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张晓霞
作品数:
2
被引量:3
H指数:1
供职机构:
温州医学院附属第一医院
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发文基金:
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相关领域:
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合作作者
胡王强
温州医学院附属第一医院
孔凡慧
温州医学院附属第一医院
陶志华
温州医学院附属第一医院
吴秀玲
温州医学院附属第一医院
沈默
温州医学院附属第一医院
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PCA3基因启动子多态性快速分型的DHPLC法建立
2010年
目的建立DHPLC技术分析PCa特异性PCA3基因启动子多态性的技术平台。方法在PCA3基因启动子区域设计1对引物,以本室先前已经建立的11种(C2T6、C2T5、C3T5、C2T5/C2T6、C3T5/C3T4、C3T5/C4T5、C3T5/C2T5、C3T5/C2T6、C3T5/C1T8、C2T5/C3T4、C2T6/C2T7)已知多态性的PCA3基因启动子的克隆质粒为标准品,通过优化DHPLC检测体系,建立其多态性克隆质粒的标准图谱。采用完全随机设计,从200例病理确诊为PCa患者中选取147例,对其PCA3基因启动子的扩增产物进行DHPLC分析,比较各标本洗脱峰与标准克隆质粒的DHPLC图谱,以判断临床标本PCA3基因多态性类型,并对这些基因型再行克隆测序予以验证。结果通过克隆质粒优化DHPLC检测体系,最适检测体系为:含44.3%A洗脱液(0.1mol/L TEAA、0.025%ACN)和55.7%B洗脱液(0.1mol/L TEAA、25%ACN)的起始洗脱梯度,含35.3%A洗脱液和64.7%B洗脱液的终止洗脱梯度,柱温53℃,流速:0.9ml/min,在该条件下DHPLC用8种杂合型克隆质粒(C2T5/C2T6、C3T5/C3T4、C3T5/C4T5、C3T5/C2T5、C3T5/C2T6、C3T5/C1T8、C2T5/C3T4、C2T6/C2T7)进行重复性验证,结果显示,同一多态性色谱峰中2峰的出峰时间之差的批间CV值在0%~6.67%之间。11种克隆质粒多态性标本仅通过1~2次洗脱,就能根据峰型和各峰的出峰时间将其区分开。147例PCa患者中,144例DHPLC检测结果和克隆测序结果一致(Kappa=1,P=0.000),并出现3种新的峰型,经克隆测序验证为3种新的多态性(C3T5/C1T6、C2T5/C1T8、C3T5/C2T7)。结论成功建立的DHPLC分析PCA3基因启动子多态性的技术方法,可对PCA3基因启动子多态性进行基因型别鉴定。该方法具快速、准确、经济、高通量、重复性好、自动化等特点,为进一步研究PCa基因多态性提供了技术平台。
胡王强
孔凡慧
张晓霞
周武
陈兵华
胡理怀
陶志华
关键词:
前列腺肿瘤
前列腺癌标本库的初步建立及其应用价值
被引量:3
2011年
目的有计划地建立前列腺癌标本库,摸索科研标本库建立和管理的合理操作流程,为系统开展前列腺癌研究打好基础。方法采集前列腺癌患者初诊和治疗随访过程中及前列腺增生患者的静脉血及尿液标本,处理得到各类标本保存于一80℃冰箱。获取患者新鲜组织标本,保存于液氮,并收集肿瘤组织石蜡标本保存。结果标本库共计纳入184例病理确诊的前列腺癌患者、294例前列腺增生患者及3例PIN患者,各类标本均按预期方案处理及保存。以标本库工作为基础,课题组进行了大量的科研工作,取得了一定成果。结论前列腺癌标本库建立的流程已基本成熟,初步建立的标本库能为各项研究提供标本和相关资料来源。
沈默
陶志华
陈伟
吴秀玲
许刚
胡王强
张晓霞
孔凡慧
关键词:
前列腺癌
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