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氯化汞染毒小鼠肝脏及卵巢中LDH和EST同工酶酶谱分析被引量：6: 2002年; 利用聚丙烯酰胺胶电泳,对氯化汞染毒小鼠的肝脏和卵巢中乳酸脱氢酶(LDH)同工酶和酯酶(EST)同工酶进行了分析.酶谱比较的结果表明,各实验组LDH及EST表达模式与水平同对照组比较均表现出一定的差异,其差异程度呈剂量反应关系.; 司克媛梁桂霞李荔关甫国; 关键词：LDH 酶谱分析肝脏卵巢乳酸脱氢酶同工酶

东亚飞蝗主要过敏原精氨酸激酶基因的克隆表达、纯化及免疫原性鉴定被引量：4: 2013年; 本研究克隆了东亚飞蝗Locusta migratoria manilensis(Meyen)精氨酸激酶(arginine kinase,AK)基因全长,表达并纯化重组AK蛋白,研究重组蛋白的免疫反应性。东亚飞蝗AK基因开放阅读框全长为1 068 bp,编码355个氨基酸,与GenBank中已登录的东亚飞蝗AK(DQ513322)基因同源性为98%,重组质粒pET-28a-AK在E.coli中获得高效表达,重组蛋白相对分子质量(Mr)约为40 000,主要以可溶性形式表达,经亲和层析获得重组蛋白。通过免疫印迹分析结果表明,重组AK蛋白可被过敏性患者血清识别,免疫原性良好。结果表明我们成功获得东亚飞蝗精氨酸激酶全长基因并表达出重组AK蛋白,重组AK蛋白具有良好的免疫反应性。; 陈义昆邬玉兰李荔连国云刘志刚; 关键词：东亚飞蝗精氨酸激酶克隆表达纯化

缢蛏泛变应原原肌球蛋白的克隆表达、纯化及其免疫学特性研究被引量：1: 2007年; 原肌球蛋白（tropomyosin）作为泛变应原广泛存在于无脊椎动物体内，本研究从缢蛏中克隆出一个原肌球蛋白基因。缢蛏（Sinonvacula constricta）购于深圳市水产品市场。9个缢蛏过敏病人的阳性血清来自深圳市人民医院和儿童医院（经Unit CAP 检测，2级以上）。缢蛏原肌球蛋白 cDNA片段转入表达载体（pET-28a），引物序列P5：5＇-GGACATATG-GAGGCCATCAGTTGGC-3；p3：5＇-CCGGAAT-TCTTAGCCAGTCAGTTKCGC-3＇。重组原肌球蛋白基因表达按常规方法进行。目标蛋白洗脱组分透析并保存。纯化缢蛏重组原肌球蛋白进行SDS-PAGE，电转到纤维素膜上，再经常规免疫学方法鉴定。重组原肌球蛋白分离后进行酶切，混合肽进行MALDI-TOF-MS质谱鉴定。; 李荔李启沅刘志刚; 关键词：原肌球蛋白克隆表达免疫学特性缢蛏 MALDI-TOF-MS 纯化

缢蛏过敏原的分离、鉴定与纯化被引量：3: 2007年; 以磷酸盐缓冲液提取蛋白,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对其抗原成分进行分析,选用缢蛏过敏患者的阳性血清进行免疫印迹,鉴定出主要与次要过敏原.用高压液相色谱(HPLC)纯化主要过敏原蛋白,鉴定其免疫活性,结果表明,缢蛏粗提液SDS-PAGE显示有18条蛋白条带,含量高的蛋白有6条,其分子量分别为110kD、55kD、42kD、38kD、35kD和28kD,其中以35kD处最为富集.经Western-Blotting鉴定,58kD蛋白为缢蛏的主要过敏原,38kD、28kD和12kD蛋白为缢蛏的次要过敏原.HPLC体积排阻纯化后得9个峰,以SDS-PAGE检测,58kD的蛋白位于第4峰,其中有一条明显的蛋白条带.将该蛋白条带用HPLC反相纯化,得到两个峰.经Western-Blotting鉴定,58kD的主要过敏原位于反相纯化的第2峰.; 李荔李启沅刘志刚余晓; 关键词：缢蛏聚丙烯酰胺凝胶电泳免疫印迹高压液相色谱

鳙鱼过敏原小清蛋白基因的克隆表达、纯化及免疫学鉴定被引量：4: 2011年; 目的克隆、表达与纯化鳙鱼(Aristichthys nobilis)过敏原小清蛋白,并检测免疫学活性。方法提取鳙鱼的总RNA,设计简并引物,采用RT-PCR方法扩增目的基因,克隆入T载体中进行测序和分析。将目的基因克隆到pET-28a(+)表达载体中于E.coli BL21(DE3)表达。通过Ni2+亲和层析,对重组蛋白进行纯化,采用免疫印迹(Western-blotting)方法检测其IgE结合活性。结果获得了鳙鱼过敏原小清蛋白基因,该基因被GenBank收录,登陆号FJ013047。基因开放阅读框共330个碱基(包括终止密码子),编码109个氨基酸,相对分子质量为11 537。Western-blotting结果表明,纯化后的重组蛋白能与过敏性患者血清中的特异性IgE结合。结论成功克隆、表达、纯化鳙鱼过敏原小清蛋白,此重组蛋白具有良好的免疫原性。; 王海燕李荔刘志刚邬玉兰陈家杰; 关键词：鳙鱼小清蛋白

东亚飞蝗细胞色素P450基因的克隆及表达分析被引量：1: 2013年; 本文克隆了东亚飞蝗Locusta migratoria manilensis(Meyen)细胞色素P450(cytochrome P450)基因全长,表达重组蛋白,并对其可溶性进行了分析。通过提取东亚飞蝗总的RNA,反转录成cDNA,设计特异性引物,PCR克隆东亚飞蝗细胞色素P450基因,将测序正确的目的片段克隆至原核表达载体pET-28a中,在大肠埃希菌Escherichia coli Rosetta中用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测重组蛋白表达结果。结果表明:东亚飞蝗细胞色素P450基因开放阅读框全长为1 551 bp,编码516个氨基酸,与GenBank中已登录的东亚飞蝗细胞色素P450基因(HM153426)的同源性为99%,重组质粒pET-28a-P450在E.coli Rosetta中获得高效表达,重组蛋白相对分子质量(Mr)约为53 000,主要以包涵体的形式存在。; 陈义昆邬玉兰李荔连国云刘志刚; 关键词：东亚飞蝗细胞色素P450 基因克隆

点带石斑鱼抗菌肽hepcidin基因克隆及其成熟肽的原核融合表达被引量：2: 2011年; 目的克隆点带石斑鱼hepcidin前体cDNA序列,构建其成熟肽pET-32a融合表达载体。结论根据已报道的硬骨鱼类hepcidin cDNA序列设计简并引物,以点带石斑鱼(Epinephelelus malabaricus)肝脏为材料,通过RT-PCR扩增hepcidin cDNA序列,用比对推导的氨基酸序列预测其成熟肽段。再将成熟肽cDNA序列亚克隆至pET-32a构建原核表达并进行原核融合表达。结果获得点带石斑鱼hepcidin-like抗菌肽前体cDNA序列1条,GenBank登录号为HM474788。DNA序列的Blast分析以及推导氨基酸序列NJ进化树分析表明,HM474788是点带石斑鱼第1条报道的抗菌肽hepcidin cDNA序列。成功构建了该序列的成熟肽原核融合表达载体pET-32a-hepcidin(EM1),并成功在大肠杆菌origami(DE3)中表达。结论成功克隆点带石斑鱼hepcidin-like抗菌肽前体cDNA序列,成熟肽成功在大肠杆菌中融合表达,为后续有关石斑鱼hepcidin的功能研究与实践应用奠定重要基础。; 陈大玮邓利李荔彭永鹤刘志刚; 关键词：点带石斑鱼抗菌肽 HEPCIDIN 分子克隆原核融合表达

紫红笛鲷过敏原小清蛋白基因克隆及序列分析被引量：5: 2008年; 目的克隆紫红笛鲷(Lutianus argentimaculatus)过敏原小清蛋白(parvalbumin)基因。方法采用生物信息学方法对多种鱼的小清蛋白基因进行序列性比对,根据序列保守区域设计并合成简并性引物,通过实时(RT)-PCR和3′cDNA末端快速扩增RACE技术克隆紫红笛鲷小清蛋白的全长基因,并进行序列分析。结果获得紫红笛鲷全长608 bp的新基因,开放阅读框为330个碱基,编码109个氨基酸,经分析该蛋白分子量约为11.5kD,等电点为4.35。序列分析结果显示所克隆的基因与其他鱼类过敏原小清蛋白基因有很高的同源性。结论成功克隆出紫红笛鲷过敏原小清蛋白基因(登录号为:EF591789)。; 李荔吴曾闵刘志刚; 关键词：紫红笛鲷过敏源小清蛋白基因克隆

基因工程抗菌肽关键技术研究与应用: 刘志刚赖仞夏立新李永新李荔杨海龙潘韵邓利李建许刘晓宇张森刘欢田芳李东升高安健; 课题来源与背景:随着人类对抗生素的长期使用以及滥用，"无毒，无残留，无耐药性"的抗菌肽是新一代抗菌制剂的发展趋势和要求.该成果是由国家863计划、国家自然科学基金、深圳市科技计划项目等共同资助完成，历时8年.技术原理及性...; 关键词：; 关键词：基因工程抗菌肽

花生过敏小鼠腹腔肥大细胞SOC活性与ROS相关性研究被引量：4: 2012年; 研究花生过敏状态下的C57BL/6小鼠腹腔肥大细胞的激活与钙离子通道之间的内在联系,以及探讨肥大细胞钙离子通道与ROS(reactive oxygen species)之间的关系.18只雌性C57BL/6小鼠随机分为PBS组(A组)、花生过敏模型组(B组)、vitamin A和vitamin E灌胃治疗组(C组).酶联免疫吸附实验检测各组腹腔上清液中特异性的IgE和IgG2a水平,以及细胞因子的变化,另外测定腹腔上清液与血清中的组胺、ROS含量.腹腔灌洗液中细胞涂片,进行肥大细胞计数和脱颗粒比例统计,荧光共聚焦显微镜观察腹腔肥大细胞钙离子通道SOC(Store oprated channel)的活性.腹腔上清液中花生特异性IgE、IL-4、IL-10、组胺、ROS、血清中的组胺和ROS、腹腔灌洗液中肥大细胞总数、肥大细胞脱颗粒比例,都呈现出A组; 杨成彬闫浩刘晓宇夏立新李荔刘杰刘志刚; 关键词：肥大细胞 SOC ROS

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李荔

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