朱立天 作品数:9 被引量:6 H指数:2 供职机构: 扬州大学医学院 更多>> 发文基金: 江苏省自然科学基金 江苏省高校自然科学研究项目 国家自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 更多>>
淋病奈瑟菌NspA原核表达及其抗原性研究 2012年 目的研究淋病奈瑟菌表面蛋白A(NspA)的抗原性及其在淋病快速诊断技术中的应用价值。方法用PCR技术克隆淋病奈瑟菌NspA基因,构建其原核表达载体,在大肠杆菌中表达重组NspA,表达产物复性后免疫小鼠,Western blot、ELISA分别检测免疫血清与淋病奈瑟菌细胞裂解液中NspA及与淋病奈瑟菌全细胞的结合能力。结果NspA基因可在大肠杆菌中表达,纯化并复性的重组NspA(rrNspA)可在小鼠体内刺激产生高效价特异性抗体,抗rrNspA抗体可与淋病奈瑟菌完整细胞及细胞裂解液中NspA特异性结合。结论获得的rrNspA及抗rrNspA抗体在建立淋病奈瑟菌抗体或抗原快速检测方法中具有潜在的应用价值。 李国才 解如山 蒋桂花 朱立天 焦红梅 潘兴元 陈红菊 严华 季明春关键词:淋病奈瑟菌 抗原性 淋病奈瑟菌NspA基因疫苗诱导小鼠特异性体液免疫应答 被引量:2 2007年 1999年Martin等首先克隆了淋病奈瑟菌表面蛋白A(Neisseria surface protein A,NspA)基因,发现其在细胞表面持续表达,菌株之间NspA氨基酸序列的同源性高达98%,提示NspA可能是研制淋病疫苗的理想抗原。我室已成功构建NspA真核表达载体pcNspA,本文研究了pcNspA基因免疫在小鼠体内诱生特异性抗体的作用。 蒋桂花 李国才 王劲松 龚卫娟 朱立天 季明春关键词:淋病奈瑟菌 特异性抗体 体液免疫应答 A基因 疫苗诱导 小鼠 淋病奈瑟菌对hCD46基因转染COS-1细胞的黏附 2008年 为研究人CD46(hCD46)在菌毛介导的淋病奈瑟菌宿主特异性黏附过程中的作用。用连接PCR技术扩增出启动子与cDNA相连的hCD46小基因,并将其置换出pcDNA3.1载体中的CMV启动子,构建成重组真核表达载体pCD46。转染COS-1细胞后用间接免疫荧光法检测到hCD46cDNA在其自身启动子的指导下可在COS-1细胞膜表面有效表达,Western blotting检测表明表达产物的分子量正确,用流式细胞术分选表达hCD46的基因转染细胞COS-1-46。细菌黏附实验显示菌毛阳性淋病奈瑟菌临床分离株对COS-1-46细胞有较强的黏附性。提示hCD46是菌毛介导的淋病奈瑟菌特异性黏附于人黏膜细胞的一种重要受体,hCD46小基因可用于淋病奈瑟菌感染转基因小鼠模型的制备。 李国才 王劲松 朱立天 王晓红 焦红梅 潘兴元 季明春关键词:淋病奈瑟菌 hCEACAM1介导淋病奈瑟菌对COS-1细胞的黏附 2008年 目的研究人癌胚抗原相关细胞黏附因子1(hCEACAM1)在淋病奈瑟菌黏附宿主细胞过程中的作用。方法将hCEACAM1 cDNA置于hCD46启动子和兔β-球蛋白第2内含子之后,构建重组真核表达载体pCDPGICEA1。转染COS-1细胞,G418筛选和流式细胞术分选稳定表达hCEACAM1的基因转染细胞。细菌黏附实验检测淋病奈瑟菌对基因转染COS-1细胞的黏附。结果在hCD46启动子和兔β-球蛋白第2内含子的作用下,hCEACAM1 cDNA在COS-1细胞获得高效表达,淋病奈瑟菌可以黏附表达hCEACAM1的COS-1细胞。结论hCEACAM1可以介导淋病奈瑟菌对动物细胞的黏附,可能是淋病奈瑟菌特异性感染人体的一种重要受体,可用来制备淋病奈瑟菌感染的相应转基因动物模型。 李国才 王劲松 朱立天 焦红梅 季明春关键词:淋病奈瑟菌 基因转染 hCD46基因启动子指导hCEACAM1 cDNA在CHO细胞的表达 淋病奈瑟菌只感染人,淋病研究一直为缺乏合适的动物模型而困扰。表达淋病奈瑟菌在人体细胞上特异性受体的转基因小鼠可能为淋病动物模型研制带来希望。癌胚抗原相关细胞黏附因子1(Carcinoembryon- ic antigen... 王劲松 季明春 李国才 潘兴元 朱立天关键词:淋病奈瑟菌 文献传递 人CD46基因启动子的克隆与验证 淋病奈瑟菌是淋病的病原体。在各种性病中,淋病的发病率最高,危害严重;目前还没有有效的疫苗可以用来预防淋病;而且,随着多种耐药性淋病奈瑟菌菌株的出现,淋病的治疗也出现了困难。因而需要加强对淋病奈瑟菌感染与免疫机制的研究。然... 王劲松 季明春 李国才 潘兴元 朱立天关键词:启动子 淋病奈瑟菌 文献传递 自身启动子指导人CD46 cDNA在CHO细胞的表达 淋病的发病率居于各类性病之首,每年新发病例62 000 000,在发展中国家则更为严重。淋病奈瑟菌是淋病的病原体,人感染淋病奈瑟菌后体内不能产生有效的免疫力,可以反复感染,这给淋病的疫苗研制带来巨大困难,因而需要深入研究... 王劲松 季明春 李国才 潘兴元 朱立天关键词:淋病奈瑟菌 文献传递 人CD46启动子真核表达载体的构建 被引量:4 2007年 为了构建人CD46(hCD46)启动子指导目的基因表达的真核表达载体,提取HeLa细胞基因组DNA,用PCR扩增出hCD46基因的启动子区域,序列分析结果表明其与GenBank中hCD46基因5′端某片段的同源性为99.9%。用此启动子替换pcDNA3EGFP中的CMV启动子,并在hCD46启动子和EGFP基因之间插入兔β-球蛋白基因第二内含子(RGI),得到的重组表达载体转染CHO和SP2/0两种鼠源细胞,流式细胞术检测表明CHO细胞EGFP的表达量高于SP2/0细胞,表达特性与人体CD46相似;RGI可以增强EGFP的表达量,但不改变其表达的组织特异性,提示克隆的hCD46启动子可以用于研制模拟人体CD46基因表达特性的转基因小鼠。 李国才 王劲松 焦红梅 朱立天 潘兴元 季明春关键词:真核表达载体 EGFP 人CD46 cDNA的克隆及其功能的初步研究 菌毛是淋病奈瑟菌重要的黏附因子,Kallstrom等首先发现淋病奈瑟菌菌毛可与人上皮细胞表面膜分子 hCD46结合而介导细菌-细胞之间的相互作用,启动了淋病奈瑟菌对人体的感染。hCD46有4种亚型:BC1、 BC2、C1... 王劲松 蒋桂花 潘兴元 朱立天 李国才 季明春文献传递