您的位置： 专家智库 > >

付向晶

作品数：9 被引量：29H指数：4
供职机构：西北农林科技大学动物科技学院更多>>
发文基金：国家自然科学基金“十一五”国家科技支撑计划更多>>
相关领域：农业科学生物学更多>>

合作作者

文献类型

  • 8篇期刊文章
  • 1篇学位论文

领域

  • 7篇农业科学
  • 2篇生物学

主题

  • 5篇病毒
  • 3篇酵母
  • 3篇酵母双杂交
  • 2篇蛋白
  • 2篇野鸟
  • 2篇遗传进化
  • 2篇遗传进化分析
  • 2篇疫病
  • 2篇新城疫
  • 2篇新城疫病
  • 2篇新城疫病毒
  • 2篇进化分析
  • 2篇基因
  • 1篇毒力
  • 1篇毒力测定
  • 1篇诱饵
  • 1篇诱饵载体
  • 1篇圆环病毒
  • 1篇融合标签
  • 1篇生产方法

机构

  • 9篇西北农林科技...

作者

  • 9篇付向晶
  • 8篇杜恩岐
  • 8篇杨增岐
  • 7篇王兴龙
  • 4篇贺生芳
  • 4篇刘阳坤
  • 3篇刘海金
  • 3篇张渭东
  • 3篇郝华芳
  • 3篇高小龙
  • 3篇胡湘云
  • 3篇王燕平
  • 3篇陈胜利
  • 3篇唐文雅
  • 2篇慕国辉
  • 2篇党如意
  • 2篇刘丹丹
  • 2篇张鹏
  • 2篇王丹阳
  • 1篇张淑霞

传媒

  • 5篇畜牧兽医学报
  • 2篇中国兽医学报
  • 1篇西北农林科技...

年份

  • 2篇2016
  • 1篇2015
  • 1篇2014
  • 4篇2013
  • 1篇2012
共 9 条 记 录，以下是 1-9
全选 清除 导出
排序方式：
1种高效纳米抗体生产方法的建立
2013年
为实现纳米抗体的简单、高效、低成本表达,在已有的商品化原核表达载体的基础上,对其进行改造,在靶蛋白N端分别融合3种不同串联融合标签His-Intein、His-Sumo-Intein和His-Trx-Intein,以本实验室筛选的抗猪圆环病毒2(PCV2)Cap蛋白的纳米抗体基因为靶蛋白,构建了pHSIE-Nb(His-Sumo-Intein)、pHSIE-intein-Nb(His-Intein)和pET32a-intein-Nb(His-Trx-Intein)3种表达载体。分别转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导融合蛋白表达,在不同表达条件下比较,选取可溶性表达最好的载体大量表达,用Ni-NTA金属螯合层析柱进行纯化,并利用Intein自剪切去除标签,纯化纳米抗体。且用制备的纳米抗体作为包被抗体,做双抗体夹心ELISA检测其反应原性。结果显示3种不同融合标签的纳米抗体都可成功表达,而融合His-Trx-Intein标签的载体可溶性表达量最高。融合蛋白经pH7、25℃剪切24h后可以得到不含融合标签的纳米抗体。双抗体夹心ELISA检测,统计学分析,制备的抗PCV2Cap纳米抗体蛋白包被的样品组与阳性对照组差异不显著(P>0.05),因此制备的纳米抗体是有活性的。本研究成功建立一种高效表达、纯化纳米抗体的方法,可以增加蛋白表达量、可溶性和简化蛋白纯化过程,获得具有活性的无标签的纳米抗体。为其进一步的纳米抗体理论研究和生产应用提供技术支持。
贺生芳付向晶刘阳坤慕国辉刘海金王兴龙杜恩岐杨增岐
关键词：融合标签表达纯化
双峰驼天然重链抗体可变区酵母双杂交文库的构建与鉴定被引量：3
2015年
构建双峰驼天然重链抗体可变区(VHH)酵母双杂交文库,并对文库质量进行鉴定。采集未经免疫的6月龄雌性双峰驼外周血、骨髓、脾和淋巴结,并从外周血中分离淋巴细胞。抽提总RNA,反转录为cDNA,用2对引物经过2轮PCR扩增得到400bp左右的双峰驼VHH片段。根据Clontech公司Mate&PlateTMlibrary construction system使用手册,将带有同源臂的VHH片段与线性化的pGADT7-Rec质粒共转化Y187酵母感受态细胞,转化产物涂布SD/-Leu平板,30℃倒置培养3~5d后,收集平板上的所有克隆,即为双峰驼天然重链抗体可变区酵母双杂交文库。对文库的滴度、重组效率及多样性进行鉴定。结果显示,本研究构建的双峰驼天然重链抗体可变区酵母双杂交文库库容为2.07×107,滴度为7.6×108cfu·mL-1。随机挑取47个独立克隆进行菌落PCR鉴定,43个含有VHH片段,重组率为91.5%;选取其中19个测序,均为独立克隆,且多样性好。该研究成功构建双峰驼天然重链抗体可变区酵母双杂交文库,且文库质量满足要求,为进一步获得特定抗原的VHH奠定了基础。
胡湘云高小龙付向晶刘丹丹范文涛王燕平杜恩岐王兴龙党如意杨增岐
关键词：双峰驼酵母双杂交
秦岭野鸟源新城疫病毒致病性与F、HN基因分子特征分析被引量：5
2013年
为研究新城疫病毒(NDV)在秦岭地区野生鸟群中的流行情况,在秦岭地区采集健康野鸟咽喉、泄殖腔拭子各252份,进行NDV的分离、鉴定,并对NDV分离株进行生物学特性研究和遗传进化分析。结果共分离获得5株野鸟源NDV,其致病指数MDT、ICPI和IVPI分别为60.0～76.8h、0.900～1.261、0.41～0.81;对F基因(47～420bp)进行遗传进化分析,5株分离株均属于基因VIb型,F蛋白裂解位点为112 RRQKRF117;HN基因氨基酸相似性为99.5%～99.8%,与鸽源基因VI型NDV相似性为91.4%～98.0%,与LaSota、F48E9相似性分别为87.1%～87.4%、89.0%～89.3%。上述结果表明,基因VIb型NDV在秦岭地区健康野生鸟类中流行,可能源于鸽源NDV,并具有强毒力的分子特征,但对鸡的表现为中等致病力,说明野鸟NDV具有独特的分子特征和致病性。
张渭东王丹阳唐文雅王兴龙姜振国陈胜利幕国辉刘海金贺生芳付向晶郝华芳刘阳坤杜恩岐杨增岐
关键词：F基因HN基因遗传进化分析
秦岭北麓关中地区野鸟源基因Ⅸ型新城疫病毒病原学监测及分离株毒力测定被引量：4
2013年
为评价秦岭北麓关中地区野鸟源基因Ⅸ型新城疫病毒（NDV）流行及毒力情况，对374份源于该区域健康野鸟的咽喉、泄殖腔拭子进行病毒分离与鉴定，并对NDV分离株进行生物学特征和遗传进化分析。结果共分离到5株野鸟源NDV（包括2株候鸟源），其致病指数MDT、ICPI、IVPI差异较大，分别为37．2～64．8h，0．425～1．638，2．04～2．76。F基因（535bp）推导氨基酸序列和同源性分析显示，5株NDV分离毒均具有强毒的融合（F）蛋白裂解位点^112R—R—Q-R—R—F^117，5株分离毒间同源性高达99．8％～100．0％。F基因高变区（42～420nt，374bp）分析显示5株分离毒均属于我国特有的基因Ⅸ型NDV，与我国早期的基因Ⅸ型NDV流行株F48E9亲缘关系很近（核苷酸同源性为99．4％～99．6％），而与La Sota和V4等传统疫苗株及目前家禽中流行基因Ⅶ型NDV毒株亲缘关系较远。本研究表明，健康野鸟为基因Ⅸ NDV的携带者，尽管首次获得的5株野鸟源基因Ⅸ型NDV毒株生物学特征差异较大，但均具有强毒的分子生物学特征及致病性，提示对周边环境和家禽养殖业存在潜在威胁。
段旭基张鹏吴朋朋马静陈胜利郝华芳张定全韩青松付向晶张渭东杜恩岐杨增岐
关键词：野鸟毒力遗传进化分析
新城疫病毒F蛋白纳米抗体的筛选及活性鉴定被引量：8
2016年
旨在筛选新城疫病毒(NDV)F蛋白的纳米抗体,并对筛选的抗体活性进行初步鉴定。以NDV F蛋白中和表位构建诱饵,利用酵母双杂交技术对双峰驼天然重链抗体可变区(VHH)酵母双杂交文库进行筛选,获得4株VHH抗体序列。挑选其中2株最符合VHH特征的进行原核表达与纯化,并对2株VHH活性进行鉴定。ELISA结果显示,VHH1与VHH2与NDV病毒的反应性显著高于阴性对照(P<0.05),表明VHH与NDV病毒反应活性良好;Western blot结果显示,2株VHH可特异性识别F蛋白;细胞中和试验结果表明,2株VHH抗体均具有一定的中和活性。以上结果提示本研究成功筛选出2株活性较好的抗NDV F蛋白的VHH抗体,为VHH在NDV防控中的应用奠定了基础。
高小龙胡湘云付向晶王燕平仝丽娜王海新王兴龙张淑霞萧飒杜恩岐杨增岐
关键词：新城疫病毒F蛋白酵母双杂交
猪圆环病毒2型（PCV2）Cap相互作用蛋白及其纳米抗体的筛选与功能研究
猪圆环病毒2型（Porcine circovirus type2，PCV2）是一种共价闭合的单股环状负链DNA病毒，是已知的最小动物病毒之一，为断奶后仔猪多系统衰竭综合征（Postweaning multisystemi...
付向晶
文献传递
鸡IFN-β启动子荧光素酶报告载体的构建与活性检测被引量：2
2013年
构建并鉴定鸡β干扰素(IFN-β)基因启动子荧光素酶报告基因载体并进行转录活性分析。通过PCR方法从鸡基因组DNA中克隆鸡IFN-β基因启动子,亚克隆到含萤火虫荧光素酶报告基因pGL3-basic载体上,构建鸡IFN-β基因启动子荧光素酶报告基因载体pChIFN-β-luc;用脂质体法将构建的报告基因载体瞬时转染鸡胚成纤维细胞系DF-1,并设置空白对照组和poly(I:C)处理组,检测荧光素酶的活性。经PCR扩增出鸡IFN-β基因启动子序列,双酶切及测序鉴定各重组体构建正确;转染后检测,pChIFN-β-luc具有转录活性,并且在poly(I:C)的刺激下其荧光素酶活性显著升高。本试验为进一步研究鸡IFN-β基因转录调控机制奠定了基础。
陈胜利唐文雅郝华芳王兴龙刘阳坤付向晶张鹏贺生芳杜恩岐杨增岐
关键词：启动子
1株猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因缺失毒株的基因组特征与演化分析被引量：6
2012年
为了解陕西猪场猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的变异情况,对发病猪场进行PRRSV分离,采用RT-PCR方法对分离株NSP2基因和ORF5基因分别进行扩增,测序后进行序列分析。结果显示:得到1株PRRSV,命名为HZ1007株,属于美洲型;其NSP2 481位和533—561位存在30个氨基酸的不连续缺失,与高致病性PRRSV分子特征相似;GP5 85—95位氨基酸处出现了11个氨基酸的连续缺失;系统进化分析发现HZ1007与国内高致病性代表毒株HUN4、JXwn06、SY0608等亲缘关系较近,且与HUN4株相似性最高,为97.4%。本研究发现了GP5缺失型PRRSV,这在国内外尚属首例,且HZ1007株与高致病性PRRSV亲缘关系较近,在系统进化分析树上与高致病性毒株同属一个分支,其可能是高致病毒株新的变异型,其致病性和生物学特性需进一步研究分析。
付向晶王丹阳王兴龙张渭东宋祥军刘阳坤唐文雅慕国辉刘海金贺生芳杜恩岐杨增岐
关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP2基因
新城疫病毒HN蛋白酵母双杂交诱饵载体的构建及鉴定
2016年
【目的】应用酵母双杂交技术构建新城疫病毒的血凝素-神经氨酸酶(HN)蛋白线性中和表位区的诱饵载体pGBKT7-HN-neu,为筛选靶向新城疫病毒HN蛋白的中和性纳米抗体奠定基础。【方法】合成HN蛋白的线性中和表位区HN-neu,将其克隆至酵母双杂交系统诱饵载体pGBKT7中,构建诱饵载体pGBKT7-HN-neu,经酶切鉴定和测序验证正确后,将pGBKT7-HN-neu转化酵母菌Y2H Gold,检测其在酵母细胞中的毒性和自激活作用。【结果】成功合成了HN-neu,构建的pGBKT7-HN-neu在酵母细胞Y2H Gold中无毒性和自激活能力。【结论】成功构建了诱饵载体pGBKT7-HN-neu。
胡湘云高小龙付向晶王燕平刘丹丹常旭东刘蓬杜恩岐王兴龙党如意杨增岐
关键词：新城疫病毒HN蛋白酵母双杂交系统诱饵载体
全选 清除 导出
共1页<1>
聚类工具0