李越
- 作品数：12 被引量：11H指数：2
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所更多>>
- 发文基金：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项“十二五”国家科技计划农村领域国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 鸡输卵管组织特异性载体的构建和细胞水平表达
- 卵清蛋白(OV)启动子是最强的组织特异性启动子之一,筛选高效特异性强的OV启动子是输卵管生物反应器制备的关键.本文以海兰白鸡基因组为模板,扩增了3.0kb、2.7kb的OV启动子区,克隆到带有EmGFP报告基因的pcDN...
- 赵颖慧朱慧萌王伟李越孟庆文
- 关键词：卵清蛋白输卵管外源基因
- 文献传递
- H1N1流感病毒单链抗体基因的克隆及抗病毒活性研究
- 单链抗体(single-chain antibody variable fragment,ScFv)是抗原与抗体结合的最小单位,由抗体重链可变区和轻链可变区通过一段5-25个氨基酸的连接肽连接而成的单克隆抗体的可变区片段...
- 李越王伟赵颖慧孟庆文
- 关键词：流感病毒单链抗体基因克隆抗病毒活性
- 文献传递
- 鸭维甲酸诱导蛋白Ⅰ基因原核表达和单克隆抗体的制备及鉴定被引量：1
- 2014年
- 本试验旨在制备针对鸭维甲酸诱导蛋白Ⅰ(RIG-Ⅰ)全长蛋白的单克隆抗体。从鸭脾脏cDNA中扩增鸭RIG-Ⅰ基因N端长度均为900bp的a(1—900bp)和b(751—1650bp)2段基因片段,将其克隆入原核表达载体pET-30a中;重组质粒转化BL21感受态细胞后,经IPTG诱导表达,将获得的目的蛋白免疫BALB/c小鼠,将其脾淋巴细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,并进行间接ELISA检测。结果显示,筛选出17株与分段表达的鸭RIG-Ⅰ蛋白有良好反应性的杂交瘤细胞株,测定单克隆抗体上清效价均为1∶512;间接免疫荧光(IFA)与Western blotting分析结果显示,10H7C3和2A10A2 2株单克隆抗体与原核表达的鸭RIG-Ⅰ全长蛋白有良好的反应性。本研究制备了特异性鼠抗鸭RIG-Ⅰ单克隆抗体,为进一步研究RIG-Ⅰ基因的功能奠定了基础。
- 周长良张雅春王伟李越赵颖慧臧凤霞冉多良孟庆文陈洪岩
- 关键词：单克隆抗体原核表达
- 鸭RIG-1基因的组织表达及体外抗禽流感病毒活性研究被引量：5
- 2013年
- 视黄酸诱导基因蛋白1(RIG-1)是一类模式识别受体,在机体抗病毒天然免疫过程中发挥重要作用。为检测金定鸭RIG-1基因的组织特异性表达水平和体外抗禽流感病毒(AIV)活性,本研究采用RT-PCR方法扩增鸭RIG-1基因并克隆于pcDNA3.1(+)中构建重组真核表达质粒pcDNA-RIG-1,应用荧光定量PCR方法检测该基因在鸭不同组织中的特异性表达水平;并将pcDNA-RIG-1转染DF-1细胞,通过病毒TCID50测定、间接免疫荧光、荧光定量PCR的方法检测RIG-1的抗AIV活性。结果显示,从金定鸭脾脏中扩增的RIG-1基因的CDS序列大小为2 802 bp,编码934个氨基酸;RIG-1基因在不同组织中的表达各不相同,在鸭的脾脏和肾脏中表达量较高,肝脏中度表达,心脏、肺脏和肌肉低度表达;pcDNA-RIG-1转染DF-1细胞组与pcDNA3.1(+)转染组相比,病毒TCID50及相对表达量显著降低,IFN-β及Mx的相对表达量显著升高,表明RIG-1产生了显著的抗AIV作用。本研究为禽类RIG-1蛋白功能和家禽的天然免疫研究奠定了基础。
- 张雅春胡卫杰王建超王伟邓瑞坡李越赵颖慧孟庆文
- 关键词：抗病毒
- 抗流感病毒候选基因的筛选:单链抗体
- 本研究用9日龄鸡胚大量繁殖H1N1流感病毒，甲醛灭活处理后，超速离心的方法制备灭活全病毒抗原。用上述抗原对5周龄Babl/c小鼠进行免疫，经脾细胞与骨髓瘤细胞融合、克隆化共筛选获得7株单克隆抗体。病毒中和滴定试验初步筛选...
- 王伟李越赵颖慧臧凤霞周长良孟庆文陈洪岩
- 关键词：抗病毒基因单链抗体
- 文献传递
- 表达鸡新城疫病毒F蛋白的重组马立克氏病毒的构建及其鉴定被引量：3
- 2012年
- 为构建表达鸡新城疫病毒(NDV)融合蛋白(F)的重组马立克氏病毒(MDV),本研究采用RT-PCR方法从NDV强毒株F48E9基因组中扩增出病毒的融合蛋白F基因,构建由CMV启动子和BGH polyA组成的2.7 kb F基因表达盒。将其插入带有黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶基因(gpt)和MDV US2同源臂的中间转移载体pUAB-gpt中获得重组MDV转移载体pUAB-gpt-wF。将该转移载体与MDV-814疫苗株感染的鸡胚成纤维细胞(CEF)总DNA共转染CEF,经同源重组及gpt选择系统筛选,获得带有F基因表达盒的重组MDV(rMDV814-wF)。其体外增殖与亲本病毒没有差异。经间接免疫荧光试验、PCR、Southern-blot及western blot等试验证明,重组病毒在CEF中传至13代以上仍稳定表达NDV的F蛋白。该重组病毒的构建为MDV活载体疫苗的筛选及应用奠定了基础。
- 闫帅崔红玉李巧玲赵妍石星明赵晓岩胡顺磊王玫高明李越王云峰
- 关键词：马立克氏病毒重组病毒F基因
- 截短鸭RIG-Ⅰ蛋白的原核表达及其单克隆抗体的制备
- 目的:制备抗鸭RIG-Ⅰ单克隆抗体,鉴定其免疫学特性并建立分析检测体系.
方法:利用PCR技术将鸭RIG-Ⅰ基因helicase区和RD区部分编码序列分别进行扩增,并分别命名为c、d段;克隆到pET30a原核表...
- 孟庆文臧凤霞张雅春王伟赵颖慧李越周长良陈洪岩
- 关键词：单克隆抗体原核表达免疫学特性
- 文献传递
- A型流感病毒单链抗体基因的克隆及抗病毒活性研究
- 单链抗体(single-chain antibody fragment，ScFv)是基因工程方法制各的小分子抗体，由弹性连接肽将抗体的重链可变区与轻链可变区连接而成的重组抗体。其不含有抗体分子的恒定区片段，因而免疫原性弱...
- 李越
- 关键词：流感病毒单链抗体基因克隆抗病毒活性真核表达
- 文献传递
- 1.1kb、2.7kb、3.0kb鸡输卵管组织特异性启动子的克隆及细胞评价被引量：1
- 2014年
- 鸡卵清蛋白基因启动子是指导外源基因高效特异性表达的理想调控区,利用卵清蛋白启动子驱动外源蛋白大量表达,需要包含组织特异性相关序列。本研究以海兰白鸡的基因组为模板,采用PCR扩增了1.1 kb、2.7 kb和3.0 kb的卵清蛋白启动子区,置换pcDNA6.2-GFP中CMV启动子序列,构建了真核表达载体pOV1.1 kb-GFP、pOV2.7 kb-GFP、pOV3.0 kb-GFP;转染原代输卵管上皮细胞和中国仓鼠卵巢细胞(CHO),PCR、RT-PCR证明重组载体能够整合到细胞基因组内,并进行转录;倒置荧光显微镜下观测到绿色荧光蛋白表达;启动子表达效率由高到低依次是CMV启动子、1.1 kb、2.7 kb、3.0 kb卵清蛋白启动子。研究结果为瞬时表达模型的建立和输卵管生物反应器的研究奠定基础。
- 赵颖慧王伟李越周长良臧凤霞孟庆文陈洪岩
- 关键词：输卵管生物反应器启动子
- 核酸免疫制备抗猪流感病毒HA单克隆抗体
- 2014年
- 为制备H1N1猪流感病毒HA蛋白单克隆抗体(monoclonal antibody,McAb),本试验利用表达猪流感病毒A/Swine/Guangdong/2004(H1N1)毒株HA蛋白的表达质粒pVAX1-HA肌注股内肌免疫BALB/c小鼠,将其脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)进行融合;通过间接ELISA方法筛选和有限稀释法克隆,获得9株稳定分泌抗HA单克隆抗体的杂交瘤细胞。中和试验结果显示,单克隆抗体4D5株对H1N1流感病毒起中和作用,该单克隆抗体杂交瘤细胞培养上清的效价为1∶1024。这株单克隆抗体与哈尔滨兽医研究所国家重点实验室保存的H3N2流感病毒、H5N1流感病毒均不发生交叉反应,显示出了很好的H1特异性;间接免疫荧光试验结果显示,这株单克隆抗体能与H1N1流感病毒发生特异性反应。制备的特异性抗HA单克隆抗体为建立H1N1流感病毒免疫学检测方法和单链抗体抗病毒复制研究奠定了基础。
- 李越王伟赵颖慧周长良臧凤霞冉多良孟庆文陈洪岩
- 关键词：H1N1流感病毒血凝素蛋白单克隆抗体
