陈大堤
- 作品数：18 被引量：24H指数：2
- 供职机构：中山大学中山医学院更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金国家自然科学基金国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学电子电信更多>>
- 二次固定法在内耳耳蜗切片标本制作中的应用
- 2014年
- 内耳耳蜗的结构非常特殊，由两套管道套叠而成：外层骨蜗管（bony cochlear duct）和内层膜蜗管（membranous cochlear duct）[1-2]。特殊的结构导致了标本制作时膜蜗管内组织极易自溶、取材耗时久、不易及时固定等难题。许多研究者采用了各自不同方法制作内耳切片标本，比较经典的有耳蜗开窗固定法[3]、颈动脉灌注法[4]、石蜡包埋切片法[5-8]、OCT包埋冷冻／恒冷切片法[9-10]、非脱钙冷冻切片法[11-12]、石蜡火棉胶双重包埋切片法[3,13]、火棉胶包埋切片法等[14]，但这些方法不是未能取得满意的效果，就是制作过程复杂、周期长，难以批量制作切片标本。本研究采用心脏灌注在第一时间对豚鼠内耳组织进行初步迅速固定，再在耳蜗顶尖部及底部钻孔后二次充分固定，保留内耳膜蜗管的完整结构，以期找出一种理想的内耳切片标本制作方法。
- 蒋竹奕胡黎平冯绮琪唐开宇李博斐陈大堤张建华袁广明
- 关键词：内耳耳蜗切片
- 高血压机械力诱导的小鼠移植静脉粥样硬化模型的建立
- 李宇煌Xu Qingbo李朝红张征宇汪照静刘树迎李晨宁粉陈大堤黄锦桃胡黎平
- 骨骼肌组织压片Mallory染色在组织学实验教学中的应用被引量：2
- 2016年
- 目的建立一种快速制作肌组织实验样本的方法,探讨Mallory染色的骨骼肌组织压片在组织学实验教学中的应用。方法学生取出小鼠骨骼肌,放置于载玻片上,用另一玻片轻压成薄片,制作成骨骼肌组织压片,经Mallory三色染液快速染色,然后镜下观察拍照。结果骨骼肌组织经施压后可变成薄层组织片,普通光镜下即可观察到明显的横纹结构,Mallory染液可很快使骨骼肌组织压片中的肌纤维染成橘红色,横纹更加明显,而肌纤维之间的结缔组织呈深蓝色。结论骨骼肌组织压片Mallory染色简便、快速,可在20分钟内完成整个实验过程,适合在传统的组织学实验教学中插入此内容,增加学生自己动手做实验的机会,提高了学生主动学习的兴趣,增强学生动手能力,加强对骨骼肌组织结构的更深入地了解,丰富组织学内容,把教学与科研结合起来,达到提高教学质量的目的。
- 刘树迎陈大堤袁广明李朝红
- 关键词：组织学实验教学
- 糖基化终产物受体介导高血压机械牵张力协同促进糖基化终产物激活小鼠血管平滑肌细胞ERK1/2加速血管重构
- 2011年
- 目的为证实糖基化终产物受体(RAGE)是否介导了机械牵张力和/或糖基化终产物(AGE)对小鼠主动脉血管平滑肌细胞(VSMC)的细胞外信号调节激酶(ERK1/2)的协同激活并加速血管重构。方法①正常血糖小鼠下腔静脉分别连接到正常血糖小鼠和STZ诱导的糖尿病小鼠右颈总动脉形成"静脉桥",术后不同时间点(0、4、8周)收获移植静脉作常规切片HE染色,观察移植静脉在动脉压力作用下的血管构筑情况。②体外静息培养的血管平滑肌细胞分别给予机械牵张力和/或糖基化终产物刺激,用Western Blotting法检测细胞内ERK1/2磷酸化水平。③糖基化终产物受体基因沉默(siRNA-RAGE)或过表达(overexpression-RAGE)预处理VSMC后给予机械牵张力和/或糖基化终产物刺激,观察ERK1/2活性的变化。结果高血压(动脉压)可明显改变移植静脉的血管构筑,但移植到高血糖组的比正常血糖组的血管构筑改变更加明显(术后4周和术后8周高血糖组与正常血糖组移植血管厚度分别为73.99±4.45μm比49.67±11.62μm和117.06±17.62μm比88.97±15.78μm,P均<0.05)。机械牵张力和糖基化终产物单独或共存时均可引起细胞内ERK1/2磷酸化增加,但两者共存时激活效应最明显;而ERK1/2的激活信号可通过糖基化终产物受体基因沉默或过表达被抑制或增强。结论高血压机械牵张力和糖基化终产物可协同促进VSMC ERK1/2激活,导致血管重构加速,糖基化终产物受体部分介导了这一过程。本研究可为深入探讨高血压机械力协同糖尿病AGE促进血管重构的分子机制及防治新策略提供实验依据。
- 李宇煌张征宇刘树迎王晶晶陈大堤黄锦桃胡黎平李朝红
- 关键词：糖基化终产物受体高血压血管重构机械牵张力
- 成年斑马鱼石蜡连续切片的制作和苏木精-伊红染色被引量：15
- 2006年
- 目的介绍斑马鱼石蜡连续切片的制作和苏木精-伊红(HE)染色的方法。方法利用ThermoShandonExcelsior组织处理机、ThermoShandonHistocentre2型石蜡包埋机、ThermoShandonFinesse325型切片机、ThermoShandonVaristainGemini全自动染片机和ThermoShandonConsul全自动封片机制作成年斑马鱼石蜡连续切片并进行HE染色。结果利用上述方法获得清晰的成年斑马鱼石蜡连续HE染色切片。结论斑马鱼石蜡连续切片的制作和HE染色与哺乳类动物组织切片和染色在操作和某些工作参数上有所不同。
- 袁广明胡黎平李燕陈大堤谢富康
- 关键词：斑马鱼石蜡切片苏木精-伊红染色成年
- 颈总动脉压诱导的小鼠移植静脉血管重构
- 2011年
- 【目的】研究血压升高引起血管重构的机制。【方法】手术取出麻醉后的11～12周供体C57BL/6J小鼠的下腔静脉,连接到同窝出生的受体小鼠颈总动脉,构建"静脉桥"。继而,收获受颈总动脉压作用不同时间(0,2,4,8周)后的移植静脉,经石蜡包埋HE染色、丽春红-维多利亚蓝染色以及平滑肌特异性抗体免疫组化染色后观察其血管构筑。【结果】术后各时间点均可见移植静脉血管壁增厚及新生内膜的形成,呈时间依赖性。与正常静脉[(11.10±0.9)μm)]相比,术后8周血管壁[(88.97±16)μm)]增厚了8倍(P<0.01)。术后2周移植静脉新生内膜中即可见血管平滑肌细胞大量增生,4周最多,8周后数量减少,但细胞外基质明显增多。移植静脉在动脉压作用下,其弹性膜历经了断裂、合成和重建过程。【结论】血压升高产生的机械力可直接导诱导移植的小鼠静脉粥样硬化以及弹力膜的重构。本研究可望为深一步探索高血压引起血管重构的机制及防治新策略提供有用的动物模型及实验依据。
- 李宇煌张征宇汪照静刘树迎陈大堤黄锦桃胡黎平李朝红
- 关键词：血管重构血管平滑肌细胞
- 血液涂片Wright染色法的改进被引量：1
- 2001年
- 陈大堤
- 关键词：血涂片染液WRIGHT
- 高血压机械力协同高血糖加速小鼠移植静脉血管重构
- 李宇煌Xu Qingbo李朝红张征宇汪照静刘树迎李晨宁粉陈大堤黄锦桃胡黎平
- 机械牵张力上调小鼠血管平滑肌细胞蛋白二硫键异构酶和NADPH氧化酶1表达的观察
- 2013年
- 目的观察机械牵张力诱导小鼠血管平滑肌细胞（VSMC）蛋白二硫键异构酶（PDI）表达，并初步探讨其与NADPH氧化酶1（NOXl）表达的关系。方法体外静息培养状态的VSMC给予不同时间和强度的机械牵张力刺激，用免疫印迹法检测细胞内PDI和NOXl的表达水平。结果机械牵张力可诱导VSMC内PDI表达增加，呈时间和强度依赖性；NOXl的表达水平也呈同样方式升高。结论机械牵张力刺激通过同时上调PDI和NOXl表达，参与氧化应激的过程。本研究为临床上与生物机械力增加相关的疾病（如高血压、静脉移植性粥样硬化）致病机制的研究提供了有用资料。
- 平苏宁刘树迎李字煌王晶晶黄锦桃陈大堤汪泓李朝红
- 关键词：血管平滑肌细胞机械牵张力
- Hoechst33342与DAPI标记细胞核对胞内活性氧检测效果的比较被引量：2
- 2014年
- 目的探讨Hoechst 33342与DAPI两种荧光染料标记细胞核后对细胞内活性氧水平的影响。方法静息培养的血管平滑肌细胞加入晚期糖基化终末产物作用10 min,加入标记活性氧的荧光探针H2DCFDA,再分别加入Hoechst 33342和DAPI不同荧光染料进行核标记。荧光显微镜下观察细胞核被标记的数目与细胞内活性氧的荧光水平。结果 Hoechst 33342染料标记5 min后即可见细胞核被标记上,随着时间的延长被标记的核数目并不发生改变;而与之明显不同的是,DAPI染料标记5 min时,只有几个细胞核被标记上,但随着时间的延长被标记的核数目越来越多。Hoechst 33342标记后细胞内活性氧的荧光强度并不随时间的延长发生变化,而DAPI标记后细胞内活性氧绿色荧光的细胞数就越少,DAPI标记的细胞核数与显示活性氧绿色荧光的细胞数呈反比。这些结果提示,DAPI染料在标记细胞核时破坏了活性氧在细胞内的储存,干扰了实验结果。结论检测细胞内活性氧时,应使用Hoechst 33342核标记染料而不能用DAPI。
- 周玉环刘树迎平苏宁王晶晶陈大堤黄锦桃李朝红
- 关键词：活性氧血管平滑肌细胞DAPI
