王桂玉
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
- 供职机构：国家人口计生委科学技术研究所更多>>
- 发文基金：国家科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 巨噬细胞抑制因子在毕赤酵母中的表达及鉴定被引量：2
- 2005年
- 目的:在毕赤酵母表达系统中获得巨噬细胞抑制因子(MIC-1)高效分泌表达,并鉴定其免疫活性。方法:从BeWo细胞系中提取总RNA,通过反转录PCR获得目的片段,然后将基因亚克隆入pPIC9k表达载体,线性化后转化GS115酵母细胞,经G418抗性筛选获多拷贝重组子并诱导表达,PCR鉴定目的基因的整合。表达产物用Westernblot鉴定生物活性。结果:经过G418筛选到34株阳性克隆,MIC-1蛋白最高表达量为6.332mg/L。结论:成功构建了MIC-1表达载体,在酵母中获得多拷贝高效表达,并且形成正确的蛋白结构。
- 吴永和王桂玉吴尔若马旭
- 关键词：毕赤酵母
- β人绒毛膜促性腺激素在毕赤酵母中的表达及鉴定
- 2005年
- 目的 在毕赤酵母表达系统中获得β人绒毛膜促性腺激素(hCG)高效分泌表达,并鉴定其抗原活性。 方法 将βhCG基因亚克隆入 pPIC9K表达载体,线性化后转化 GS115 酵母细胞,经 G418 抗性筛选获多拷贝重组子并诱导表达。表达产物采用SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS- PAGE)、Western blot、酶链免疫吸附试验(ELISA)鉴定。 结果 经甲醇诱导,酵母细胞表达出βhCG,此蛋白在SDS PAGE电泳上显示为一条分子量为32×103 阳性条带,在Western blot试验中能被βhCG多抗识别,在竞争抑制性ELISA中能抑制βhCG单抗与 hCG全分子的结合。 结论 βhCG在毕赤酵母中得到高效表达,并形成正确的蛋白结构。
- 郑俊峰王桂玉于和鸣马旭
- 关键词：人绒毛膜促性腺激素毕赤酵母
