李玉玲
- 作品数：5 被引量：13H指数：2
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学轻工技术与工程更多>>
- 去除经反相分配色谱纯化的蛋白质样品中有机溶剂的方法
- 本发明公开了一种除去经反相色谱纯化的蛋白质样品中有机溶剂的方法，其目的是提供一种可有效除去经反相色谱纯化的蛋白质样品中有机溶剂的方法。本发明所提供的除去经反相色谱纯化的蛋白质样品中有机溶剂的方法，是将经反相色谱纯化的蛋白...
- 方宏清陈惠鹏李彦英戴红梅李玉玲
- 文献传递
- 甲状旁腺激素和转铁蛋白N端半分子融合蛋白在毕赤酵母中的表达被引量：1
- 2005年
- 利用重叠PCR技术将PTH(parathyroidhormone,甲状旁腺激素)基因与TFN(transferrinN_terminalhalf_molecule,转铁蛋白N端半分子)基因在体外融合,融合基因克隆至真核表达载体pPIC9中,转化毕赤酵母GS115。转化子经甲醇诱导后,融合蛋白得到了表达并分泌到发酵上清液中。经SPSepharoseFF阳离子交换层析、PhenylSepharoseFastFlow疏水层析纯化获得了纯度大于95%的PTH_TFN样品。Westernblot分析及腺苷酸环化酶实验证明融合蛋白中的PTH具有与抗PTH抗体结合能力及刺激腺苷酸环化酶的活性,铁饱和实验证明融合蛋白中的TFN和单独的TFN具有相同铁结合能力。因而TFN可望作为PTH的天然运输载体。
- 张豪李晓静王德解陈璟李彦英李玉玲沈明山方宏清陈惠鹏
- 关键词：甲状旁腺激素毕赤酵母基因表达腺苷酸环化酶
- 蛇毒金属蛋白酶Alfimeprase在大肠杆菌中的表达、纯化及活性检测被引量：3
- 2007年
- 目的:应用大肠杆菌表达系统表达纤溶性蛇毒金属蛋白酶Alfimeprase。方法:运用PCR技术扩增人工合成的目的基因,引入Nde Ⅰ、EcoR Ⅰ双酶切位点;目的基因经Nde Ⅰ、EcoR Ⅰ双酶切后,克隆到pET22b载体上,然后将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)进行胞内表达,对获得的包涵体进行体外透析复性;应用纤维蛋白原水解法、纤维蛋白平板法和纤维蛋白层叠法检测复性后蛋白的降纤活性。结果:目的蛋白以包涵体形式在大肠杆菌中获得高表达,复性后的蛋白具有降解纤维蛋白(原)的活性。结论:Alfimeprase包涵体可以通过复性获得活性产物。
- 黄金路李招发戴红梅李玉玲汤国营周长林方宏清陈惠鹏
- 关键词：包涵体纤维蛋白纤维蛋白原
- SARS病毒S蛋白片段的克隆表达和纯化
- 2005年
- 以大肠杆菌表达载体pET22b为载体,直接表达SARS病毒S蛋白425～569及894～1033等2片段。表达所获得的包涵体形式蛋白经尿素溶解后分别经过2次离子交换层析,获得初步纯化。在酸性和低尿素浓度环境中,2种S蛋白片段极易沉淀。Western印迹鉴定显示其与抗SARS病毒血清呈阳性反应。获得的纯化蛋白可用于检验受体结合能力等研究。
- 陈璟李彦英周育森李玉玲周长林方宏清陈惠鹏
- 关键词：SARS病毒S蛋白纯化克隆表达片段WESTERN印迹
- 炭疽杆菌噬菌体裂解酶基因在大肠杆菌中的表达及鉴定被引量：9
- 2005年
- 利用PCR方法扩增炭疽杆菌噬菌体裂解酶 (γlysin)基因 ,克隆至大肠杆菌表达载体pET2 2b中 ,经菌落PCR筛选、序列测定和酶切鉴定证实表达载体pET2 2b -γlysin构建成功 ,并在EscherichiacoliBL2 1(DE3)中获得了高表达。目的蛋白约占菌体总蛋白的 4 0 % ,5L发酵罐中的产酶水平高达 15g L。菌体经超声破碎 ,制备无细胞抽提液 ,StreamlineSP和SPHP柱层析以及SephacrylS- 10 0凝胶过滤三步纯化 ,得到分子量为 2 7kD单一条带的目的蛋白 ,薄层扫描分析显示其纯度大于 95 %。目的蛋白的收率为 19 1% ,纯化倍数为 35 0。生物活性鉴定重组的γ噬菌体裂解酶具有特异性 :可快速裂解炭疽杆菌 ,比活为 14 0 0u mg左右 ;而对大肠杆菌、枯草杆菌及蜡样芽孢杆菌没有裂解活性。
- 李晓静张豪付学奇李彦英陈璟李玉玲方宏清陈惠鹏
- 关键词：炭疽杆菌大肠杆菌
