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犬瘟热病毒h基因克隆测序与原核表达被引量：14: 2009年; 根据GenBank中登录的犬瘟热病毒h基因序列设计一对引物,利用RT-PCR方法扩增出犬瘟热病毒弱毒疫苗株的h基因,将其插入到克隆载体pMD18-T中,经蓝白斑筛选及SalⅠ和XhoⅠ双酶切鉴定挑出阳性克隆进行序列测定,序列分析结果表明,该基因与GenBank上标准代表毒株序列完全同源;与扬州分离株、长春分离株、新疆分离株、日本分离株D85755同源性分别为90.6%、91.3%、90.5%、91%;与Onderstepoort、Convac株、美国分离株98-2666-2同源性较高,分别为97.7%、97.2%、98.1%。再将其定向克隆于原核表达载体pET-32a(+)中,转化感受态E.coliBL21细胞,经IPTG诱导表达分子质量约64 ku的重组H蛋白。; 孙园园宫文妮黄娟赵鹏单虎; 关键词：犬瘟热病毒 H基因克隆原核表达

沙门氏菌检测方法研究进展被引量：33: 2011年; 沙门氏菌是一种重要的人畜共患病原菌,建立一种快速而准确的检测方法一直是沙门氏菌检验研究的核心问题。作者通过查阅大量文献,对近年来沙门氏菌的检测进展进行了概述。; 孙园园赵鹏刘骏王富海钱科朱金连; 关键词：沙门氏菌

PRV、PCV-2、PPV多重PCR检测方法的建立及其应用被引量：5: 2009年; 根据GenBank上已发表的猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪Ⅱ型圆环病毒(PCV-2)、猪细小病毒(PPV)核苷酸序列,设计并合成能分别特异性扩增PRV、PCV-2、PPV的引物。经条件优化,建立了同时检测PRV、PCV-2、PPV的多重PCR方法,所扩增特异性产物片段大小分别为217bp、394bp、748bp。该方法不仅特异性强、敏感性高,还克服了对上述病原分别进行检测所带来的诸多弊端,为猪伪狂犬病、猪Ⅱ型圆环病、猪细小病的临床诊断和流行病学调查等研究提供了新手段。; 曲光刚沈志强管宇王金良肖跃强孙园园; 关键词：猪伪狂犬病病毒猪细小病毒

犬瘟热—犬冠状病毒双重PCR诊断方法的建立及初步应用被引量：1: 2014年; 为更好的开展犬腹泻病的诊断与疫情监控,根据犬瘟热病毒(canine distemper virus,CDV)和犬冠状病毒(canine coronavirus,CCV)的基因特征,建立了可快速鉴别诊断CDV和CCV的双重PCR方法。对GenBank中登录的21株CDV和17株CCV的野毒株、疫苗株基因组全序列进行比对分析,分别针对H蛋白和S蛋白编码区各设计了1对特异引物,分别扩增出大小为550和225bp的目的片段。回收目的片段插入到pMD18-T载体中进行测序鉴定,分别提取阳性质粒制备阳性标准DNA。通过优化试验条件,建立了检测CDV和CCV的双重PCR方法并对其进行灵敏度、特异性和临床验证。该双重PCR方法能特异的扩增CDV和CCV,且敏感性均达到0.1ng/μL总核酸量。与胶体金试纸条方法对比检测67份临床样品,符合率较高,CDV达到92.5%,CCV达到94%。; 孙园园赵鹏刘骏王云钱科; 关键词：犬瘟热病毒犬冠状病毒双重PCR

动物饲料中沙门氏菌环介导等温扩增(LAMP)快速诊断方法的建立被引量：11: 2012年; 根据GenBank公布的沙门氏菌高度保守的fimY蛋白基因序列,利用Primer explorer V4软件设计4条针对沙门氏菌fimY基因的特异性引物,通过对Mg2+浓度、dNTP浓度、反应温度、反应时间、特异性、敏感性、重复性和稳定系及符合率等方面,优化LAMP各种反应条件,建立针对沙门氏菌LAMP快速诊断方法。结果表明,该方法具有较强的特异性;比PCR检测方法敏感性高100倍,对沙门氏菌的最低检出量为6.2CFU/mL;对24份样品的3次检测结果与国标法完全一致。证明建立的针对fimY蛋白基因的LAMP检测方法操作简便,特异性强,敏感性高,适用于现场检测。; 孙园园赵鹏; 关键词：沙门氏菌饲料环介导等温扩增

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孙园园