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李文清: 作品数：39 被引量：114H指数：7; 供职机构：中山大学更多>>; 发文基金：广东省自然科学基金国家自然科学基金更多>>; 相关领域：生物学医药卫生轻工技术与工程化学工程更多>>

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枯草杆菌诱导型高效表达-分泌系统的构建被引量：6: 2001年; 利用枯草杆菌蛋白酶缺陷突变株,sac B诱导基因及degQ,degU(Hy)正调控基因构建了诱导型表达-分泌系统以解决枯草杆菌分泌大量胞外蛋白酶和外源基因表达水平不高的问题,采用共转化方法将枯草杆菌IA95的degU(Hy)突变引入枯草杆菌蛋白酶缺陷突变株DB403,获得degU(Hy)和蛋白酶三缺陷的新菌株DB1342;利用sacB基因的启动子——信号序列及芽孢杆菌的两个正调控基因degQ和degU(Hy)构建了诱导型表达-分泌载体pURT3及pURTQ4,由DB1342突变株及pURT3及pURTQ4载体组成枯草杆菌诱导型高效表达和分泌系统.在本系统中内源基因sacB的表达量是原菌株DB403的296倍,将地衣杆菌α-淀粉酶基因引入本系统后在sacB,degQ.degU的调控和蔗糖的诱导下,α-淀粉酶的表达量是在DB403中的140倍,证实degQ及degU对基因表达的增强作用是叠加的.; 吴青罗进贤徐柏年李文清; 关键词：诱导型枯草杆菌 Α-淀粉酶外源基因诱导基因调控基因

含笑属叶绿体基因组限制位点变异性研究被引量：2: 1994年; 采用不连续蔗糖梯度离心法分别提取白兰(Michelia alba DC.)和含笑(Michelia figo spreng.)叶绿体DNA。经BamHI酶切后,白兰和含笑分别产生21和25个片段,其中白兰的各酶切片段在含笑的限制酶图谱对应位置均观察到,白兰和含笑叶绿体基因组大小分别为139.74和143.18kb。两基因组间的遗传距离为0.029。叶绿体DNA限制酶酶切分析可以在分子水平上讨论植物间的系统关系。; 王艇罗进贤张宏达张添元李文清王红革; 关键词：叶绿体基因组含笑属

固定化“双功能”酵母基因工程菌在酒精工业生产中的应用被引量：6: 2004年; 应用基因克隆技术将黑曲霉产糖化酶基因cDNA转入经优化的受体菌(酿酒酵母京龙JL108号),获得多株具有产糖化酶能力的酿酒酵母,再经反复筛分、驯化获得JL1(YIp128D.17N),采用变性PVA固定化增殖活细胞包埋技术,将JL1制成具有糖化酒化“双功能”的固定化酵母,大幅度提高细胞数,增强了大生产基因工程菌的糖化、酒化能力,载体产酶能力在10u/g·h以上,酒精发酵醪液中酶活达20u/ml以上,在年产5000t的富川县酒精厂进行工业性生产应用试验,技术指标完全达到并超过传统工艺的生产水平,淀粉出酒率达55%以上。; 吴淑魁罗进贤陈海滨李文清叶若邻黄树华程少菊周玲; 关键词：基因工程固定化糖化酶基因

黑曲霉葡萄糖淀粉酶cDNA的克隆和序列分析及其在大肠杆菌中的表达(英文)被引量：3: 1992年; 以poly(A)^+mRNA为模板,噬菌体λgt 10 DNA为载体构建了黑曲霉3758的cDNA的文库。用编码黑曲霉葡萄糖淀粉酶329—418位氨基酸的DNA顺序(456bp)作探针从该文库中筛选葡萄糖淀粉酶cDNA。采用原位噬菌斑杂交法获得11个阳性噬菌斑,从其中6个噬菌体中提取DNA进行限制酶切分析和印迹法转移杂交试验,发现这些阳性噬菌体DNA含有不同大小的插入片段,它们都能与DNA探针杂交,表明已克隆了葡萄糖淀粉酶的cDNA。采用单酶切及交叉双酶切法制定了2.1kbcDNA的物理图并对2.1kb片段作了全序列分析。序列分析结果显示,克隆的2.1kb片段含5＇端非编码区,编码葡萄糖淀粉酶的结构基因及3＇端非编码区。克隆的cDNA片段转移至表达载体λgt11,感染大肠杆菌后,产生的噬菌斑转移硝酸纤维素滤膜后与^(125)I标记的抗葡萄糖淀粉酶抗体进行免疫反应,结果证明含2.1kbcDNA的λgt11表现葡萄糖淀粉酶阳性.2.1kb片段也曾转至质粒pPL2,转化大肠杆菌JF1125。细胞裂解物在SDS-PAGE电泳中可看到新的蛋白带。这些结果表明,克隆的黑曲霉葡萄糖淀粉酶cDNA可以在大肠杆菌中表达。; 李文清罗进贤张添元何玲; 关键词：黑曲霉葡萄糖淀粉酶 CDNA克隆

人血管抑制素在酿酒酵母中的分泌表达和活性鉴定被引量：3: 2002年; 将酵母交配因子 (MF)α1信号肽编码序列和人血管抑制素 (hAGN)cDNA融合序列插入穿梭载体pYADE4 ,构建得到分泌型重组表达质粒pYADEMA18.转化酿酒酵母JG110 7后 ,用 2 %乙醇和2 %甘油联合诱导表达 .ELISA分析表明 ,在诱导 14h～ 30h期间 ,hAGN获得了表达并分泌至细胞外 .发酵上清液经 75 %饱和度硫酸铵沉淀、CM 5 2纤维素离子交换层析和Superdex 75凝胶过滤层析纯化 .SDS PAGE分析显示 ,表达产物重组人血管抑制素 (rhAGN)相对分子质量约 5 0kD ,电泳纯度达到 94 %.生物活性分析证明 ,rhAGN在 0 0 1mg L～ 3 0mg L浓度范围内能够抑制人真皮内皮细胞株HDMEC增殖 ,抑制作用随剂量的增加而增强 .; 卢文菊罗进贤张晓实李文清; 关键词：酿酒酵母分泌表达活性鉴定

上皮间质转化的表观遗传调控被引量：3: 2017年; E-钙黏蛋白（E-cadherin）表达丧失是上皮间质转化（EMT）的重要标志，许多EMT转录因子结合到E-cadherin启动子区下调其表达，从而调节EMT。表观遗传调控包括DNA甲基化、组蛋白修饰、微小RNA，均参与EMT相关基因表达调控。研究表明，EMT转录因子协同表观遗传调控因子参与E-cadherin表达。靶向EMT表观调控代表着肿瘤新的治疗方向。; 李文清侯劲松; 关键词：DNA甲基化微RNAS 组蛋白修饰上皮间质转化

分泌载体pPSA18的构建及地衣杆菌淀粉酶在枯草杆菌中的表达和分泌: 1993年; 本文报道利用枯草杆菌噬菌体Spol 的启动子Spac Ⅰ,合成的解淀粉芽胞杆菌信号序列及枯草杆菌质粒PUB 18重组,构建分泌型表达载体并将地衣芽胞杆菌α-淀粉酶基因(缺失启动子及信号序列)引入构建的载体,获得重组质粒pPSA 18.将此质粒转化枯草杆菌QB1130(amy^-)感受态细胞,在含5μg/ml 卡那霉素及1%可溶性淀粉的LB 平板上筛选Km^r 及淀粉酶阳性的转化子.从阳性转化子中提取质粒,经酶切分析后重新转化枯草杆菌QB1130,得到的转化子全部都能向胞外分泌淀粉酶,证明构建的载体能在枯草杆菌中表达和分泌外源基因产物.; 张添元罗进贤李文清; 关键词：枯草杆菌淀粉酶芽孢杆菌

黑曲霉糖化酶cDNA的改造及其在酿酒酵母中的表达被引量：7: 1998年; 应用PCR技术扩增黑曲霉糖化酶cDNA不含非编码区50bp的5’端740bp的序列与该cDNA3’端1400bp的序列连接，获得切除了5’端非编码的糖化酶cDNA。将改造后的cDNA插到质粒pMA91的酵母PGK基因的启动子和转录终止信号之间，构建了含黑曲霉糖化酶基因的表达载体pMAG17。用原生质体转化法将重组质粒pMAG17引入酿酒酵母GRF18。酿酒酵母GRF18转化子在淀粉平板上产生水解透明圈，表明糖化酶已在酵母中表达并分泌至培养基中。测定转化子的胞外酶活力及淀粉水解率。结果表明：改造后的糖化酶基因在酵母中的表达、分泌水平及水解淀粉的能力都高于未改造的基因。; 李文清罗进贤叶若邻徐柏年; 关键词：黑曲霉糖化酶基因改造酿酒酵母 CDNA

一种铱配合物及其制备方法和应用: 本发明涉及医药技术领域，特别涉及一种铱配合物及其制备方法和应用，该配合物应用于抗非黑色素瘤皮肤癌的光动力治疗具有较强的疗效，在光照条件下可以破坏NAD<Sup>+</Sup>/NADH氧化还原平衡引起细胞死亡，对人非黑色...; 黄怀义范中贤李文清

大麦α-淀粉酶和黑曲霉糖化酶在酿酒酵母中的表达和分泌被引量：10: 1998年; 将大麦α 淀粉酶和黑曲霉糖化酶cDNA重组进同一大肠杆菌酵母穿梭质粒构建含双基因的表达分泌载体 pMAG1 5 .用原生质体转化法将 pMAG1 5引入酿酒酵母 (S .cerevisiaeGRF1 8) ,在酵母PGK基因的启动子和转录终止信号及本身的信号序列的调控下 ,实现大麦α 淀粉酶和糖化酶的高效表达 ,99%以上的酶活力分泌至培养基中 .构建的酿酒酵母菌株GRF1 8( pMAG1 5 )在含 1 5 %可溶性淀粉的培养基中 ,培养 47h能水解 99%的淀粉。; 罗进贤李政海李文清; 关键词：大麦 Α-淀粉酶黑曲霉糖化酶酿酒酵母

李文清

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