钱冠华
- 作品数:10 被引量:14H指数:2
- 供职机构:重庆医科大学附属第二医院更多>>
- 发文基金:国家自然科学基金重庆市自然科学基金重庆市科委基金更多>>
- 相关领域:医药卫生生物学更多>>
- 乙型肝炎病毒C蛋白和X蛋白的修饰及其意义被引量:2
- 2009年
- 乙型肝炎病毒(HBV)作为一个外来入侵的病毒可以激发人体的免疫反应,导致人体一系列与HBV感染有关的病理变化与临床表现。HBC和HBX是由HBV基因编码的两种重要蛋白。HBC对病毒基因组的复制和成熟是必不可少的,其蛋白修饰后的产物对病毒在宿主细胞内的组装、成熟和对外分泌中发挥着作用。HBX能与多种蛋白发生相互作用,在HBV的复制中起着不可或缺的作用,也影响着肝细胞癌的形成。现有的对HBC和HBX的磷酸化和泛素化过程的研究,为进一步揭示HBV的致病机制提供了依据,希望最终为乙型肝炎的临床治疗寻找一条新的途径。
- 钱冠华段昌柱
- 关键词:乙型肝炎病毒X蛋白磷酸化泛素化
- 人NIRF基因真核表达质粒的构建及其蛋白产物的生物信息学分析被引量:3
- 2009年
- 目的克隆人NIRF基因,构建其真核表达质粒,并运用生物信息学方法对NIRF蛋白进行分析。方法应用RT-PCR技术,从HeLa细胞中扩增NIRF基因,插入到真核表达载体pcDNA3.1-Flag中,双酶切鉴定并测序。在NCBI蛋白质结构数据库中寻找与NIRF具有较高同源性的1WY8和1Z6U,并利用Insight II结构生物信息学分析软件分析NIRF蛋白的结构和功能。结果扩增出约2400bp的人NIRF全长cDNA;重组真核表达质粒pcDNA3.1-Flag-NIRF酶切后,可见约2400bp的目的片段;测序结果表明NIRF全长cDNA与GenBank中NIRF序列完全一致。1WY8片段有3个赖氨酸残基,主要位于蛋白空间构象的表面;1Z6U片段含有Ring finger结构域,具有ligase活性。结论已成功克隆了人NIRF基因全长cDNA,构建了其真核表达质粒,并利用生物信息学方法,初步分析了NIRF蛋白泛素化作用的机理。
- 常蕾钱冠华段昌柱
- 关键词:克隆真核表达质粒生物信息学
- NIRF蛋白对妊娠早期绒毛滋养细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制被引量:2
- 2017年
- 目的观察NIRF蛋白对妊娠早期绒毛滋养细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法取正常妊娠妇女人工流产绒毛组织(8~10周),按常规分离方法获得滋养细胞,进行原代培养。通过上/下调NIRF在滋养细胞中的表达后,采用qRT-PCR法检测p53基因mRNA的转录水平;Western blot法检测p53蛋白的表达水平;MTT法检测滋养细胞的增殖能力;Annexin V/PI双染色法检测细胞凋亡情况。结果与未转染组比较,NIRF上/下调后,p53基因m RNA转录水平差异无统计学意义(P>0.05);NIRF上调,p53蛋白表达水平明显下降(P<0.05),早期绒毛滋养细胞增殖能力显著增强(P<0.05),凋亡率差异无统计学意义(P>0.05);NIRF下调,p53蛋白的表达水平明显升高(P<0.05),早期绒毛滋养细胞增殖能力明显减弱(P<0.05),凋亡率明显上升(P<0.05)。结论 NIRF在蛋白水平上抑制了p53的表达,促进了滋养细胞的增殖。
- 钱冠华董晓静于廷和段昌柱
- 关键词:P53蛋白滋养细胞细胞增殖细胞凋亡
- 妊娠期糖尿病对胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的影响
- 2021年
- 目的明确孕鼠妊娠期糖尿病(GDM)对胎鼠原代培养的肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)形态、功能的影响及意义。方法SD孕鼠分为对照组和GDM组,GDM组孕鼠建立GDM模型。分离、纯化两组胎鼠的AECⅡ细胞。台盼蓝染色判断胎鼠AECⅡ活力;透射电镜观察胎鼠AECⅡ超微结构改变。苏木素-伊红(HE)染色胎肺组织计算AECⅡ和AECⅠ数量及比例;油红O染色检测胎鼠AECⅡ脂质的变化;免疫荧光检测胎鼠AECⅡ中肺泡表面活性物质相关蛋白C(SP-C,AECⅡ标记物)的表达变化;免疫细胞化学检查胎鼠AECⅡ肺泡表面活性物质相关蛋白A(SP-A)的表达变化。结果原代培养可得到高产量、高纯度的AECⅡ。透射电镜下可见GDM组胎鼠AECⅡ中板层小体数较对照组胎鼠明显减少,细胞表面的微绒毛明显减少。GDM组胎鼠AECⅡ和AECⅠ细胞数量较对照组胎鼠均降低。GDM组胎鼠AECⅡ中脂滴数较对照组胎鼠明显减少。GDM组胎鼠原代培养的AECⅡ中SP-A表达低于对照组胎鼠(P<0.001)。结论GDM时,AECⅡ细胞形态的改变,功能的抑制是新生儿容易出现呼吸窘迫综合征的重要原因。
- 李金艳杨根岭钱冠华
- 关键词:妊娠期糖尿病板层小体
- 蛋白酶体抑制剂MG132对肝癌细胞生长的影响及其机制被引量:1
- 2012年
- 目的探讨蛋白酶体抑制剂MG132对肝癌细胞HepG2和HepG2.2.15生长的影响及其机制。方法用不同浓度的MG132(0、250、500、1 000 nmol/L)处理HepG2和HepG2.2.15细胞,采用MTT法、流式细胞术和Western blot法检测其对两种细胞增殖、细胞周期和细胞中相关蛋白GSK-3β、pGSK-3β、β-catenin表达的影响。结果经MG132处理后,两种细胞的增殖均受到明显抑制,致使细胞周期阻滞在G1期,细胞中pGSK-3β和β-catenin蛋白的表达量上升,且均呈剂量依赖性,其对HepG2.2.15细胞的影响更为显著。结论 MG132可通过使肝癌细胞中GSK-3β失活和细胞周期阻滞抑制细胞增殖,为MG132成为一种新型HCC治疗药物提供了实验依据。
- 钱冠华段昌柱彭惠民
- 关键词:HEPG2细胞HEPG2.2.15细胞原发性肝细胞癌
- 人NIRF蛋白与HBV核心蛋白相互作用的初步研究被引量:5
- 2011年
- 人NIRF蛋白在细胞内是否能与HBV核心蛋白发生相互结合,目前尚不清楚.构建pcDNA3-HBC质粒,采用基因共转染和共表达技术,在真核细胞内进行NIRF与HBc的免疫荧光共定位实验,并通过免疫共沉淀实验进一步验证两种蛋白是否发生相互结合.结果表明在细胞内,NIRF能与HBc发生相互结合.
- 金芳敏钱冠华杨艳段昌柱
- 关键词:HBC免疫荧光免疫共沉淀
- 乙型肝炎病毒x蛋白基因荧光真核表达质粒的构建及其对人正常肝细胞株L0_2增殖的影响
- 2012年
- 目的构建乙型肝炎病毒x蛋白基因荧光真核表达质粒,并检测HBx对人正常肝细胞株L02细胞增殖的影响。方法以pcDNA3-HBV质粒为模板,PCR法扩增HBx基因编码区全长序列,将其克隆至pIRES2-EGFP荧光真核表达载体中,构建重组真核表达质粒pIRES2-EGFP-HBx,转染L02细胞,筛选稳定表达HBx的细胞,RT-PCR法检测细胞中HBx基因mRNA的转录水平;Western blot法检测细胞中HBx蛋白的表达水平;MTT法检测细胞的增殖活力。结果重组荧光真核表达质粒pIRES2-EGFP-HBx经双酶切和测序证明构建正确,转染该质粒的L02细胞可检测到HBx基因mRNA的转录及蛋白的表达,与空质粒pIRES2-EGFP转染的L02细胞相比,增殖活力明显提高。结论成功构建了HBx基因荧光真核表达质粒,并获得了能稳定表达HBx蛋白的L02细胞株,为进一步研究HBx对细胞周期调控通路的影响及探索HBx导致的与HBV相关的HCC的分子机制奠定了基础。
- 钱冠华董君军段昌柱彭惠民
- 关键词:肝炎病毒乙型X蛋白绿色荧光蛋白质类
- NIRF蛋白对HBV核心蛋白的作用及其机制的初步研究
- 目的 研究NIRF蛋白对HBV核心蛋白的作用及其机制。探索NIRF是否是HBc的一个E3 ligase。NIRF是否与HBc在细胞内相互结合,从而导致HBc的泛素化降解。探讨NIRF对HBc表达和HBV复制、分泌的影响...
- 钱冠华
- 关键词:免疫共沉淀
- 亚低温对大鼠颅脑损伤后不同时段线粒体DNA缺失和酶活性变化的影响被引量:2
- 2012年
- 目的研究亚低温对颅脑损伤后不同时间神经细胞线粒体DNA(mtDNA)缺失及缺失DNA所编码的酶活性变化的影响,并探讨最佳治疗时程。方法建立重型颅脑损伤及亚低温治疗重型颅脑损伤动物模型并进行区组随机化分组。分为正常组,损伤6、12、24、48、72、96、120h组,降温6、12、24、48、72、96、120h组,共15组,每组15只大鼠。检测mtDNA的缺失,线粒体Na+-K+-ATP酶及细胞色素氧化酶的活性。结果损伤及降温各组的缺失/总mtDNA的比值较正常组均明显升高(P<0.05)。损伤6、12、24、48h组及降温6、12、24、48h组的缺失/总mtDNA的比值均呈逐渐上升趋势。损伤及降温各组细胞色素氧化酶活性较正常组均明显下降(P<0.05)。损伤6、12、24、48h组及降温6、12、24、48h组的细胞色素氧化酶活性均呈逐渐下降趋势。损伤及降温各组Na+-K+-ATP酶活性较正常组均明显下降(P<0.05)。损伤6,12,24,48h组及降温6,12,24,48h组的Na+-K+-ATP酶活性均呈逐渐下降趋势。损伤72、96、120h组及降温72、96、120h组中缺失/总mtDNA的比值、细胞色素氧化酶活性和Na+-K+-ATP酶活性比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论亚低温治疗在一定的时间范围内对大鼠颅脑损伤后的脑线粒体能量代谢障碍和mtDNA缺失有保护作用。
- 何建国邓扬嘉唐文渊钱冠华丁嵩涛彭惠民
- 关键词:重型颅脑损伤亚低温酶活性
- 一例羊水染色体异常病例分析
- <正>背景:复杂的染色体重排和染色体微缺失微重复综合征通常与患者异常的临床表型相关。这也给产前诊断带来了极大的困难。目的:通过相关产前诊断实验技术对1例羊水染色体异常病例进行临床诊断。方法:患者25岁,因NT增厚(NT=...
- 钱冠华
- 文献传递