万家余 作品数:91 被引量:140 H指数:5 供职机构: 军事医学科学院军事兽医研究所 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 吉林省科技发展计划基金 吉林省自然科学基金 更多>> 相关领域: 农业科学 生物学 医药卫生 化学工程 更多>>
半定量RT-PCR法检测SPRN基因在小鼠各组织中的mRNA表达 被引量:1 2010年 [目的]研究SPRN基因在不同组织中的表达水平和机制。[方法]选择3种不同品系的小鼠为试验材料,利用半定量RT-PCR方法,测定不同品系小鼠各组织中SPRN基因的mRNA表达水平,并对其循环次数进行研究。[结果]SPRN基因主要在脑组织中表达,在肺脏和胃中表达量较低,而在淋巴结和脾脏中仅有微量的表达;半定量RT-PCR体系的最佳扩增循环数为23。[结论]成功地建立了检测SPRN基因mRNA表达的半定量RT-PCR方法,该方法具有简便、快速、准确和精密度高等优点。 王海鹰 王惟 万家余 廖翔宇 徐静 廖鹏 高宏伟关键词:半定量RT-PCR MRNA 逆向转运过程中ARFRP1与蓖麻毒素相互作用的研究 2008年 利用MTT法检测了ADP糖基化因子相关蛋白1(ADP-ribosylation factor-related protein 1,ARFRP1)在蓖麻毒素逆向转运中的作用。研究发现,转染ARFRP1和ARFRP1(Q97L)后,蓖麻毒素对细胞的毒性增强,而转染ARFRP1(T31N)后,毒性有所降低;用brefeldin A阻断高尔基体上的蛋白运输后,转染ARFRP1和ARFRP1(Q97L)后的细胞依然对蓖麻毒素敏感;低温培养细胞,过量表达ARFRP1的细胞抵抗毒素的能力与其他细胞相比变化明显。结果说明ARFRP1能够促进蓖麻毒素在细胞内的逆向转运。 马青原 高宏伟 刘文森 万家余 廖鹏关键词:蓖麻毒素 逆向转运 细胞毒性 高效液相色谱法检测肉毒毒素A方法的建立 肉毒毒素(Botulinum toxin)最早由Van Ermengen E在1897年调查比利时Ellezelles暴发的一次食源性传染病时发现的,是迄今已知毒性最强的物质。它是由肉毒梭状芽孢杆菌(Clostridiu... 李吉平 徐静 刘琳娜 孙玉成 刘文森 万家余 高宏伟关键词:肉毒毒素A HPLC 文献传递 朊病毒病生物标记microRNA-142-3p可视化快速检测 2016年 为了更快捷、方便的检测朊病毒病,根据已有报道确定micro RNA-144-3p作为朊病毒病的生物标记,通过mi RBase数据库公布的micro RNA-142-3p的核酸序列,设计特异性标记有生物素的俘获探针和标记有FAM的检测探针,从而建立了纳米金偶联核酸试纸条的高效,快捷,可视化检测方法。结果表明:该检测方法具有良好的特异性和较高的灵敏度(0.005 nmol·L-1)。该检测试纸条的建立在朊病毒病预防,控制,诊断过程中具有一定实际意义。 张腾龙 薄乐 英那 郝文丽 武智勇 王雄 孟轲音 万家余 陈志宝关键词:朊病毒 生物标记 可视化 PTD-NPY融合基因的克隆及其在毕赤酵母中的分泌表达 被引量:3 2008年 应用重叠延伸PCR方法扩增HIV-1TAT蛋白转导结构域(PTD)与鼠源神经肽Y(NPY)的融合基因,克隆目的片段并插入酵母表达载体pPICZαA,构建成重组表达质粒pPICZα-PTD-NPY。PCR和酶切鉴定及测序正确后,经限制性内切酶SacI线性化重组表达质粒并通过电转化整合到巴斯德毕赤酵母菌GS115的染色体基因组中。阳性重组酵母菌用含1%甲醇的培养基诱导其分泌表达。经过120h的诱导,取上清浓缩除盐后进行SDS-PAGE电泳,表明该系统成功表达了PTD-NPY融合蛋白,Western blotting实验证实表达产物具有特异性。获得真核表达的PTD-NPY融合蛋白,为下一步的应用研究提供了物质基础。 孙玉成 周凤秋 万家余 高宏伟关键词:蛋白转导 融合基因 克隆 分泌表达 梅花鹿正常朊蛋白特异性片段的高效表达和纯化 2009年 根据梅花鹿正常朊蛋白基因序列设计特异引物,采用PCR方法扩增出梅花鹿正常朊蛋白特异性基因片段PRNP(67~699),将该基因克隆至pGEX-6p-1载体中,构建pGEX-6p-1-PRNP原核表达质粒。将重组质粒转化至Rosetta—gami(DE3)受体菌中,IPTG(1.0mmol/L)37℃诱导培养4h,经SDS-PAGE和Western—blotting鉴定,结果表明目的蛋白获得高效表达。通过GST—ResinKit纯化,得到质量浓度为417.8mg/L的蛋白,并具有抗原性。 白雪 沈景林 万家余 李吉平 高宏伟关键词:梅花鹿 朊蛋白 原核表达 纯化 爪蟾抗菌肽的人工合成及对菌膜作用的实验研究 2013年 目的探讨爪蟾抗菌肽(magainin)的人工合成及对金黄色葡萄球菌细胞膜的作用。方法利用氨基酸固相合成的方法合成爪蟾抗菌肽,高效液相色谱法进行纯化,质谱鉴定后,得到的爪蟾抗菌肽纯度在99%以上。将爪蟾抗菌肽作用于引起感染性心内膜炎的金黄色葡萄球菌ATCC25923,以PBS缓冲液作为阴性对照,TritonX-100作为阳性对照。结果爪蟾抗菌肽作用于引起心内膜炎的金黄色葡萄球菌后,ATCC25923的630 nm值从0.166下降到0.138,负染后透射电镜观察,发现细菌表面存在破损成小孔的地方,细胞膜界限模糊不清,甚至细胞膜完全溶解。爪蟾抗菌肽通过破坏细菌细胞膜而导致细菌的死亡。结论爪蟾抗菌肽能够提高细菌细胞膜的通透性。 鞠传静 梁斌斌 万家余关键词:心内膜炎 金黄色葡萄球菌 蓖麻毒素A链在麦胚无细胞系统中的表达 被引量:5 2015年 本试验利用麦胚无细胞系统表达蓖麻毒素A链(RTA):通过PCR方法扩增蓖麻毒素A链基因序列并连接至pMD18-T载体。将测序正确的RTA序列克隆到Flexi表达载体,获得Flexi-RTA重组质粒。将该重组质粒加入到麦胚无细胞表达系统中进行表达。表达产物经SDS-PAGE电泳分析相对分子质量约为32 000,通过Western blot、ELISA实验鉴定为RTA。本方法表达的RTA在蓖麻毒素诊断、疫苗研发、抗癌药物研制等方面具有广阔应用前景。 肖世峰 许娜 姚林芳 孙成彪 刘洋 黄燕霞 李松岩 万家余 王兴龙 刘文森关键词:蓖麻毒素A链 蓖麻毒素在细胞内逆向转运途径的研究进展 2009年 蓖麻毒素(Ricin)是一种毒蛋白,能抑制蛋白质合成。近年来被用来合成肿瘤导向药物一免疫毒素,在临床应用中仍具有一定的副作用。研究Ricin在细胞内的逆向转运途径有助于其在临床应用中更加完善。本文就Ricin在细胞内的逆向转运途径作一综述。 廖鹏 高宏伟 马青原 刘文森 万家余 刘林娜关键词:蓖麻毒素A链 逆向转运 内吞 免疫毒素 MALDI质谱成像技术在狂犬病病毒小鼠组织内定位研究中的应用 被引量:1 2012年 目的:建立基于MALDI质谱的狂犬病病毒小鼠脑组织内质谱成像实验方法,寻找狂犬病病毒脑组织内定位标记物。方法:制备冰冻切片,进行组织上原位酶解及基质覆盖,利用MALDI质谱扫描成像,以及FlexImaging 2.1软件分析,对差异肽段进行二级质谱鉴定。结果:初步鉴定出了四段狂犬病病毒肽段,可作为组织内狂犬病病毒定位标志物。结论:为进一步提高狂犬病病毒组织内定位的精确度奠定了研究基础。 徐静 杨松涛 万家余 张守峰 许娜 李楠 许琴 刘文森关键词:MALDI 狂犬病 病毒 分子成像