张凌
- 作品数：4 被引量：4H指数：1
- 供职机构：首都医科大学北京神经科学研究所更多>>
- 发文基金：北京市自然科学基金国家教育部博士点基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- α-突触核蛋白N-端结构域参与线粒体功能的调控
- 2009年
- 目的:确定α-Synuclein蛋白与线粒体相互作用的功能结构域,并检测该结构域对线粒体功能的影响。方法:构建重组融合蛋白质粒pCMV-myc/α-Syn-WT、pCMV-myc/α-Syn-N和pCMV-myc/α-Syn-△N,转染人胚肾HEK293T细胞,通过免疫共沉淀明确α-Synuclein蛋白与线粒体相互作用的功能结构域。使用表达α-Synuclein蛋白的病毒上清感染小鼠多巴胺能神经细胞MN9D,通过免疫荧光、流式细胞术检测线粒体膜电位及Cytochrome c释放。结果:成功构建了pCMV-myc/α-Syn-WT、pCMV-myc/α-Syn-N和pCMV-myc/α-Syn-△N融合蛋白质粒,免疫共沉淀明确α-Synuclein N-端为其功能结构域,JC-1染色发现N-端使线粒体膜电位降低,流式细胞术证实N-端使Cytochrome c释放明显增加。结论:α-Synuclein N-端是其与线粒体相互作用的功能结构域,N-端降低线粒体功能。
- 吕王乐张韬刘琦范春香张凌赵焕英赵春礼杨慧
- 关键词：线粒体线粒体膜电位细胞色素C
- 关于医学神经生物学教学改革的讨论被引量：2
- 2009年
- 现代神经科学的高速发展使得神经科学融合了大量高新科学技术手段和科学研究成果,这就要求医学神经生物学的教学既要充分体现科学发展的成果,又要适应学生建立综合知识体系和正确学习动机,培养创造性思维和解决问题能力的需要。本文就神经生物学教学中的相关问题进行了讨论。
- 张凌杨慧
- 关键词：医学神经生物学教学知识体系学习动机创造性思维
- 多巴胺D1受体调控大脑神经前体细胞增殖的机制被引量：1
- 2007年
- 目的:哺乳动物脑皮质中的多数神经细胞都产生于大脑发生期短暂存在的皮质增殖区,位于增殖区的细胞高水平表达多巴胺D1受体,实验探讨D1受体的相关功能作用。方法:实验于2002-06/2003-09在美国马里兰州立大学生物医学系完成。①选取孕14d的CD1雌鼠8只,麻醉后解剖取出胎鼠大脑,以含20mg/L表皮生长因子的无血清培养液培养脑皮质区的细胞作为实验模型。②细胞培养96h后,离心粉碎。取40μg样本于梯度SDS凝胶电泳,分离开的蛋白转移到纤维素膜,封闭后与细胞表型特异抗原(β-Ⅲtubulin,Vimentin,Nestin)或多巴胺D1A或D1B的抗体4℃反应过夜,进行WesternBlot检测。③细胞培养72h后,加入0,6.4,12.5,25,50,75,100μmol/L多巴胺D1受体激动剂SKF38393和25g/LBrdU处理6h,与FITC-标记的抗BrdU抗体4℃反应过夜,固定后加入5mg/LPI和1g/LRnase,检测BrdU摄入情况。④在确定细胞周期基础特征的试验中,培养细胞不做药物处理,于培养后8,21,34,48,72,96h分别采集。在监测多巴胺D1受体激动剂SKF38393对细胞周期影响的试验中,0～100μmol/LSKF38393在培养后48h被加入到培养皿中,孵育至96h。在SKF38393的药理特异性试验中,同时加入75μmol/LSKF38393和10μmol/LD1受体特异性拮抗剂SCH23390或NNC010756连续孵育48h。离心固定后加入5mg/LPI和1g/LRNase。PI染色细胞可以显示分布于G0-1,S,G2-M期以及细胞凋亡情况。结果:①细胞表面不同抗原亚型的定量分布和动态变化:约60%细胞vimentin染色阳性,β-Ⅲtubulin染色阳性细胞占35%,nestin染色阳性细胞占25%。Westernblot蛋白定量分析结果显示,vimentin和nestin的表达呈增加趋势,且nestin尤为明显,相反β-Ⅲtubulin的表达呈降低趋势。②细胞多巴胺D1受体表达的定量分析和动态变化:(95±4)%的细胞D1A受体表达阳性,(94±6)%的细胞D1B受体表达阳性。D1A、D1B受体在任何一个抗原亚型的细胞群中均有高比例表达。③多巴胺D1受�
- 张凌杨慧Michale S Lidow
- 关键词：细胞周期
- 原子力显微镜检测过表达α-突触核蛋白引起的线粒体结构变化被引量：1
- 2009年
- 目的:利用原子力显微镜等方法,明确α-突触核蛋白(α-synuclein,α-syn)过表达对线粒体的影响。方法:将腺相关病毒(AAV)载体介导表达的α-syn(AAV/α-syn)病毒包装颗粒,给大鼠脑内黑质区定位注射,建立α-syn过表达的大鼠模型,并以AAV介导表达的报告基因LacZ(AAV/LacZ)为动物对照组。提取大鼠黑质脑组织的线粒体,并通过JC-1染色检测线粒体膜电势(ΔΨ)变化和Western blot检测线粒体中α-syn蛋白量的变化;采用原子力显微镜观测线粒体表面结构的变化。结果:实验组大鼠黑质脑组织过表达α-syn基因,第16周时,Western blot显示线粒体中α-syn蛋白量增加约2倍;JC-1染色发现ΔΨ下降;原子力显微镜观测可见线粒体体积增大,线粒体膜表面出现较多孔道样改变。结论:大鼠黑质脑组织过表达α-syn基因,第16周时,可导致α-syn蛋白在线粒体积聚;并可引起线粒体增大、膜形成孔道样改变、ΔΨ下降。
- 赵春礼祝元刚段春礼鲁玲玲张凌杨慧
- 关键词：帕金森病Α-突触核蛋白线粒体原子力显微镜
