赖赛麟
- 作品数：5 被引量：9H指数：2
- 供职机构：暨南大学医学院更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- IFN-γ诱导THP-1源巨噬细胞活化的条件优化被引量：2
- 2014年
- 目的摸索利用IFN-γ诱导THP-1源巨噬细胞活化的方法，筛选用于检测巨噬细胞活化状态的最佳细胞因子和最佳检测时间。方法PMA（佛波酯）诱导THP-1分化成为巨噬细胞，两次加入IFN-γ诱导巨噬细胞活化（两步法），ELISA法检测不同浓度和不同刺激时间培养上清中细胞因子TNF-γ、IL-10、IL-12、IL-23的水平。结果IFN-γ诱导的巨噬细胞可大量分泌TNF-a，分泌量大于1000ng／mL，而IL-10、IL-12、IL-23分泌量少或未见明显分泌；两次IFN—y诱导巨噬细胞活化的最低浓度均为2．5ng／mL，初次最佳刺激时间为8～16h，再次最佳刺激6～18h。结论IFN—y可诱导巨噬细胞活化，两次IFN-γ刺激的效果比单次刺激效果好，TNF-γ可作为巨噬细胞活化的理想检测指标。
- 江勇郭卉欣赖赛麟钱明李海成黎贞燕余丽江振友周琳钟球陈涛
- 关键词：巨噬细胞IFN-Γ活化
- 热灭活和紫外线照射灭活结核分枝杆菌的实验效果分析被引量：5
- 2013年
- 我国卫生部公布的《人间传染的病原微生物名录》中结核分枝杆菌被列为第二类病原微生物（危害程度为Ⅲ级）,属高致病性病原微生物[1]。实验室研究课题中,大部分涉及到结核分枝杆菌的操作,实验室生物安全是首先要解决的问题。至今,已有一些关于实验室工作人员患结核病的报道,其中呼吸道吸入感染是实验室感染的最主要类型[2]。
- 赖赛麟李海成王威孙毅凡郭卉欣陈涛江勇钱明江振友周琳钟球
- 关键词：实验室生物安全结核分枝杆菌紫外线照射病原微生物
- γ干扰素活化的THP-1源巨噬细胞杀伤荧光BCG的实验研究被引量：1
- 2014年
- 目的研究γ干扰素（IFN-γ）活化的THPI源巨噬细胞对BCG的杀伤作用，并探讨其杀伤机制是否与自噬有关。方法Phorbol-12-myristate-13-acetate（PMA，也称佛波酯）诱导THP-1分化成巨噬细胞。牛分枝杆菌减毒株荧光BCG以感染复数MOI（multiplicityofinfection，细菌数与细胞数的比例）10：1感染未活化（Control组）、IFN7活化（IFN-γ组）、Rapamycin诱导自噬（Rapa组）、3-甲基腺嘌呤（3-MA）抑制自噬（IFN-γ＋3-MA组）4组不同预处理的巨噬细胞。感染48h后，超纯水裂解细胞，收集裂解液和培养上清混合，相同比例取各组混合液10μl，连续10倍稀释3次涂7H10平板培养基，置37℃生化培养箱培养，第3至4周观察记录菌落数，计算生存率Econtrol组的菌落数为分母，其他组（包括control组）的菌落数为分子相除得到的数值为生存率]。同时在感染过程的不同时间点裂解细胞提取总蛋白，以Westernblot方法检测自噬标志蛋白LC3B的表达，监测细胞自噬水平的变化。实验结果数据以3次重复实验数据的“x±s”形式展示（Westernblot结果除外，只采用其中-个结果数据为代表）。用SPSS17．0软件进行统计分析：巨噬细胞贴壁率比较和凋亡率比较用两独立样本t检验；巨噬细胞活化后不同时间点分泌的TNF-α浓度比较和BCG感染各组巨噬细胞后的生存率比较用One-WayANOVA检验，以P〈0．05为差异有统计学意义。结果BCG感染各组巨噬细胞48h后的生存率：Control组为（100％±0％），IFN7组（45Yo±3％），Rapa组（48％±3％），IFN-γ＋3-MA组（91％±2％）。BCG生存率经One-WayANOVA检验，与Control组（未活化组）比较：IFN-γ组BCG生存率明显下降（P=0．01），细胞自噬水平明显增高；Rapa组BCG生存率明显下降（P=0．01），细胞自噬水平明显增高；IFN-γ＋3MA组BCG生存率无下降（P=0．13），细胞自噬水平无增高。结论BCG感染巨噬细胞�
- 赖赛麟孙毅凡陈涛杨晓周琳钟球
- 关键词：卡介苗细胞系
- 结核分枝杆菌Rv3803c、Rv3846基因的克隆、表达、纯化与鉴定被引量：1
- 2012年
- 目的克隆结核分枝杆菌Rv3803c和Rv3846基因,并在大肠埃希菌(E.coli)中进行表达和纯化。方法以结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA为模板,应用PCR方法扩增出Rv3803c和Rv3846基因片段,克隆至pGEX-6P-1表达载体中,测序正确后,在E.coli Rosetta中诱导表达,GST标签亲和层析法纯化蛋白,考马斯亮蓝染色及Western-blot分析鉴定。结果重组质粒pGEX-Rv3803c、pGEX-Rv3846测序表明核苷酸序列与设计完全一致。其在E.coli Rosetta中的存在形式均为可溶部分约50%、包涵体约50%,相对分子质量约为56 000和45 000,纯化的GST-Rv3803c、GST-Rv3846样品纯度90%以上。完整的GST-Rv3803c的浓度大约为0.1mg/ml,完整的GST-Rv3846的浓度大约为0.5mg/ml。即相当于每升E.coli Rosetta培养物中,GST-Rv3803c产量为:0.25mg/L、GST-Rv3846产量为1.25mg/L。结论成功获得了纯化蛋白Rv3803c(MPT51)和Rv3846(SodA),为进一步研究MPT-51和SodA蛋白的辅助诊断价值、构建保护性疫苗提供了实验依据。
- 孙毅凡李海成周杰钱明陈涛江勇赖赛麟江振友钟球周琳
- 关键词：分枝杆菌结核抗原细菌细菌蛋白质类超氧化物歧化酶
- 活化巨噬细胞控制结核分枝杆菌感染与自噬的相关性研究
- 目的: 了解IFN-γ活化的THP-1源巨噬细胞分别对结核分枝杆菌3个菌株(mCherry-BCG、H37Rv、MDR)感染的控制效力,并探讨感染过程中结核分枝杆菌生存与巨噬细胞自噬之间的关系。 方法: 1.利用博...
- 赖赛麟
- 关键词：巨噬细胞结核分枝杆菌
- 文献传递
