朱杰
- 作品数：11 被引量：28H指数：4
- 供职机构：中国人民解放军总医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京市自然科学基金北京市科技新星计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- DEK基因RNAi慢病毒表达载体的构建及其功能鉴定被引量：2
- 2015年
- 目的构建DEK基因的RNA干扰(RNAi)慢病毒表达载体,并对其生物学功能进行初步检测。方法采用RNAi技术,根据DEK基因的序列,确定其有效靶序列,合成DEK基因的Oligo DNA,退火形成双链DNA,将其克隆到经Bam HⅠ与EcoRⅠ酶切后的小干扰RNA(siRNA)表达载体PSIH-H1上,产生PSIH-H1-DEK慢病毒载体,筛选阳性克隆并测序鉴定。与3个包装质粒共转染293T细胞,包装成慢病毒后感染乳腺癌细胞ZR75-1,经嘌呤霉素(puromycin,puro)筛选2周后,收集部分细胞利用实时聚合酶链反应(real time-PCR,RT-PCR)和Western印迹分别检验DEK在信使RNA(mRNA)和蛋白水平的敲低效果,并通过细胞生长实验检测DEK对人乳腺癌细胞系ZR75-1细胞生长的影响。结果 PCR和DNA测序结果证实,DEK siRNA慢病毒表达载体PSIH-H1-DEK构建成功。RT-PCR和Western印迹结果显示,构建的DEK siRNA可有效抑制DEK基因的表达,并由此建立了敲低DEK的稳定克隆。生长曲线实验表明,DEK siRNA可抑制人乳腺癌细胞系ZR75-1细胞的生长。结论成功构建了DEK基因的RNAi慢病毒表达载体,感染人乳腺癌细胞系ZR75-1细胞后,有效沉默了ZR75-1细胞中的DEK基因的表达,为进一步研究DEK基因在乳腺癌中的作用奠定基础。
- 朱杰刘婕丁丽华禾荣华张亚楠陈志达罗晓丽叶棋浓吕朝晖
- 关键词：RNA干扰慢病毒载体
- 性别对ARR在原发性醛固酮增多症筛查中的价值的影响被引量：7
- 2017年
- 目的探讨性别对血浆醛固酮/肾素活性比值(PAC/PRA,ARR)在原发性醛固酮增多症(简称原醛症)筛查中的价值的影响。方法搜集1992-2014年在解放军总医院确诊的451例原醛症及300例原发性高血压(EH)患者的临床资料,根据性别进行分组,比较组间临床特点及生化指标,利用受试者工作特征曲线(ROC)寻找不同性别ARR的最佳诊断切点。结果原醛症患者血浆醛固酮、血钠及ARR明显高于EH患者(P<0.01),但血浆肾素活性(PRA)、血钾及体重指数(BMI)明显低于EH患者(P<0.01),两组年龄、高血压病程及血压水平无明显差异(P>0.05)。无论在原醛症或EH患者中,男性PRA均明显低于女性,但立位醛固酮未见明显差异(P>0.05)。男性患者中筛查原醛症的最佳ARR切点为19.11,曲线下面积(AUC)为0.968,敏感性为92.44%,特异性为93.08%,约登指数(YI)为0.86;女性患者中ARR最佳诊断切点为27.26,AUC为0.956,敏感性为92.07%,特异性为90.00%,YI为0.82。当根据总体人群最佳切点调整男性或女性ARR值时,二者YI均下降。男性最佳ARR切点要小于现阶段国内外指南推荐范围。结论性别是影响利用ARR筛查原醛效率的重要因素,应考虑设立性别相关的切点,女性最佳切点可能高于男性。
- 宋烨琼王琳朱杰贾晓蒙庞萍金楠臧丽杨国庆谷伟军杜锦王先令郭清华杨丽娟吕朝晖巴建明窦京涛母义明
- 关键词：醛固酮增多症性别因素体位
- p300基因小干扰RNA慢病毒载体的构建及其对乳腺癌ZR75-1细胞的影响
- 2014年
- 目的:构建p300基因的小干扰RNA(siRNA)慢病毒表达载体,检测其对p300蛋白表达的干扰,以及对乳腺癌细胞ZR75-1生长的影响。方法:利用RNA干扰(RNAi)技术设计并合成针对p300基因的siRNA,并将其克隆到siRNA表达载体pSIH-H1上,经酶切和测序验证,用293T人胚肾细胞包装p300 siRNA慢病毒,感染乳腺癌细胞ZR75-1,建立敲低p300表达的稳定细胞株,通过实时定量PCR和Western印迹检验RNAi的干扰效果,利用细胞生长实验检测p300 siRNA对ZR75-1细胞生长的影响。结果:酶切和测序证明构建了p300 siRNA真核表达载体;实时定量PCR和Western印迹证明构建的siRNA能有效抑制p300基因的表达,并建立了敲低p300表达的稳定细胞株;细胞生长实验证实p300 siRNA可有效促进ZR75-1细胞的生长。结论:构建了p300基因的siRNA真核表达载体,转染细胞后能有效抑制p300基因的表达,且能促进ZR75-1细胞的生长,表明构建的p300 siRNA具有功能。
- 陈志达丁丽华张亚楠刘婕朱杰叶棋浓卫勃
- 关键词：小干扰RNA慢病毒载体
- 不同体位血浆醛固酮浓度与肾素活性比及其联合血浆醛固酮浓度对醛固酮瘤的诊断价值
- 目的：探讨不同体位血浆醛固酮浓度(PAC)与肾素活性(PRA)比(ARR)及其联合PAC对醛固酮瘤的诊断价值。方法：回顾性分析2012年1月至2014年12月解放军总医院确诊的85例醛固酮瘤及155例原发性高血压患者的临...
- 朱杰吕朝晖
- GFP-LC3B真核表达载体的构建及表达鉴定
- 2015年
- 目的:构建人自噬相关基因LC3B的真核表达载体p EGFP-C1-LC3B,并鉴定其表达。方法:以乳腺文库为模板,PCR扩增LC3B全长基因,将其克隆至p EGFP-C1表达载体,得到p EGFP-C1-LC3B重组质粒,酶切和测序鉴定后,转染ZR75-1细胞,Western印迹检测真核细胞中GFP-LC3B融合蛋白的表达,用倒置荧光显微镜观察自噬诱导剂雷帕霉素处理和未处理ZR75-1细胞质中GFP-LC3B的分布。结果:Western印迹可见GFP-LC3B融合蛋白表达条带;在荧光显微镜下,ZR75-1细胞内可见绿色荧光,雷帕霉素刺激后有明显绿色荧光聚集体形成。结论:人自噬相关基因LC3B的真核表达载体p EGFP-C1-LC3B构建成功,为进一步研究自噬在乳腺癌细胞中的作用机制奠定了基础。
- 朱杰丁丽华刘婕禾荣华张亚楠陈志达罗晓丽叶棋浓吕朝晖
- 关键词：自噬真核表达载体绿色荧光蛋白
- 卡托普利抑制试验中原醛症最佳诊断指标的探讨被引量：6
- 2018年
- 目的探讨卡托普利抑制试验(CCT)中不同评价指标对原发性醛固酮增多症(PA,简称原醛症)的诊断价值。方法回顾性分析2014年1月-2016年3月在解放军总医院内分泌科诊治的222例高血压患者的临床资料,其中醛固酮瘤(APA)90例,特发性醛固酮增多症(IHA)44例及原发性高血压(EH)88例。所有患者均行CCT,应用受试者工作特征曲线(ROC)对CCT后醛固酮绝对值、醛固酮抑制率、肾素活性上升率、肾素活性上升率联合醛固酮抑制率和血浆醛固酮/肾素活性比值(ARR)进行评价,确定最佳诊断切点及其敏感性和特异性。结果 CCT后APA、IHA和EH组醛固酮抑制率分别为0.3%、0.7%和4.0%。PA组(APA组和IHA组)肾素活性上升率明显低于EH组(P<0.05),APA组、IHA组和EH组肾素活性上升率分别为0(0,1)、0.25(0,1)和0.97(0.23,2.27)。CCT后醛固酮绝对值、醛固酮抑制率、肾素活性上升率、肾素活性上升率联合醛固酮抑制率和ARR的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.703、0.575、0.318、0.616和0.901,最佳切点分别为417.20、2.90、–0.44、0.53和22.70[醛固酮浓度(PAC)单位采用ng/dl,1pmol/L=27.7ng/dl;肾素活性(PR A)单位为μg/(L·h)],敏感度分别为81.7%、10.1%、95.5%、62.4%和81.7%,特异度分别为51.1%、97.8%、7.8%、60.4%和87.7%。结论高血压患者包括EH及原醛症CCT后醛固酮抑制率远低于30%,CCT后ARR对原醛症的诊断价值优于醛固酮绝对值、醛固酮抑制率、肾素活性上升率及肾素活性上升率联合醛固酮抑制率。
- 赵玲王琳王琳朱杰朱杰臧丽贾晓蒙臧丽杨国庆谷伟军杜锦王先令郭清华吕朝晖巴建明
- 关键词：原发性醛固酮增多症
- 尿醛固酮与不同体位血浆肾素活性比值对原发性醛固酮增多症的筛查价值被引量：6
- 2018年
- 目的探讨24h尿醛固酮(UALD)与不同体位血浆肾素活性(PR A)比值(UARR,UARR=UALD/PR A)对原发性醛固酮增多症(PA)的筛查价值。方法回顾性分析2012年1月—2014年12月解放军总医院确诊的123例PA及155例原发性高血压(EH)患者的临床资料,分别计算UARR和不同体位血浆醛固酮与肾素活性比值(ARR),采用ROC曲线得出UARR的曲线下面积(AUC)、最佳切点,并与公认的筛查指标ARR进行比较。结果立位UARR的AUC为0.954,其最佳切点为14.20nmol/[μg/(L·h)],敏感性为91.87%,特异性为88.64%;卧位UARR的AUC为0.918,敏感性为78.05%,特异性为87.12%;立位UARR的AUC高于卧位(Z=2.572,P=0.01)。立位ARR的AUC为0.929,敏感性为85.88%,特异性为90.91%;卧位ARR的AUC为0.913,敏感性为84.55%,特异性为81.82%,立位UARR的AUC分别高于立、卧位ARR的AUC(Z=2.094,P=0.036;Z=2.675,P=0.008)。结论立位UARR与ARR同样是PA的一项有效筛查指标。
- 朱杰朱杰赵玲王琳王琳范晓静贾晓蒙臧丽杨国庆谷伟军杜锦王先令郭清华吕朝晖巴建明
- 关键词：原发性醛固酮增多症
- 生理盐水试验对原发性醛固酮增多症诊断价值的再评价被引量：2
- 2018年
- 目的评价生理盐水试验(SIT)对原发性醛固酮增多症(PA,简称原醛症)的诊断价值。方法回顾性分析2014年1月-2016年3月在解放军总医院内分泌科诊治并进行盐水输注试验的132例高血压患者的临床资料,包括PA组72例及原发性高血压(EH)组60例。根据盐水输注后血浆醛固酮的变化,绘制受试者工作曲线(ROC)并寻找诊断PA的最佳切点。结果 PA组和EH组立位醛固酮/肾素活性比值(ARR)≥20的患者分别占83.3%和15.0%,无论PA或EH组,盐水负荷前后两组间(ARR<20与ARR≥20)血浆醛固酮水平差异均无统计学意义(P>0.05)。与立位ARR≥20的患者比较,EH组立位ARR<20者肾素活性更高(P<0.01),血钠水平更低(P<0.05)。盐水负荷后,PA组和EH组患者中血浆醛固酮水平仍大于10ng/dl的比例分别为91.7%和75.0%,诊断PA的最佳切点值为388.1pmol/L(14.0ng/dl),曲线下面积(AUC)为0.674,敏感度及特异度分别为63.9%及66.7%,约登指数(YI)为0.3。结论生理盐水输注是一项安全且可靠的PA确诊方法,盐水负荷后血浆醛固酮的最佳诊断切点值取决于研究人群的纳入及诊断标准。
- 王琳王琳赵玲朱杰贾晓蒙臧丽贾晓蒙臧丽杨国庆谷伟军杜锦王先令郭清华吕朝晖巴建明
- 关键词：原发性醛固酮增多症
- 不同体位血浆醛固酮浓度与肾素活性比及其联合血浆醛固酮浓度对醛固酮瘤的诊断价值被引量：5
- 2016年
- 目的 探讨不同体位血浆醛固酮浓度（PAC）与肾素活性（PRA）之比（ARR）及其联合PAC对醛固酮瘤的诊断价值.方法 回顾性分析2012年1月-2014年12月解放军总医院确诊的85例醛固酮瘤及155例原发性高血压患者的临床资料,并计算ARR值,应用ROC曲线得出ARR的最佳切点.结果 （1）卧位ARR的最佳切点为1707.4（pmol/L）/（μg·L-1·h-1）[61.64（ng/dl）/（μg·L-1·h-1）],敏感度为89.41％,特异度为80.65％,准确性为83.75％;卧位ARR＞1707.4（pmol/L）/（μg·L-1·h-1）[61.64（ng/dl）/（μg·L-1·h-1）]联合卧位PAC＞ 329.4 pmol/L时,敏感度降低至84.71％,特异度升高至89.03％,准确性升高至87.5％.（2）立位ARR的最佳切点为741.5（pmol/L）/（μg·L-1·h-1）[26.77（ng/dl）/（μg·L-1·h-1）],敏感度为85.88％,特异度为91.61％,准确性为89.58％;立位ARR＞ 741.5 （pmol/L）/（μg·L-1·h-1）[26.77（ng/dl）/（μg · L-1·h-1）]联合立位PAC＞ 323.1 pmol/L时,敏感度不变,特异度升高至94.84％,准确性升高至91.67％.结论 不同体位的ARR均可以作为醛固酮瘤的筛查指标,当其联合PAC时,有助于提高诊断的特异性和准确性.
- 朱杰金楠臧丽谷伟军杨国庆杨丽娟郭清华王先令吕朝晖巴建明窦京涛母义明
- 关键词：醛固酮增多症
- 慢病毒载体介导E6AP基因敲低乳腺癌细胞株的构建及其功能检测被引量：1
- 2014年
- 目的构建E6AP基因的小干扰RNA(siRNA)真核表达载体,并检测其对乳腺癌细胞ZR75-1生长的影响。方法利用RNA干扰(RNAi)技术设计并合成两条E6AP基因的siRNA,并将其与siRNA表达载体p SIH-H1连接。经过酶切和测序鉴定成功后,人胚肾细胞293T包装E6AP siRNA的慢病毒,然后感染乳腺癌细胞ZR75-1,建立敲低E6AP表达的稳定细胞株。稳定细胞株建立后通过实时定量PCR(qRT-PCR)和Western印迹等方法检测RNAi的干扰效果,并利用细胞生长实验检测E6AP siRNA对乳腺癌细胞生长的影响。结果 DNA测序证明,成功构建了E6AP siRNA的表达载体。实时定量PCR和Western印迹实验证明,构建的siRNA确能有效抑制E6AP基因的表达,并建立了敲低E6AP表达的稳定细胞株。生长实验表明,E6AP siRNA可有效抑制细胞的生长。结论成功构建E6AP基因的siRNA真核表达载体,转染细胞后能有效地抑制E6AP基因的表达,且抑制细胞ZR75-1的生长。
- 陈志达丁丽华刘婕张亚楠朱杰罗晓丽刘国晓叶棋浓卫勃
- 关键词：基因表达乳腺肿瘤
