刘晓华
- 作品数：15 被引量：32H指数：4
- 供职机构：广西大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划广西省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 水牛胎儿骨髓间充质干细胞的分离培养及其生物学特性研究
- 引言/目的 骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cell,BMSC)是一类具有多向分化潜能的成体干细胞.相关报道指出胎儿骨髓中的BMSCs无论从数量还是分化潜能性都优于成年动物.研...
- 雷钏邓凯阮秋燕马玉洁阮子芸刘晓华蒋建荣石德顺陆凤花
- 水牛asf1a基因克隆及高效敲除靶位点的筛选被引量：1
- 2019年
- 本研究旨在对水牛anti-silence factor 1a (asf1a)基因进行克隆并行生物信息学分析,并进一步筛选基于CRISPR/Cas9基因编辑系统的高效敲除asf1a基因位点。根据NCBI公布的牛asf1a基因mRNA序列设计特异性引物,以水牛GV期卵母细胞RNA反转录后的cDNA作为模板,通过PCR技术克隆获得asf1a基因序列片段,利用生物信息学分析方法,对克隆得到的序列进行和相应翻译的蛋白质进行了分析。在克隆得到的水牛asf1a基因序列上筛选3个PAM位点,并根据PAM位点构建3个gRNA载体(g1、g2、g3)以及相应的RGS载体,将pcDNA3.1-h Cas9连同gRNA、RGS 3种质粒按照3∶1∶1比例共转293T细胞,筛选高效的CRISPR/Cas9敲除位点。试验以水牛GV期的卵母细胞RNA作为模板,通过RT-PCR技术克隆获得asf1a基因序列,并据测序结果设计靶向区域筛选高效asf1a基因敲除位点。结果发现,水牛asf1a基因CDS区全长615 bp,编码204个氨基酸;多重序列分析显示,水牛asf1a基因核苷酸序列与黄牛、绵羊、猪、人、小鼠同源性分别达到了99%,98%,97%,96%,93%;蛋白质结构预测分析发现存在ASF1-hist-chap等结构,二级结构含有9个α螺旋、12个β折叠、14个T转角、14个无规则卷曲。系统进化树分析表明,水牛和黄牛亲缘性最接近。根据水牛asf1a设计的敲除载体转染293T和成纤维细胞后,细胞基因组进行T7E1酶切的结果表明,g1位点对水牛成纤维细胞敲除效率最高,达到93.82%,同时,sanger测序表明效率达17/20。本研究成功克隆了水牛asf1a基因和分析了其生物学信息,同时筛选出了asf1a的高效敲除位点,为研究水牛asf1a基因功能奠定基础。
- 刘晓华邓凯范威宏黄永军杜姗姗冯万有潘尔科卢嘉卡文冬梅陆凤花石德顺
- 关键词：水牛克隆
- 一种采用手工克隆技术构建水牛转基因克隆胚胎的方法
- 本发明一种采用手工克隆技术构建水牛转基因克隆胚胎的方法，属于生物工程的动物生物技术，特别是水牛繁殖与定向遗传改良领域。所述方法包括：(1)、用于构建转基因克隆胚胎的转外源基因水牛胎儿成纤维细胞的制备；(2)、用于构建转基...
- 陆凤花石德顺刘晓华吴柱莲邓凯罗婵刘庆友邓彦飞蒋建荣李湘萍韦英明
- 文献传递
- DNA甲基转移酶抑制剂在动物体细胞核移植研究中的应用被引量：1
- 2012年
- 甲基化对胚胎发育和机体形成具有重要的调控作用,体细胞核移植胚胎常常表现出异常的DNA甲基化,DNA甲基转移酶抑制剂能抑制细胞的DNA甲基化水平,从而达到提高体细胞核移植效率的作用。作者主要综述了DNA甲基转移酶抑制剂在动物体细胞核移植研究中的应用。
- 蒙丽娜罗婷柯浩刘晓华孙洪亮陆凤花石德顺
- 关键词：DNA甲基化体细胞核移植
- 组蛋白乙酰化与体细胞核移植关系的研究进展
- 过去三十年的研究中,相继发现组蛋白乙酰化转移酶和组蛋白去乙酰化转移酶参与许多生物发生过程,比如卵母细胞成熟和分裂,胚胎发育等,并在基因表达调控作用中起着重要作用。文章主要探讨组蛋白乙酰化在卵母细胞成熟分裂以及体细胞核移植...
- 孙洪亮陆凤花李楠黄章虎蒙丽娜刘晓华罗婷祝晓丽石德顺
- 关键词：组蛋白乙酰化组蛋白去乙酰化核移植卵母细胞胚胎
- 文献传递
- 徒手克隆技术(HMC)生产转基因水牛的初步研究
- 水牛转基因克隆技术对水牛的遗传改良具有重要意义。有研究指出，去透明带后的手工体细胞核移植技术的操作效率及囊胚发育率显著高于显微操作的体细胞核移植技术。但水牛徒手克隆技术平台的建立仍未取得实质性进展，本研究从去核、融合、培...
- 刘晓华
- 关键词：胚胎发育
- 文献传递
- 咖啡因对水牛卵母细胞成熟及体细胞核移植胚胎发育的影响
- MPF是调节细胞周期的一个非常重要的蛋白激酶,在卵母细胞减数分裂启动、GVBD发生、纺锤体形成、MⅡ期停滞的维持等方面均发挥重要作用.MPF的活性受Wee1、Myt1的调控.咖啡因是一种蛋白磷酸酶抑制剂,它能抑制Wee1...
- 杜姗姗刘晓华柯浩马玉洁王萍陆凤花石德顺
- 关键词：水牛卵母细胞体细胞核移植胚胎发育咖啡因
- 文献传递
- 线粒体移植对水牛卵母细胞发育潜能的影响被引量：4
- 2015年
- 本研究以水牛卵泡颗粒细胞作为线粒体的来源细胞,初步探讨水牛卵母细胞进行线粒体移植(MIT)后对其发育潜能的影响。试验比较了不同级别水牛卵母细胞mtDNA的拷贝数,并研究了水牛卵母细胞进行MIT后,其后续早期胚胎发育及胚胎线粒体膜电位(ΔΨm)的变化情况。结果显示:一级卵母细胞组的平均mtDNA拷贝数极显著高于二、三级卵母细胞组((202 101±74 432)vs(118 483±17 028),(39 177±7 938),P<0.01),二级卵母细胞组的平均mtDNA拷贝数极显著高于三级卵母细胞组((118 483±17 028)vs(39 177±7 938),P<0.01);孤雌激活处理后发现:一级卵母细胞组的卵裂率和囊胚率也都极显著高于二、三级卵母细胞组(P<0.01),而二级卵母细胞组激活后胚胎的卵裂率和囊胚率亦极显著高于三级卵母细胞组(P<0.01)。用Mito-Tracker探针标记的外源线粒体经移植后,会随着胚胎的发育而发生移动,分布到各个卵裂球中;且发现二级卵母细胞MIT组孤雌激活后的囊胚率显著高于对照组和空注组(27.3%vs 17.4%,7.84%,P<0.05),而三级卵母细胞MIT组激活后的囊胚率与对照组和空注组差异不显著(P>0.05);对胚胎ΔΨm检测发现,水牛植入前各时期胚胎ΔΨm总体呈上升趋势,线粒体移植后胚胎各时期的ΔΨm均显著高于对照组(P<0.05)。综上表明:不同质量的水牛卵母细胞其mtDNA拷贝数存在显著差异,且mtDNA拷贝数与卵母细胞质量和发育能力成正相关;通过移植外源线粒体可以提高二级水牛卵母细胞的发育潜能。
- 高亚可陆凤花吴柱连马帆刘晓华杜姗姗石德顺
- 关键词：线粒体膜电位水牛卵泡颗粒细胞
- 沼泽型水牛NANOG基因5′调控序列克隆与功能分析被引量：6
- 2013年
- 为探讨沼泽型水牛NANOG基因的表达调控模式,本研究扩增克隆了广西本地沼泽型水牛NANOG基因的5′调控序列片段,设计了-1 213、-745、-425和-312bp 4个缺失体片段,分别构建成EGFP报告载体。应用显微注射报告载体生产转基因水牛和猪胚胎,并转染水牛胎儿成纤维细胞。结果发现,EGFP的表达仅限于水牛囊胚内细胞团。各缺失体在猪4.5d胚胎中均能启动下游EGFP的表达,转录活性两两之间差异均极显著,按活性从大到小依次为-745、-425、-1 213和-312bp。各缺失体报告载体转染水牛成纤维细胞48h后均可见少数细胞发光,其中-425bp活性极显著高于其他缺失体,-1 213与-745bp之间无显著差异,二者均极显著高于-312bp。以上结果说明,水牛NANOG基因翻译起始位点上游-1 213bp在水牛囊胚中可以调控NANOG在内细胞团中的特异性表达;-1 213～-745bp含有多能细胞特异性的抑制子元件;-745～-425bp含有多能性细胞特异性的增强子元件;-425～-312bp含有非多能细胞特异性的增强子元件。
- 崔奎青张会娜刘帅刘晓华杨素芳刘庆友石德顺
- 关键词：沼泽型水牛NANOG克隆
- 广西沼泽型母水牛发情淡季生殖激素的变化规律研究被引量：8
- 2012年
- [目的]研究发情淡季母水牛生殖激素的变化规律及各激素之间的相互关系。[方法]采用酶联免疫分析方法(ELISA)测定了发情淡季广西沼泽母水牛血样中促卵泡素(FSH)、促黄体素(LH)、抑制素(INH)、雌二醇(E2)和孕酮(P4)的浓度变化,并结合B超技术检测了母水牛卵泡在发情周期中的变化。[结果]广西沼泽型母水牛血样中E2和P4浓度呈波动式变化。其中,E2分别在排卵后第13天d下降到基础水平。FSH在排卵后的第10天出现峰值;LH在排卵前2天出现峰值;INH在排卵后第4天出现峰值。各种激素之间存在相关性。FSH、LH和INH三者两两之间存在极显著相关性,INH与E2、P4存在显著相关性,E2与P4存在极显著相关性。[结论]该研究可为指导适时配种、提高广西本地沼泽型母水牛的繁殖力提供理论参考。
- 祝晓丽许惠艳刘晓华谭世俭卢克焕石德顺
- 关键词：沼泽型水牛生殖激素酶联免疫吸附测定
