王瑞华
- 作品数：6 被引量：39H指数：2
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 大鼠心脏报告基因显像的放射性自显影研究
- 目的:心脏疾病的基因治疗具有良好的应用前景,但是对治疗基因表达的监测一直缺乏有效、无创和可重复的手段,核素报告基因显像为这一目的提供了良好的方法。但是目前该方法大多数用于肿瘤中,而在心脏中应用较少。本研究应用 HSV1-...
- 兰晓莉刘影吴涛张亮尹小花王瑞华张永学
- 文献传递
- 131^I-FIAU在不同载体介导的HSV1-tk转导心肌细胞中的实验研究被引量：2
- 2009年
- 目的为以单纯疱疹病毒Ⅰ型胸苷激酶基因（HSV1-tk）为报告基因的核素心脏显像寻找合适的载体并提供依据。方法以胶原酶单次消化法获得乳鼠原代心肌细胞，分别应用重组腺病毒Ad5-HSV1-tk（Ad5-tk）和脂质体lipofectamine^TM2000包裹的重组质粒pDC316-tk（pDC316-tk／lipoplex）将报告基因HSV1-tk转导入细胞，以空载体腺病毒作为对照；采用Iodogen固相氧化法对特异性报告探针氟-碘阿糖呋喃基脲嘧啶（FIAU）进行131^I标记，经Sep-Pak C18反相色谱层析柱纯化后，测定标记物的标记率和放化纯；比较各组细胞对131^I-FIAU的摄取情况，并应用半定量反转录-聚合酶链反应（RT—PCR）和免疫细胞化学方法，在mRNA和蛋白质水平检测不同载体介导HSV1-tk转导心肌细胞后HSV1-tk的表达。结果131^I-FIAU的标记率为（53．82±2．05）％，放化纯为（94．85±1．76）％，标记物在体外稳定存在；转导后5h，Ad5-tk感染组和pDC316-tk／lipoplex转染组对131^I-FIAU的摄取率分别为（12．55±0．37）％、（2．09±0．34）％，且各时间点摄取率前者均明显高于后者（t=12．978～38．253，P均〈0．01）；2种载体介导心肌细胞转导后24h，RT—PCR即可检测到HSV1-tk mRNA的表达，且Ad5-tk感染组的表达水平明显高于pDC316-tk／lipoplex转染组（3．11±0．14与1．60±0．05，t=17．663，P〈0．01）；免疫细胞化学检测中二者阳性率分别为（81．70±0．40）％、（22．06±0．32）％，差异有统计学意义（t=23．237，P〈0．01）。结论腺病毒载体介导HSV1-tk感染心肌细胞的效率和对标记探针的摄取率均明显高于脂质体介导组，其可做为活体报告基因心脏显像的载体，可得到更为清晰的显像图。
- 尹小花兰晓莉王瑞华刘影张永学
- 关键词：心肌细胞转导碘放射性同位素
- 新生SD大鼠心肌细胞培养方法的简化及改良被引量：31
- 2008年
- 目的改良简化心肌细胞培养的条件和方法,培养纯度高、存活时间长的新生SD大鼠的心肌细胞。方法采用含牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)的Ⅱ型胶原酶单次消化心肌、差速贴壁1 h纯化心肌细胞进行培养,全过程在37℃条件下进行。于培养5、10、15、20、25、30 d时,用台盼蓝染色法检测细胞的存活率,并在生物倒置显微镜下观察形态学变化。取培养48 h的细胞,用免疫组织化学染色的方法检测心肌细胞的纯度。结果心肌组织在6 h时基本消化完全。培养5、10、15、20、25、30 d时,用台盼蓝染色法检测心肌细胞的存活率均大于95%,培养30 d时仍为95.2%。在生物倒置显微镜下观察,培养24 h左右的细胞之间形成交联并有细胞搏动。培养48h的细胞经免疫组织化学染色法测定,心肌细胞的纯度为(97.1±1.9)%。结论应用改良并简化的心肌细胞培养方法和培养条件,可得到纯度和存活率均高能满足大多数科研要求的原代乳鼠心肌细胞。
- 王瑞华兰晓莉曹国祥安锐张永学
- 关键词：新生SD大鼠心肌细胞细胞培养
- FAU的碘化标记及其在小鼠体内的生物学分布被引量：9
- 2007年
- 目的研究^(125)I-氟-碘阿糖呋喃基尿嘧啶(FIAU)的性质及在小鼠体内的生物学分布。方法利用 Iodogen 碘化标记法对氟脱氧呋喃糖尿嘧啶(FAU)进行标记,用 Sep-Pak C18反相色谱柱进行纯化;观察^(125)I-FIAU 的标记率、放化纯、体外稳定性及其在小鼠体内的生物学分布。结果以Iodogen 固相氧化法标记 FAU,得到^(125)I-FIAU,标记率为(63.12±5.01)%;产物经 Sep-Pak C18反相色谱柱纯化后放化纯为(98.60±0.52)%;^(125)I-FIAU 在 PBS 及人血清中37℃条件下稳定,24 h 后放化纯>95.04%。生物学分布实验表明:标记物从小鼠血液中清除迅速,用每克组织百分注射剂量率(%ID/g)表示,0.5 h 为(4.33±1.00)%ID/g,2 h 下降为(0.77±0.06)%ID/g,至24 h 时基本清除完毕;肾脏是其主要排泄器官。结论 Iodogen 固相氧化法可以进行 FAU 碘化标记,得到标记率、放化纯及稳定性较好的^(125)I-FIAU,该标记物主要经肾脏排泄。
- 王瑞华曹国祥兰晓莉何勇伍军安锐张永学
- 关键词：碘放射性同位素同位素标记药代动力学小鼠
- 腺病毒载体介导的HSV1-tk报告基因感染心肌细胞后摄取^(125)I-FIAU的实验研究
- 2008年
- 携带HSV1-tk的重组腺病毒(Ad5-tk)以感染复数(MOI)为20、40、80的病毒滴度感染体外培养的乳鼠原代心肌细胞;通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测感染后心肌细胞活力;应用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测基因转导后心肌细胞内HSV1-tkmRNA的表达情况,并研究对报告探针125I-FIAU的摄取情况。结果显示:不同滴度Ad5-tk感染组心肌细胞存活率与时间均呈负相关,且病毒滴度越大,心肌细胞存活率越低;心肌细胞感染Ad5-tk后24h,RT-PCR即可检测到HSV1-tkmRNA的表达,且MOI=40感染组的表达量高于MOI=20感染组(P<0.01);心肌细胞感染不同滴度Ad5-tk后对125FIAU的摄取与时间呈正相关,且MOI=40感染组在各时间点的摄取率高于其余各组(P<0.01)。表明腺病毒载体介导的报告基因HSV1-tk进入心肌细胞后,能表达生成有活性的磷酸化酶HSV1-TK,使心肌细胞对核素标记报告探针125I-FIAU有明确的摄取,摄取程度与时间呈正相关,且感染滴度为40时摄取率最高,这为活体报告基因心脏显像提供了细胞水平依据。
- 尹小花兰晓莉王瑞华刘影张永学
- 关键词：报告基因腺病毒细胞摄取心肌细胞
- HSK1-tk基因显像剂FIAU的碘化标记及体内生物学分布的研究
- 目的利用125I进行FAU的放射性碘化标记,并初步研究FIAU其体外的稳定性和小鼠体内的生物学分布。方法利用Iodogen氧化标记法对FAU进行碘化标记,用Sep-Pak C-18反相色谱小柱进行纯化分析,研究不同反应条...
- 王瑞华曹国祥兰晓莉何勇张永学安锐高再荣
- 文献传递
