李子龙
- 作品数：25 被引量：3H指数：1
- 供职机构：中国科学院微生物研究所更多>>
- 发文基金：河北省自然科学基金河北省科技计划项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学轻工技术与工程理学更多>>
- 茂原链霉菌XM4的TGase酶学性质分析及其高产菌株的构建
- 2024年
- 【目的】系统地分析茂原链霉菌CGMCC4.1851(菌株XM4)谷氨酰胺转氨酶(TGase)的酶学性质,随后对该菌株进行改造以构建高产菌株,实现TGase在链霉菌内高效表达并缩短发酵周期、提高TGase生产效率。【方法】通过测定发酵液pH和TGase研究菌株XM4的发酵特性,采用醇沉结合离子层析纯化菌株XM4的TGase,测定酶的适宜反应条件(pH、温度、金属离子)和酶动力学等指标,并通过结合酪蛋白交联实验评价其催化效率;然后利用基因工程技术,通过异源表达、替换核糖体结合位点(ribosome binding sites,RBS)提高改造原始菌株,测定TGase产量。【结果】菌株XM4的TGase在pH 4.0-11.0范围内具有良好的活性和稳定性,其中最适反应温度为50℃,最适pH值为10.0;在改造后的表达系统中实现了TGase在链霉菌中的高效表达,产量相较于原始菌株提升了103.3%,同时发酵时间缩短至24 h。【结论】菌株XM4的TGase具有良好的耐酸碱性和热稳定性,在食品工业特别是乳制品加工中具有广阔的应用前景。同时,改造菌株可实现TGase的高效生产,为TGase的工业化生产与应用提供了新的选择。
- 修涵李子龙袁方李国莹王为善毛淑红
- 关键词：谷氨酰胺转氨酶酶学特性
- 反选标记法在微生物基因敲除中的应用被引量：1
- 2023年
- 随着后基因组时代的到来,简单高效的基因编辑工具和方法在研究微生物的基因表达调控、工程菌株的遗传改造等方面发挥了巨大作用。反选标记法是基于同源重组原理进行基因敲除的一种便捷高效的方法,该方法通过选择性的遗传标记的丢失和回补,实现对靶基因的敲除或目的基因的插入等分子遗传操作。这种选择性的遗传标记一般不依赖于传统的抗生素筛选标签,且同一反选标记能够反复使用,可连续进行多轮遗传操作,实现对多个基因靶位点的分子编辑。对近年来反选标记基因的种类、作用原理及在微生物基因敲除实验中的应用进行综述,以期为高效、可靠的分子编辑方法的研究提供参考。
- 杨镒婴李晓乐李子龙李秋园陈伟尹守亮
- 关键词：基因敲除分子遗传
- 利用Tn5型转座突变系统筛选高产阿维菌素菌株被引量：1
- 2021年
- 目的:转座突变技术是发现新功能基因和获得高产天然产物菌株的一种有效策略。通过理性设计和构建Tn5型转座突变系统,并将其应用于阿维链霉菌,筛选高产阿维菌素的工程菌株。方法:在转座突变载体pUCTN转座插入片段的上游和下游分别引入链霉菌常用的强启动子kasOp*和P21,强化插入位置上游和下游基因的转录表达;在插入片段两端分别添加双向转录终止子T1和T2,有效终止插入序列两端靶基因的转录,引入强启动子和终止子的目的在于增强对转座突变株生理代谢活动的扰动。结果:通过优化供体菌和受体菌的比例,转座效率显著提高。随机选择500株转座突变株进行发酵和阿维菌素产量测试,筛选到3株突变株的阿维菌素产量明显高于出发菌株产量的50%以上。结论:Tn5转座突变系统为研究阿维链霉菌的基因功能和生理代谢提供了有效的分子遗传工具。
- 冯宝琪冯娇张苗刘洋曹睿尹涵之齐凤仙李子龙尹守亮
- 关键词：阿维链霉菌阿维菌素
- 包含别构转录因子调控系统的生物传感器、试剂盒及其在小分子检测中的用途
- 本发明涉及包含别构转录调控系统的生物传感器、试剂盒及其在小分子检测中的用途。
- 杨克迁王为善李珊珊范可强李子龙
- 文献传递
- 一种糖化酶及其编码基因与表达方法
- 本发明公开了一种糖化酶及其编码基因与表达方法。本发明的糖化酶是如下a)或b)的蛋白质：a)由序列表中序列2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；b)将序列表中序列2所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添...
- 江宁李子龙贺鹏
- 文献传递
- 包含别构转录因子调控系统的生物传感器、试剂盒及其在小分子检测中的用途
- 本发明涉及将小分子信号转化为DNA扩增产物信号的体外(in vitro)检测技术，用于精准检测小分子的生物传感器、试剂盒及其相关的方法和用途。所述生物传感器的机理在于，自然界里微生物利用别构转录因子(allosteric...
- 张立新王为善姚永鹏曹佳倩李珊珊李子龙
- 文献传递
- 一种提高去甲四环素产量的方法
- 本发明提供一种提高去甲四环素产量的方法。本发明通过对金霉素链霉菌(Streptomyces aureofaciens)进行基因工程改造，以提高工程菌发酵生产去甲四环素的产量。本发明中涉及的基因包括金霉素生物合成基因ctc...
- 李子龙张超波庞申范可强王为善王绘砖袁昉徐珍
- 文献传递
- 热葡糖苷酶地芽孢杆菌CRISPR type I-B基因编辑及其应用
- 本发明公开了热葡糖苷酶地芽孢杆菌CRISPR type I‑B基因编辑及其应用，通过建立内源CRISPR type I‑B系统的基因编辑方法，有效解决了基于反向筛选的同源重组基因编辑方法存在的编辑效率低、费时费力，以及异...
- 王为善杨志恒李子龙卜瑞红
- 包含别构转录因子调控系统的生物传感器、试剂盒及其在小分子检测中的用途
- 本发明涉及将小分子信号转化为DNA扩增产物信号的体外(in vitro)检测技术，用于精准检测小分子的生物传感器、试剂盒及其相关的方法和用途。所述生物传感器的机理在于，自然界里微生物利用别构转录因子(allosteric...
- 张立新王为善姚永鹏曹佳倩李珊珊李子龙
- 文献传递
- 热葡萄糖苷酶地芽孢杆菌工程菌及其构建方法及应用
- 本发明提供热葡萄糖苷酶地芽孢杆菌工程菌及其构建方法及应用。本发明通过对热葡萄糖苷酶地芽孢杆菌进行基因工程改造，引入ribC(G199D)点突变，并依次敲除purR、purA、ccpN、ldh基因，然后向改造后的工程菌中导...
- 李子龙杨志恒王为善张立新
- 文献传递
