- 组织中全基因组DNA甲基化的液相色谱-串联质谱分析被引量：6
- 2010年
- 建立液相色谱-串联质谱测定组织中全基因组DNA甲基化水平的方法。采用苯酚氯仿提取组织DNA,提取的DNA用88%甲酸在140℃下裂解,DNA裂解液加入同位素胞嘧啶作内标,经N2吹干后,用甲醇溶解,以液相色谱-串联质谱检测胞嘧啶和5-甲基胞嘧啶的含量,并计算全基因组中DNA甲基化的水平。结果表明,胞嘧啶的线性范围为1～100μg·L^-1相关系数为0.997 4,相对标准偏差为0.70%～4.09%;5-甲基胞嘧啶的线性范围为1～50μg·L^-1相关系数为0.994 8,相对标准偏差为0.60%～4.81%。胞嘧啶和5-甲基胞嘧啶的检出限为1 pg,日内相对标准偏差为1.86%～4.67%,日间相对标准偏差为3.72%～4.68%,胞嘧啶和5-甲基胞嘧啶的加样回收率为86.52%～105.14%。本研究所建立的方法检测组织中DNA甲基化程度,具有专一性强、操作简便的优点,能较好的满足全基因组DNA甲基化检测的要求。
- 张俊杰张立坚刘春安张良滔蔡春
- 关键词：DNA甲基化胞嘧啶
- DNA甲基化的LC/MS/MS分析
- DNA甲基化是表观遗传学的重要组成部分，它在不改变基因组中碱基排序的情况下影响基因转录和表达，它涉及到个体发育，细胞增殖、分化和基因表达调控等多方面的生物学功能，与肿瘤的发生和发展密切相关[1]。DNA甲基化的准确检测对...
- 张俊杰张立坚张良滔刘春安蔡春
- 关键词：DNA甲基化表观遗传学基因转录
- 文献传递
- 亲水作用色谱法测定组织中全基因组DNA甲基化水平被引量：2
- 2011年
- 建立了亲水作用色谱（HILIC）测定组织中全基因组DNA甲基化水平的方法。采用苯酚-氯仿提取组织中的DNA,提取的DNA用88%甲酸在140℃下裂解,经N2吹干后,加乙腈-水（9∶1,v/v）溶解,用Waters BEH HILIC柱进行分离,在277nm波长下检测胞嘧啶（Cyt）及5-甲基胞嘧啶（5-mCyt）含量。结果表明,以乙腈-10mmol/L甲酸铵溶液（94∶6,v/v）为流动相,流速为0.5mL/min,Cyt与5-mCyt分离较好,保留时间分别为2.6与3.1min。胞嘧啶的线性范围为1~900μmol/L,相关系数为0.999 9;5-甲基胞嘧啶的线性范围为1~64μmol/L,相关系数为0.999 8。胞嘧啶和5-甲基胞嘧啶的检出限为54nmol/L（柱中为0.54pmol）,定量限为250nmol/L（柱中为2.5pmol）;在5~900μmol/L的添加水平下,胞嘧啶和5-甲基胞嘧啶的平均加标回收率为94.7%~100.5%,相对标准偏差小于1.48%。用该方法检测了结肠癌组织中DNA甲基化水平,结果显示该癌组织中全基因组的DNA甲基化均值为4.0%。该方法快速、简单,稳定性好,灵敏度较高,能满足全基因组DNA甲基化的检测要求。
- 张良滔张立坚张俊杰刘春安蔡春
- 关键词：亲水作用色谱结肠癌
