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串联亲和纯化技术联合质谱鉴定乳腺癌细胞中LOX相互作用蛋白: 目的:构建带StrepII/FLAG串联亲和标签的重组赖氨眈氧化酶(Lysyloxidase， LOX)蛋白慢病毒表达载体并在乳腺癌MOA-MB-231细胞中表达，利用StrepII/FLAG标签纯化富集LOX的复合体，...; 刘侠; 关键词：赖氨酰氧化酶相互作用蛋白慢病毒载体; 文献传递

利用免疫共沉淀技术验证LOX与XRCC5在人乳腺癌细胞内的相互作用: 2016年; 目的:探讨赖氨酰氧化酶(LOX)和XRCC5在人乳腺癌细胞内是否存在相互作用。方法:构建含有LOX全长及插入LOX基因序列C端的2个StrepⅡ和一个Flag标签的慢病毒表达载体GV303/EGFP(LOX-SF),经酶切鉴定正确后,将其转染MDA-MB-231人乳腺癌细胞,使用荧光定量PCR和蛋白质印迹实验对细胞中重组蛋白LOX-SF进行检测。利用免疫共沉淀技术验证LOX与XRCC5之间的相互作用,并通过间接免疫荧关分析LOX与XRCC5在MDA-MB-231人乳腺癌细胞的定位情况。结果:重组LOX蛋白在MDA-MB-231人乳腺癌细胞中稳定表达。LOX抗体免疫共沉淀下来的蛋白复合物中检测到XRCC5,同时XRCC5抗体免疫共沉淀下来的蛋白复合物中也检测到LOX。利用间接免疫荧光分析,LOX与XRCC5在细胞核内存在共定位。结论:LOX与XRCC5在人乳腺癌细胞内存在相互作用,并且在细胞核内共定位。; 周文婷刘剑仑刘侠杨华伟韦薇; 关键词：LOX 免疫共沉淀相互作用

串联亲和纯化技术在研究细胞内相互作用蛋白质中的应用被引量：1: 2014年; 为了进一步研究蛋白质功能并建立蛋白质在细胞内的相互作用网络,各种研究相互作用蛋白质的方法应运而生,串联亲和纯化(TAP)技术就是其中之一。TAP利用基因重组技术将标签基因融合入靶蛋白基因,转入细胞系后表达带标签的靶蛋白,使用标签的特异性对靶蛋白进行纯化和相关研究,而该技术在实际运用会遇到标签选择、标签位置的选择和重组表达等一系列问题,该文介绍TAP技术在实际使用中的技术要点。; 刘侠韦薇; 关键词：串联亲和纯化相互作用蛋白质蛋白质组学

串联亲和标签LOX蛋白慢病毒表达载体的构建及在乳腺癌细胞中的表达被引量：1: 2015年; 目的:为了研究赖氨酰氧化酶(Lysyl Oxidase,LOX)及其相互作用蛋白质在乳腺癌中的功能,构建带StrepⅡ/FLAG串联亲和标签的重组LOX蛋白慢病毒表达载体并在乳腺癌细胞MDA-MB-231中表达。方法:设计引物通过聚合酶链式反应获得带StrepⅡ/FLAG串联亲和标签的LOX蛋白(LOX-SF)的亲本质粒,双酶切后鉴定测序克隆至GV303表达载体,连同慢病毒包装质粒共同转染293T得到GV303/LOX-SF慢病毒,将其转染MDA-MB-231细胞,使用荧光定量PCR和蛋白质印迹实验对细胞中重组蛋白LOX-SF进行检测。结果:通过串联亲和纯化获得LOX-SF重组蛋白,使用标签抗体成功鉴定到LOX-SF重组蛋白在MDA-MB-231细胞内稳定表达。结论:GV303/LOX-SF的构建,使带StrepⅡ/FLAG融合标签的LOX蛋白在MDA-MB-231中成功表达及纯化,为筛选和研究LOX及其相互作用蛋白在乳腺癌细胞内的功能奠定了实验基础。; 刘侠刘剑仑蒋奕唐玮杨华伟韦薇; 关键词：串联亲和纯化赖氨酰氧化酶慢病毒载体相互作用蛋白质

串联亲和纯化技术联合质谱鉴定乳腺癌细胞中LOX相互作用蛋白: <正>目的构建带StrepII/FLAG串联亲和标签的重组赖氨酰氧化酶(Lysyl oxidase,LOX)蛋白慢病毒表达载体并在乳腺癌MDA-MB-231细胞中表达,利用StrepII/FLAG标签纯化富集LOX的复合...; 刘剑仑刘侠韦薇杨华伟蒋奕唐玮; 关键词：乳腺癌细胞赖氨酰氧化酶相互作用蛋白; 文献传递

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刘侠