李朝阳
- 作品数：8 被引量：17H指数：3
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- 鸡β-防御素在大肠杆菌中的高效表达及复性被引量：3
- 2007年
- 鸡β-防御素(gallinacin-3,Gal3)是鸡体内重要的防御因子,本试验研究了鸡Gal3融合蛋白在大肠杆菌中高效表达的规律,并探索了重组蛋白质的复性工艺.结果表明,加入诱导剂后1h,开始有可检出量的重组蛋白质表达,2h的表达水平已接近最大量;化学诱导剂IPTG 0.2～1.2mol/L对重组蛋白的产量没有明显影响.经Lablmage软件分析,融合蛋白的产量可达菌体总蛋白的35%以上,且主要以包涵体形式存在.将所获包涵体用8mol/L尿素溶解后,分步稀释于含有氧化型谷胱甘肽和还原型谷胱甘肽的复性系统中,重组蛋白得到完全复性.12mg/L复性的重组鸡Gal3能抑制肠炎沙门氏菌的生长,24mg/L能抑制肠致病型大肠杆菌的生长.
- 邢海云高英杰宁官保赵建增乔彦良李朝阳
- 关键词：大肠杆菌融合蛋白抑菌作用
- 鸡β-防御素在大肠杆菌中的高水平表达及复性
- 鸡β-防御素(Gal3)是鸡体内最重要的防御因子,本文研究了鸡Gal3融合蛋白在大肠杆菌中高水平表达的规律,并探索了重组蛋白质的复性工艺.在加入诱导剂1h时,开始有可检出量的重组蛋白质表达,在2h时其表达水平已接近最大量...
- 邢海云高英杰宁官保赵建增乔彦良李朝阳
- 关键词：大肠杆菌融合蛋白抑菌作用
- 文献传递
- 蛋鸡α-干扰素基因的克隆与在大肠杆菌的高效表达与复性研究
- 根据Gene Bank中鸡IFN-α基因设计引物对,利用PCR技术克隆并测定了莱航鸡(SPF)的IFN-α基因,定名为ChIFN-Sl,与GeneBank中IFN-α比较,ORF长度均为582个核苷酸,其成熟肽包含162...
- 马凤龙李朝阳乔彦良傅兴伦赵怀龙贾世玉陈如明陈国柱
- 关键词：包涵体复性
- 文献传递
- 牛乳素Lfcin B基因的合成及其在酵母菌中的表达研究被引量：6
- 2008年
- [目的]为临床研究和治疗某些病原微生物引起的感染提供依据。[方法]参照LfcinB的氨基酸序列,利用化学合成法合成LfcinB基因并克隆到pPIC9K载体中,转化到酵母菌GS115感受态细胞中,用抗性选择标记G418筛选出高拷贝酵母菌转化子。利用甲醇诱导表达重组LfcinB,经Tricine-SDS-PAGE电泳检测目的蛋白牛乳铁蛋白素的表达情况,同时通过体外抑菌试验检测表达产物的抑菌活性。[结果]提取的酵母菌DNA扩增出1条预期的560bp左右的特异性条带。目的基因已经成功克隆到pPIC9K载体中,并转到酵母菌GS115中而且获得了表达。重组酵母表达上清中牛乳铁蛋白素抗菌肽对沙门氏肠炎杆菌的抗菌活性为42.857IU/ml,表明LfcinB基因的酵母表达载体构建成功。[结论]该研究证明利用化学合成法直接合成编码LfcinB的DNA构建真核表达载体、通过生物发酵工程来制备LfcinB是可行的。
- 马凤龙张瑜刘焕珍乔彦良傅兴伦李朝阳
- 关键词：基因表达抑菌活性
- 蛋鸡α-干扰素基因的克隆及其在大肠杆菌中的高效表达与复性研究被引量：1
- 2007年
- 根据GenBank中鸡IFN—α序列设计引物对，利用PCR技术克隆并测定了莱航鸡（SPY）的IFN-α基因，命名ChIFN-S1，与GenBank中IFN-α比较，ORF长度均为582个核苷酸，其成熟肽包含162个氨基酸，相互间同源性在98．8％-99．8％。将其成熟肽基因序列克隆入pQE30表达载体后，通过ITPG诱导，收集菌体高压破碎后提取包涵体并进行初步纯化，利用胱氨酸．半胱氨酸再氧化还原法对纯化后的变性液进行分段稀释法复性。细胞病变抑制法（CEF-VSV为检测系统）测定复性液的抗病毒比活性高达10^9U／mg以上．
- 马凤龙傅兴伦乔彦良李春荣李朝阳刘焕珍
- 关键词：包涵体复性
- 重组鸡β-防御素在毕赤酵母中的表达及其抑菌活性被引量：5
- 2008年
- 将鸡β-防御素(Gal-3)基因片段插入到酵母表达载体pPIC9k,在毕赤酵母GS115中进行表达,并研究了重组Gal-3的诱导、表达规律和抗菌谱。结果发现,重组菌株在接受诱导培养24h后开始有明显的Gal-3表达,诱导72h时达到表达高峰,至少持续表达96h以上。Tricine-SDS PAGE电泳发现,在约6000位置出现预期的蛋白质条带,约占分泌总蛋白的12.6%。证实,重组Gal-3能完全抑制金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、志贺痢疾杆菌、普通变形杆菌、伤寒沙门菌、化脓性链球菌、大肠杆菌、肠炎沙门菌等细菌的生长,其中大肠杆菌和肠炎沙门菌是对重组Gal-3最敏感的菌株。
- 万雪赵建增高英杰宁官宝邢海云乔彦良李朝阳
- 关键词：Β-防御素抑菌活性
- 猪IFN-γ基因的克隆与在大肠杆菌的高效表达与复性研究
- 根据GeneBank中猪IFN-γ基因设计引物对,利用RT-PCR技术克隆并测定了猪外周血白细胞IFN-γ基因,定名为poIFNRl,其ORF长度为501个核苷酸,其成熟肽包含144个氨基酸。将其成熟肽基因序列根据大肠杆...
- 马凤龙李朝阳乔彦良傅兴伦赵怀龙贾世玉陈如明陈国柱
- 关键词：包涵体复性
- 文献传递
- 重组Gallinacin-3的克隆及在大肠杆菌中的表达被引量：4
- 2006年
- 防御素是昆虫、植物和动物体内抗感染及激发特异性抗感染免疫的重要抗菌肽。Gallinacin-3(gal-3)可能是鸡体内最重要的β-防御素,但它的功能还未得到研究证实。本试验从鸡黏膜表皮组织中克隆了gal-3编码基因,并在大肠杆菌中成功表达了gal-3与谷胱甘肽转硫酶(GST)融合蛋白。经IPTG诱导后,融合蛋白的产量占细菌总蛋白的33.6%左右,主要以包涵体形式存在。用亲合层析技术从大肠杆菌裂解液中纯化出可溶性重组蛋白,并用酶切除目标蛋白的融合伴侣。抑菌试验发现,重组gal-3-GST融合蛋白在未去除融合伴侣时,就与游离的gal-3有着相同的抑菌活性,对沙门氏肠炎杆菌和志贺氏痢疾杆菌的最小杀菌浓度在20μg/mL(相当于约4μg/mL纯gal-3)左右,与其他物种β-防御素的活性相当。
- 赵建增乔彦良李朝阳
- 关键词：Β-防御素大肠杆菌融合蛋白抑菌作用
