钟静
- 作品数：5 被引量：11H指数：2
- 供职机构：重庆市肺科医院更多>>
- 发文基金：重庆市卫生局医学科研项目重庆市科技攻关计划重庆市医学科研计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 分枝杆菌L-J药敏实验中一个值得关注的问题——一个常规药敏结果敏感而临床疗效不好的可能原因
- ＜正＞在常规分枝杆菌 L-J 药敏培养1个月观察结果时,我们发现：有的菌株培养管斜面虽然未见菌落生长,但仔细观察可见膜状或沙粒状生长物（可疑生长）,致使结果难以准确报告。为此我们对可疑生长菌株进行了延长培养观察,拟确认其...
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- 文献传递
- 一线抗痨药物均耐药结核菌体外组合药物作用效果研究
- 2009年
- 目的对临床主要一线抗痨药异烟肼(isoniazidum,H)、利福平(rifampin,R)、链霉素(streptomycin,S)和乙胺丁醇(ethambatal,E)均耐药结核菌株进行体外组合药物作用效果研究,拟探讨结核病主要一线药物均耐药再联合用药时,化疗是否有效的临床耐多药结核病治疗问题。方法采用BacT/ALERT 3D分支杆菌培养系统对10株常规L-J法药敏至少对H、R、S和E(或同时对R)依赖的结核菌株及H37Rv标准敏感菌株,以MIC和平均血药峰浓度分别进行H、R、S及E单一药物和H+E+S及H+S+E+R组合药物药敏平行实验;将3D培养42d结果为阴性的实验瓶混悬液再平行转种于L-J管继续培养,以确定药物作用的效果(观察细菌是否真正被药物杀死)。结果单一药物3D法与L-J法的药敏结果基本一致。3D法单一药物均耐药菌株组合药物MIC和平均血药峰浓度实验结果显示不同程度报告阳性时间延长趋势。3D法单一药物耐药,组合药物未报告阳性的实验瓶,转种于L-J管继续培养均报告阳性。病例追踪10株分离株均为一线正规化疗失败的复治肺结核患者。结论小样本菌株实验研究结果提示:体外3D法H、R、S及E单一药物均耐药的临床结核菌株,组合药物(MIC和平均血药峰浓度)对其细菌可有不同程度的相对抑制作用,但没有最终协同杀灭细菌,其实验结果与患者临床疗效相符合。
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- 关键词：分支杆菌结核耐多药结核病
- 在临床分枝杆菌L-J培养中增加利福平管的实验观察——从初代培养中筛检临床依赖利福平分枝杆菌
- 依赖利福平分枝杆菌(依R菌)具有在R中成长旺盛的特点。现有常规方法从枝杆菌的分离培养到药敏实验,至少需要1个半月才能了解菌株是否存在药物依赖现象。本文通过在临床痰标本分枝杆菌L-J初代培养中增加R药物管的平行培养,希望从...
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- 文献传递
- 依赖利福平结核分枝杆菌相关蛋白的氨基酸及其编码基因序列研究被引量：11
- 2006年
- 目的研究临床依赖利福平结核分枝杆菌(依R菌)相关蛋白的氨基酸及其编码基因序列。方法以罗氏绝对浓度法药敏实验鉴定临床依R菌株(49株)、耐R菌株(54株)和R敏感菌株(30株),用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺电泳(SDSPAGE)法对不同临床菌株及H37Rv标准株共计134株菌株的菌体蛋白质图谱进行比较分析,通过QTOF2型毛细管液相色谱电喷雾四极杆飞行时间串联质谱仪(LCESIMSMS)对其差异表达蛋白的氨基酸序列进行鉴定,并用对其蛋白的编码基因进行DNA序列分析。结果不同菌株的SDSPAGE菌体蛋白图谱基本相似。49株依R菌有41株(84%)在含R管中的菌体蛋白图谱有一条相同的高表达蛋白带(相对于标准物分子质量43000的下端),约占总菌体蛋白的30%～50%,H37Rv标准株、28株R敏感菌(28/30)及44株耐R菌(44/54)的含R管和对照管的蛋白图谱相似,且无相应的高表达现象;该高表达蛋白经氨基酸序列鉴定为结核分枝杆菌H37Rv假设蛋白Rv0341,相对分子质量为43894,等电点(PI)5.25,得分183。不同菌株的Rv0341编码基因1440bp扩增片段,经DNA测序分析均未发现突变。结论利福平对Rv0341在依R菌中的表达有上调作用,Rv0341与依R菌相关,可视为依R菌的相关蛋白或标志物;Rv0341与依R菌的毒力及细胞壁的合成是否相关有进一步的研究价值。
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- 关键词：分枝杆菌结核利福平蛋白质组
- 结核分枝杆菌H_(37)Rv株Rv0341编码基因iniB的克隆与表达被引量：2
- 2008年
- 目的克隆并表达编码结核分枝杆菌H37Rv株Rv0341蛋白的iniB基因。方法利用PCR从结核分枝杆菌H37Rv株中扩增iniB基因,克隆于pET-22b(+)原核表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达,镍离子亲和层析柱纯化后,通过SDS-PAGE和Western-blot鉴定目的蛋白的表达及反应原性。结果克隆并表达了iniB基因,表达的蛋白相对分子质量约43000,诱导2h表达量较高,约为25%。目的蛋白主要以包涵体形式存在于超声沉淀中,纯化后蛋白纯度可达98%以上。经Western blot检测,纯化蛋白与依赖利福平结核分枝杆菌(依R菌)肺结核患者血清呈现强阳性反应,而与非依R菌肺结核患者血清不反应。结论已成功克隆并表达了编码结核分枝杆菌H37Rv株Rv0341蛋白的iniB基因,表达的重组蛋白具有反应原性及特异性,为依R菌结核病临床血清学快速诊断方法的建立及试剂盒的研发奠定了基础。
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- 关键词：结核分枝杆菌克隆
