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李时君: 作品数：11 被引量：11H指数：2; 供职机构：华中科技大学同济医学院附属同济医院更多>>; 发文基金：艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项国家重点基础研究发展计划国家科技重大专项更多>>; 相关领域：医药卫生生物学自动化与计算机技术更多>>

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用多糖-破伤风类毒素结合苗制备抗流行性脑膜炎球菌多糖单克隆抗体被引量：4: 2011年; 目的研制抗A群奈瑟脑膜炎球菌荚膜多糖单克隆抗体（GAMP mAb）.方法以A群奈瑟脑膜炎球菌荚膜多糖-破伤风类毒素（GAMP-TT）耦联物免疫BALB/c小鼠,用常规细胞融合与克隆化技术获得一株能稳定分泌抗GAMP mAb的杂交瘤细胞株（2E7）.采用秋水仙素阻断法测定其染色体数目,降植烷诱导法制备含该抗体的小鼠腹腔积液,辛酸-硫酸铵沉淀法纯化单克隆抗体,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）灰度扫描测定提取物纯度,改良过碘酸盐氧化法制备辣根过氧化物酶（HRP）标记抗GAMP mAb,并采用中和法及其抗原替代法对抗GAMP mAb的特异性进行初步的鉴定.结果所获得的杂交瘤细胞（2E7）具有很好的生长特性,染色体数目约为139.73条;抗体分泌量适中,Ig亚类为IgG1,提取物浓度1.76～2.32 mg·mL-1,纯度97.2%,标记抗GAMP mAb的效价为1：25 600;抗原替代实验与中和实验对其特异性考核,初步结果证实2E7 mAb具有很好的抗GAMP特异性.结论成功制备抗GAMP mAb,为GAMP-TT疫苗的生产监测及产品质量控制提供了必要的物质基础.; 李佩珊张春燕李时君陈妍项美娟李方和张洪; 关键词：菌苗多糖抗体单克隆抗体

抗HBV G145R HBsAg多克隆抗体的制备与鉴定: 2008年; 目的实验性rG145R变异抗HBs多克隆抗体。方法采用纯化全基因重组G145R变异HBsAg常规皮下免疫制备小鼠多克隆抗体,以间接ELISA、SDS-PAG及Western blot等多种实验对制备物进行鉴定,并初步应用于转染CHO细胞的化学染色。结果制备物在Western blot、ELISA中和试验与抗原替代ELISA中与重组G145R变异HBsAg及重组野生HBsAg等均有很好的特异性与反应性;对此两种抗原的ELISA效价前者显著高于后者(分别为51200与6400);将其用于2A8细胞(转染并分泌G145R HBsAg)爬片的PAP染色,亦取得较理想的实验结果。结论采用重组G145R变异HBsAg免疫成功制备出较高效价的抗体。鉴于该抗体同时与野生重组wHBsAg存在较强交叉反应,其与野生抗HBs的混合应用能增ELISA免疫逃逸变异的检测能力。; 李佩珊龚劲松李时君张波陈妍项美娟李方和; 关键词：乙型肝炎病毒基因变异合成肽多克隆抗体

实验动物终末处置的新方法——锐性弹切脊髓高位离断术被引量：1: 2010年; 急性生命剥夺（宰杀）是一项与动物福利相关且经常发生的重要事件。对实验动物处死的方法必须尽可能做到不给其带来过多痛苦;不干扰或基本不干扰动物临终前的生理状态;不损坏科学实验研究的靶器官（或组织）;不对实验者造成过大的心理冲击。常用方法有脊髓牵拉断裂法、; 李佩珊张春燕李时君陈妍李方和; 关键词：实验动物脊髓离断术动物福利生理状态

重组G145R HBsAg亲和纯化方法的建立及其应用被引量：4: 2007年; 目的建立重组乙型肝炎病毒G145R变异HBsAg抗体亲和纯化方法。方法用抗-HBs单克隆抗体(D12- McAb)制备亲和层析胶,对2A8细胞(分泌G145R变异HBsAg)培养上清盐析物进行亲和纯化。采用SDS-PAGE、Western blot及ELISA,对纯化产物的纯度、特异性、含量和回收率进行鉴定,并与同法纯化的HBsAg阳性血清及r-wHBsAg提取物进行比较。结果D12-McAb对重组真核表达G145R变异HBsAg、HBsAg阳性血清及r-wHBsAS三者具有相似的亲和性,产物纯度分别为90.3%、95.2%和93.1%,回收率分别为43.3%、72.0%和66.4%。结论已成功地建立了重组G145R变异HBsAg抗体亲和纯化方法,为G145R变异以及其他HBV免疫逃逸变异感染的深入研究奠定了重要的技术基础。; 张波李方和龚劲松田拥军张春燕李时君陈妍黄永国杨东亮; 关键词：乙型肝炎表面抗原单克隆抗体

自制实验室管理软件的技术特征及应用效果: 根据所在单位实验室管理需要，研究者提出依托局域或广域网网络实施微机化医学科研实验室信息管理的新理念，围绕这一理念编制软件，并将其用于实验室微观事务工作管理。描述了该软件的基本组成与主要技术特点，并对初级版的应用进行了总结...; 陈妍李时君黄红平胡继发龚劲松刘慎沛田拥军李方和; 关键词：信息管理系统软件开发; 文献传递

A群脑膜炎球菌荚膜多糖排溢法ELISA的建立及初步应用: 2012年; 目的建立A群脑膜炎球菌荚膜多糖(Group A meningococcal polysaccharide,GAMP)排溢法ELISA,并进行验证及初步应用。方法采用改良过碘酸盐氧化法制备抗GAMP-HRP。以抗GAMP单克隆抗体包被酶标板,抗GAMP-HRP作为酶标抗体,建立检测GAMP的排溢法ELISA。采用棋盘滴定法确定包被抗体及酶标抗体的最佳工作浓度,并对其特异性、敏感性及重复性进行验证。采用建立的排溢法ELISA检测GAMP-TT系列层析样品中的GAMP抗原活性,并与传统一步法ELISA及二步法ELISA进行比较。结果建立的排溢法ELISA的包被抗体最佳浓度为20μg/ml,酶标抗体最佳工作浓度为1∶128。该方法的特异性良好,敏感性与一步法和二步法相当,批内和批间变异系数与一步法相当;该方法检测GAMP-TT层析样品中的GAMP抗原活性的结果与二步法ELISA基本一致。结论排溢法ELISA的操作步骤与一步法ELISA大致相似,但较二步法ELISA显著简化,其对一步法ELISA中Hooks效应的纠正效果与二步法ELISA相同。; 殷波涛李佩珊李时君张春燕陈妍李方和; 关键词：单克隆抗体

排溢法ELISA,一种改进的二步法标记免疫实验技术被引量：2: 2010年; 目的:建立一种简便的血清HBsAg检测二步法标记免疫试验。方法:在既往G6ELISA的基础上建立血清HB-sAg检测排溢法ELISA,采用系列稀释实验对方的相对显色强度,敏感性,及其对Hooks效应的拮抗能力进行考核,将其用于对一组临床标本的检测,并与经典二步法及一步法ELISA进行比较。结果:在大致相同的实验条件下排溢法,二步法及一步法ELISA三者实验信号的强度大致相当;其敏感性分别为19.2、12.6及14.5pg/ml。当被检标本HBsAg浓度在37.5μg/ml时一步法ELISA开始显现Hooks效应,至2400μg/ml时测值已接近阈值;而排溢法及经典二步法ELISA两者对Hooks效应则表现出相似的拮抗。对231例临床标本进行检测,112例高滴度阳性标本(经稀释实验证实)中出现中重度Hooks效应者一步法ELISA17例,占15.2%,而排溢法及其二步法ELISA则未见Hooks效应的影响。结论:在保证实验结果的前提下,排溢法ELISA在操作程度简化上与一步法相当,但可完全克服Hooks现象的干扰。; 李方和张春燕李佩珊李时君陈妍; 关键词：ELISA HBSAG

抗HBc IgG & IgM相、绝对含量同步检测的方法学原理与特征: 在简要回顾特异性抗体，血清总抗HBc及其不同亚类抗HBc检测临床意义、实验方法及其技术特征的基础上，率先提出开展“血清分抗体相对含量临床检测”新理念;以现行流式细胞免疫技术及其流式蛋白芯片技术为基础设计出“血清抗HBc ...; 李方和张春燕李时君陈妍; 关键词：乙肝病毒同步检测; 文献传递

G145R rHBsAg抗原衰减对抗体亲和层析的影响被引量：1: 2008年; 目的:探讨G145R rHBsAg抗原衰减对抗体亲和纯化的影响与意义。方法:采用抗野生重组HBs G6-McAb制备层析载体,对含rG145R HBsAg的2A8细胞上清做亲和层析。以SDS-PAGE、Western Blot及ELISA等对产物纯度、含量及回收率进行评价,并与同法纯化之野生HBsAg进行比较。结果:梯度洗脱层析显示G145R rHBsAg、自然表达野生HBsAg及其r-wHBsAg三者纯化产物的纯度分别为90.3%、95.2%及93.1%;回收率为43.3%、72.0%及66.4%,其亲和洗脱峰型前者较后两者略宽,主峰前部出现明显顿挫;pH线性梯度洗脱显示,G145R rHBsAg洗脱曲线主峰较前梯度洗脱进一步增宽,顿挫更为明显,并在主峰前出现一低平的蛋白峰。ELISA检测显示HBsAg活性贯穿主峰始终,SDS-PAGE与Weistern blot显示两法洗脱产物纯度(92.5%与89.3%)大致相似,分子大小与野生HBsAg相同。结论:洗脱峰加宽与顿挫作为G145RrHBsAg抗原性渐进性衰减的特征性表现,在同类生物材料实验性制备与产品考评中有一定参考价值。; 李时君张春燕李佩珊陈妍孙文李方和; 关键词：单克隆抗体乙型肝炎病毒表面抗原

A群奈瑟氏脑膜炎球菌荚膜多糖检测排溢法: 目的建立A群奈瑟氏脑膜炎球菌荚膜多糖(GAMP)抗原检测的排溢法ELISA。方法以辛酸-硫酸铵沉淀法纯化抗GAMP mAb IgG。采用改良过碘酸盐氧化法制备抗GAMP-HRP。以抗GAMP mAb包被,抗GAMP-HR...; 殷波涛李佩珊李时君张春燕陈妍李方和; 关键词：HRP 一步法 ELISA

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