杨海文
- 作品数：6 被引量：11H指数：2
- 供职机构：南方医科大学南方医院更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 抗乳腺癌免疫毒素EGF-TCS的构建及生物学活性
- 2007年
- 目的制备对乳腺癌细胞具有特异性杀伤活性的抗乳腺癌重组免疫毒素。方法利用大肠杆菌系统表达抗乳腺癌EGF-TCS重组免疫毒素。表达产物经Ni-NTA Agrose亲和层析柱纯化,进行特异性杀伤活性检测。结果以可溶性形式表达于大肠杆菌培养上清中,并获得有效纯化。细胞毒试验表明其对乳腺癌细胞具有杀伤作用,而对正常乳腺细胞无损伤。结论已成功地制备了具有杀伤活性的抗乳腺癌EGF-TCS重组免疫毒素,为其进一步应用奠定基础。
- 杨海文李咏梅陈金龙罗仁
- 关键词：乳腺癌免疫毒素生物学活性
- 融合蛋白EGF-TCS的纯化及体外靶向杀伤肿瘤细胞的研究
- 2007年
- 目的在大肠杆菌中表达并纯化EGF-TCS融合蛋白,观察该融合蛋白对肿瘤细胞的靶向选择性杀伤作用。方法将重组表达质粒PQE30/EGF-TCS转化至大肠杆菌M15中,表达该融合蛋白(EGF-TCS)。产物经Ni-NTAAgrose亲和层析柱纯化;用流式细胞仪检测肿瘤细胞株和正常肝LO2细胞株的EGFR表达量;进行细胞杀伤实验,验证EGF-TCS的选择性杀伤能力;用流式细胞仪检测细胞凋亡的方法进一步考察EGF-TCS的靶向选择性杀伤能力,并用电镜观察细胞形态。结果重组表达质粒PQE30/EGF-TCS在大肠杆菌M15中获得稳定、高效的融合表达,表达上清柱纯化纯度达95%以上;肝癌BEL-7402细胞表面EGFR表达量最高(72.33%),正常肝LO2细胞表面EGFR表达量最低(5.51%),重组的融合蛋白对肿瘤细胞具有较大的杀伤能力(BEL-7402、MCF-7和BGC-823的IC50分别为11.40、22.47、12.53μg/ml),对正常细胞的杀伤能力微弱(IC50为53.19μg/ml)。结论应用基因工程技术,成功构建了融合蛋白EGF-TCS,该融合蛋白可明显促进肿瘤细胞的凋亡。
- 李咏梅陈金龙杨海文罗仁
- 关键词：天花粉蛋白纯化靶向作用
- 重组hEGF-TCS融合蛋白基因表达载体的构建及表达产物的纯化被引量：1
- 2007年
- 目的构建新型人表皮生长因子(human epidermal growth factor,hEGF)和天花粉蛋白(trichosanthin,TCS)融合蛋白的表达载体,在大肠杆菌中表达并纯化EGF-TCS融合蛋白。方法利用基因工程技术将人表皮生长因子EGF和天花粉蛋白基因连接起来,克隆到高效表达载体pQE30中,构建重组表达质粒pQE30-EGF-TCS。并在大肠杆菌M15中表达该融合蛋白(EGF-TCS)。产物经Ni-NTA Agrose亲和层析柱纯化。结果重组表达质粒pQE30-EGF-TCS在大肠杆菌M15中获得稳定、高效的融合表达。目的蛋白占细胞总蛋白的40%左右,以可溶性形式存在,表达上清柱纯化纯度达95%以上。结论应用基因工程技术,成功构建了融合蛋白EGF-TCS,为进一步研究其结构功能关系和临床应用奠定了基础。
- 李咏梅陈金龙杨海文罗仁
- 关键词：表皮生长因子天花粉蛋白融合蛋白纯化
- 人表皮生长因子-天花粉蛋白融合蛋白的基因克隆、表达及纯化被引量：2
- 2007年
- 目的构建人表皮生长因子(EGF)-linker-天花粉蛋白(TCS)融合蛋白的表达载体,在大肠杆菌中表达并纯化EGF-linker-TCS融合蛋白。方法用PCR方法扩增EGF及柔性连接肽Linker基因片段,插入质粒PQE30-TCS中,转化至大肠杆菌M15中,表达该融合蛋白(EGF-linker-TCS)。表达产物经Ni-NTAAgrose亲和层析柱纯化。结果PQE30-EGF-linker-TCS蛋白在大肠杆菌M15中获得稳定、高效的融合表达。目的蛋白占细胞总蛋白的40%左右,以可溶性形式存在,表达上清柱纯化后纯度达95%以上。结论应用基因工程技术,成功地构建了融合蛋白EGF-linker-TCS的表达载体,表达并纯化了该融合蛋白,为进一步研究其结构功能关系和肿瘤临床应用奠定了基础。
- 李咏梅杨海文罗仁
- 关键词：表皮生长因子天花粉蛋白重组融合蛋白
- EGF-Linker-TCS融合蛋白诱导肝癌BEL-7402细胞凋亡被引量：4
- 2007年
- 目的表达和纯化由人表皮生长因子、柔性肽和天花粉蛋白组成的融合蛋白(EGF-Linker-TCS),检测其对肿瘤细胞的杀伤能力并探讨其在肿瘤治疗中的可能作用。方法诱导、表达EGF-Linker-TCS嵌合毒素,使用HiTrap Chelating亲和层析纯化,采用生长曲线、结晶紫法、电镜和流式细胞仪等技术研究EGF-Linker-TCS对肝癌BEL-7402细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用。结果EGF-Linker-TCS纯度达到95%,细胞活性检测证明EGF-Linker-TCS能够明显抑制肝癌细胞的生长和集落形成,0.1μg/mlEGF-Linker-TCS和1μg/mlEGF-Linker-TCS作用于肝癌BEL-7402细胞,集落形成率分别为(15.17±1.19)%和(7.83±1.32)%,明显低于对照组(31.23±3.98)%(P<0.05)。EGF-Linker-TCS对BEL-7402细胞有较强的细胞毒作用,IC50为10.98μg/ml。结论EGF-Linker-TCS嵌合毒素对肝癌BEL-7402细胞有增殖抑制和诱导细胞凋亡作用,具有治疗肝癌的潜在价值。
- 李咏梅陈金龙杨海文罗仁
- 关键词：天花粉蛋白细胞凋亡
- 重组免疫毒素EGF-TCS对荷瘤小鼠抗肿瘤效果的实验研究被引量：4
- 2007年
- 目的使用EGF-TCS重组蛋白对裸鼠的肿瘤模型进行体内抑瘤实验,观察其抗肿瘤效果。方法分别给裸鼠右腋皮下接种人肝癌BEL-7402细胞,接种后第6天,尾静脉注射100、50和25μg/kg EGF-TCS进行治疗,设空白对照组,停药后第2天处死小鼠,称量瘤重,计算抑瘤率;肿瘤组织做免疫组织化学实验,从而研究其抑制肿瘤生长的途径。结果高、中和低剂量组的抑制率分别为71.3%、60.87%和45.22%,对治疗结束后各组平均瘤重进行统计学分析,结果有显著性差异(F=8.712,P=0.006);免疫组化结果显示EGF-TCS可以明显的抑制肿瘤血管的形成,高剂量组肿瘤组织未有可见血管,中低剂量组肿瘤组织血管明显少于模型组,其抑制肿瘤生长的途径可能是通过抑制肿瘤血管生长从而达到治疗目的。结论EGF-TCS可以有效地抑制荷瘤小鼠实体瘤的生长,预示了该免疫毒素在肿瘤治疗中的潜在应用价值。
- 杨海文李咏梅罗仁
- 关键词：天花粉蛋白免疫毒素
