刘振兴
- 作品数：3 被引量：1H指数：1
- 供职机构：济南大学更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- E731K FGFR2突变基因真核表达载体的构建
- 目的:构建E731KFGFR2-3×FlagCMV真核表达载体,为研究E731K FGFR2突变基因的功能奠定基础。方法:采用定点突变试剂盒对正常人源FGFR2基因进行定点突变,携带有XhoⅠ和XbaⅠ酶切位点的PCR引...
- 刘振兴崔亚洲栾静周小艳韩金祥
- 关键词：FGFR2
- 文献传递
- Apert综合征致病基因FGFR2E731K突变对成骨细胞分化及MVs矿化能力的影响
- 成纤维细胞生长因子受体（fibroblast growth factor receptors，FGFRs）家族有4种酪氨酸激酶家族成员(FGFR1-4)，他们可与22种FGFs配体形成二聚体激活PLC-γ、Ras/Raf...
- 刘振兴
- 关键词：APERT综合征致病基因成骨细胞分化矿化能力突变位点
- 文献传递
- 成纤维细胞生长因子受体基因野生型和E731K突变型真核表达质粒的构建及鉴定被引量：1
- 2014年
- 目的构建成纤维细胞生长因子受体(fibroblast growth factor receptor 2,FGFR2)基因野生型和E731K突变型的真核表达载体,并进行鉴定。方法利用基因定点突变试剂盒,定点突变FGFR2基因,获得其E731K突变的突变型基因,通过设计含有XbaⅠ、XhoⅠ限制性内切酶识别序列的引物分别扩增FGFR2基因野生型和E731K突变型的cDNA,克隆至质粒pcDNA3.1-EGFP上,构建重组表达质粒pcDNA3.1-FGFR2-EGFP和pcDNA3.1-FGFR2E731K-EGFP,利用X-tremeGENE HP DNA将质粒转染至HEK293细胞,采用实时荧光定量PCR法及Western blot法检测FGFR2表达水平。结果经定点突变已获得野生型的突变型FGFR2基因,碱基序列与设计序列完全一致,cDNA第2191位碱基G突变为A。重组表达质粒pcDNA3.1-FGFR2-EGFP和pcDNA3.1-FGFR2E731K-EGFP经双酶切及测序鉴定证明构建正确。质粒转染HEK293细胞后,荧光显微镜下均可见绿色荧光蛋白表达;质粒pcDNA3.1-FGFR2-EGFP和pcDNA3.1-FGFR2E731K-EGFP转染组中FGFR2 mNRA和蛋白表达水平均明显高于质粒pcDNA3.1-EGFP转染组和空白对照组(P<0.05)。结论成功构建了FGFR2基因野生型和E731K突变型的真核表达质粒,并在HEK293细胞中成功表达,为进一步研究FGFR2基因奠定了基础。
- 刘振兴崔亚洲刘超栾静周小艳韩金祥
- 关键词：成纤维细胞生长因子受体野生型突变型真核细胞基因表达
