BRCA-1基因表达存在正相关趋势(相关系数r=0.46)。结论17β-雌二醇作为一种辅助因子可以促进神经干细胞的增殖。其作用与其浓度有关。BRCA-l基因能够调控成体神经干细胞的增殖。成体神经干细胞的增殖与BRCA-l基因表达蛋白量成正相关。BRCA-l基因的表达受到雌激素的调控,为正向调控。
- 张丽杨子超郑吉祥张卓伯
- 关键词：神经干细胞雌激素BRCA-1增殖
- 大鼠海马CA1脑区慢病毒载体注射方法学改进
- 2009年
- 目的:采用电极埋管的改进方式进行大鼠海马CA1脑区慢病毒载体注射的方法,并检测此方法的有效性和安全性。方法:45只健康雄性SD大鼠随机分为假手术组(SH)、生理盐水组(NS)和eGFP慢病毒注射组(eGFP),每组15只。所有实验大鼠在脑立体定位仪下定位海马CA1组织,采用电极埋管的改进方式进行慢病毒注射。NS组给予生理盐水(2μL)、eGFP组给予慢病毒(2μL),SH组只实行手术操作。注射病毒7、14和30 d后,分别处死大鼠并进行全脑冰冻切片,荧光显微镜观察eGFP慢病毒注射组的GFP绿色荧光表达水平和脑区分布。同时取相邻冰冻切片进行Nissl染色,检测eGFP慢病毒注射组的海马CA1脑区的损伤程度。结果:eGFP慢病毒注射成年大鼠海马CA1脑区7、14和30 d后,均可以成功检测到GFP在海马CA1脑区的表达,且表达水平和脑区分布均保持稳定,不随注射后切片时间的变化而变化。Nissl染色结果显示,神经元存活数目在eGFP慢病毒注射组与假手术组、生理盐水组比较均无显著性差异(P>0.05)。结论:成功建立了电极埋管的方式向大鼠海马脑区注射慢病毒的方法,并可在海马CA1脑区高水平表达其所携带的目的基因,为进一步的在成年大鼠海马CA1脑区进行基因操作奠定了基础。
- 张惊宇杨安萍李金星刘路然赵虹杨子超
- 关键词：慢病毒载体海马绿色荧光蛋白
- 人参皂苷Rb1对Aβ淀粉样蛋白诱导大鼠海马神经元损伤的保护作用被引量：9
- 2012年
- 目的:研究人参皂苷Rb1对Aβ淀粉样蛋白诱导大鼠海马神经元损伤的影响,为其临床应用提供理论依据。方法:体外原代培养的SD大鼠海马神经元经Aβ淀粉样蛋白损伤建立细胞模型,实验分为正常对照组、Aβ淀粉样蛋白诱导损伤对照组(损伤对照组)、Rb1低剂量组(10mg.L-1)、Rb1中剂量组(50mg.L-1)及Rb1高剂量组(100mg.L-1),应用MTT法检测海马神经元生长增殖活力,TUNEL法检测神经元凋亡情况,化学发光法检测海马神经元内caspase-3活性。结果:MTT法检测结果显示,与正常对照组比较,损伤对照组和Rb1低、中及高剂量组神经元生存率均有不同程度的下降(P<0.05),损伤对照组下降最明显;与损伤对照组比较,Rb1中、高剂量组神经元生存率明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。TUNEL法检测结果显示,与正常对照组比较,损伤对照组、Rb1低、中剂量组的阳性神经元数量明显增加,其中损伤对照组增加最明显;损伤对照组与Rb1高剂量组比较差异有统计学意义(P<0.05)。损伤对照组caspase-3活性与Rb1高剂量组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:人参皂苷Rb1对Aβ淀粉样蛋白诱导性神经元损伤具有保护作用,并通过调控细胞凋亡实现。
- 王洪财蒋玉萌赵雪王宁高迪关铭张惊宇杨子超
- 关键词：人参皂苷RB1海马神经元CASPASE-3细胞凋亡
- UCF-101对大鼠局灶性脑缺血再灌注后JNK和ERK活性的影响被引量：1
- 2015年
- 目的:探讨UCF-101对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑内c-Jun氨基末端激酶(JNK)和胞外信号调节酶(ERK)活性的影响,进一步探讨UCF-101对局灶性脑缺血再灌注损伤脑保护作用的机制。方法:采用大脑中动脉线栓法(MCAO)建立大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,随机分为假手术组,缺血再灌注组,UCF组,应用TTC检测大鼠脑梗死体积,TUNEL法检测神经元凋亡,Western blot检测ERK和JNK的活性。结果:UCF-101可下调脑缺血再灌注大鼠脑组织JNK蛋白的活性,上调ERK蛋白的活性,并降低梗死体积、坏死和凋亡细胞数。结论:UCF-101对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤有保护作用,抑制JNK凋亡通路、促进ERK生存通路,从而减轻细胞凋亡是其脑保护机制之一。
- 苏丹颖吴海云吕曼华张丽孙菲菲高冠群杨子超
- 关键词：脑缺血再灌注C-JUN氨基末端激酶
