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梁富英
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熊祎
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DNAX相关蛋白12信号通路在压应力诱导小鼠单核细胞向破骨细胞分化中的作用
2012年
目的探讨DNAX相关蛋白12(DNAX—associatedprotein12,DAP12)信号通路在压应力诱导小鼠单核细胞向破骨细胞分化过程中的作用,以期阐明正畸治疗过程中牙槽骨破骨细胞分化的调节机制。方法以小鼠单核细胞RAW264.7为研究对象,构建并导人DAPl2短发夹RNA(shorthairpinRNA,shRNA)质粒,分为DAP12-shRNA干扰组、阴性对照组和空白对照组,采用四点弯曲体外细胞加载装置加载压应力,以反转录聚合酶链反应、蛋白质印迹法分别检测DAPl2、抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistantacidphosphataseTRAP)、非受体酪氨酸激酶家族Btk和Tec激酶、活化T细胞核因子1(nuclearfactorofactivatedTcells1,NFATcl)mRNA和蛋白的表达情况。结果与阴性对照组(0.385±0.021)和空白对照组(0.391±0.009)相比,DAPl2.shRNA干扰组DAPl2mRNA表达水平(0.112±0.025)明显降低(P〈0.05);DAP12-shRNA干扰组DAPl2蛋白表达(0.193±0.015)显著低于阴性对照组(0.526±0.006)和空白对照组(0.514±0.024)(P〈0.05)。干扰组内与压应力刺激细胞0h(0.497±0.031)相比,加力6h(0.671±0.031)和加力12h(0.800±0.043)TRAPmRNA表达显著增加(P〈0.05),但各对应时间点的表达均比阴性对照组弱(3、6、12h)(P〈0.05)。受压应力刺激DAP12-shRNA干扰组Btk、Tec、NFATc1的表达虽然随加力时间的增加而增加,但各时间点(6、12h)与阴性对照组比均显著减少(P〈0.05)。结论DAP12信号通路存在并参与调节压应力刺激诱导的破骨细胞分化,DAP12在其中起重要作用。
黄生高
凌天牖
钟孝欢
熊祎
刘云峰
梁富英
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基因沉默
应力
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