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卵巢上皮癌组织中ERCC1基因mRNA表达水平与患者化疗反应性和生存期的关系: 目的:研究切除修复交叉互补基因1(ERCC1)在卵巢上皮癌组织中的mRNA表达水平与患者对铂类药物化疗反应及生存期的关系,并探讨ERCC1基因缺失第Ⅷ外显子变异剪接体的临床意义.方法:使用TRIZol试剂提取63例卵巢上...; 蒋胜李力唐兆前王琪

ERCC1基因mRNA表达水平在卵巢上皮性癌组织中的意义被引量：11: 2009年; 目的:研究切除修复交叉互补基因1(ERCC1)在卵巢上皮性癌组织中的mRNA表达水平与患者对铂类药物化疗反应及生存期的关系,并探讨ERCC1基因缺失第Ⅷ外显子变异剪接体的临床意义。方法:使用TRIZol试剂提取63例卵巢上皮性癌组织总RNA,逆转录为cDNA后,TaqMan实时荧光定量RT-PCR技术分别检测ERCC1基因及缺失第Ⅷ外显子变异剪接体的mRNA表达水平,并分析其与患者化疗反应和术后生存期的关系。结果:①ER-CC1基因总mRNA和去除变异剪接体后ERCC1全长相对表达量在化疗敏感组的值均低于化疗耐药组,差异有统计学意义(P=0.013;P=0.009)。②总ERCC1mRNA和去除变异剪接体后ERCC1全长相对表达量在低水平表达组比高水平表达组的生存期更长,差异有统计学意义(P=0.012;P=0.008)。结论:卵巢癌组织中ERCC1基因mRNA表达水平能够预测患者的化疗反应性与术后生存期,缺失第Ⅷ外显子变异剪接体与患者的化疗反应和术后生存期没有关系,无临床意义,是无功能的转录产物。; 蒋胜李力张玮唐兆前王琪姚德生张洁清阳志军; 关键词：抗肿瘤联合化疗方案逆转录聚合酶链反应选择性剪接

改良2-^(△△CT)法分析RNASET2基因在卵巢癌卡铂耐药中的表达被引量：1: 2009年; 目的:建立改良的相对定量2^(-△△CT)法并应用其分析RNASET2基因在卵巢癌卡铂耐药细胞系中的差异表达。方法:分别提取卵巢癌卡铂耐药SKOV3细胞系与其亲本SKOV3细胞系的总RNA,将等量的mRNA逆转录为cDNA,应用实时荧光定量PCR(real-time RT-PCR)技术检测核糖核酸酶T2(RNASET2)基因在卵巢癌卡铂耐药中的差异表达,参照2^(-△△CT)公式的推导步骤,对其改良演化出一个新的公式即改良2^(-△△CT)公式。以绝对定量法为对照,应用该公式分析real-time RT-PCR技术检测结果并比较两种方法的差异。结果:改良2^(-△△CT)公式与绝对定量法分析实验结果差异无统计学意义(P>0.05)。卵巢癌卡铂耐药SKOV3细胞系RNASET2基因的表达相对于卵巢癌非耐药SKOV3细胞系的表达降低。结论:改良2^(-△△CT)公式分析real-time RT-PCR反应数据是一种简便可行的相对定量方法,RNASET2表达下调与卵巢癌卡铂耐药相关。; 唐兆前李力张伟王琪蒋胜唐步坚; 关键词：卵巢癌耐药 REAL-TIME PCR

TaqMan实时荧光定量RT-PCR检测变异剪接体被引量：4: 2009年; 目的:建立应用TaqMan实时荧光定量RT-PCR技术对基因mRNA的各个变异剪接体分别进行定量检测的技术。方法:以对ERCC1的变异剪接体进行检测为例。使用TRIzol裂解新鲜手术切除的卵巢癌组织后提取总RNA,逆转录为cDNA后,PCR扩增ERCC1基因以及beta-actin基因,琼脂糖电泳分离PCR产物,纯化后连接到pMD18-T载体,转化入感受态大肠杆菌,提取并纯化质粒,稀释成不同浓度作为标准品以便制作标准曲线。结果:成功构建了缺失第VⅡI外显子的ERCC1质粒以及beta-actin质粒,设计了两套针针对ERCC1的TaqMan探针和引物,建立了稳定的定量检测ERCC1mRNA变异剪接体表达水平的平台。结论:TaqMan实时荧光定量RT-PCR方法可以成功地分别对基因的变异剪接定体进行定量检测。; 蒋胜李力; 关键词：TAQMAN探针实时荧光定量RT-PCR ERCC1基因卵巢癌

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蒋胜