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呼吸道合胞病毒F蛋白基因片段真核表达纯化及ELISA方法建立的研究: 目的表达纯化人呼吸道合胞病毒(HRSV)F蛋白基因片段,建立间接ELISA方法,为进一步大量表达F基因,构建基因工程疫苗和快速临床检测奠定基础。方法反转录并扩增F基因中的F片段,连接到载体中,转染真核细胞,诱导并纯化重组...; 包洪刘爱忠尹文东李艳蕾于庭; 关键词：呼吸道合胞病毒重组蛋白间接ELISA方法; 文献传递

全血γ-干扰素释放试验对活动性结核病的辅助诊断价值被引量：5: 2012年; 目的研究全血γ-干扰素(interferon gamma,IFN-γ)释放试验对活动性结核病的辅助诊断价值。方法应用化学发光酶免疫分析法分别检测124例结核病患者、60例非结核肺部疾病患者、33名健康对照者全血中IFN-γ水平;绘制受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC曲线)确定其诊断活动性结核病的临界值,并评价其对活动性结核病的诊断效能。结果活动性结核病患者组结核特异性IFN-γ的水平为405±306pg/mL,显著高于非结核肺部疾病组(111±127pg/mL,P<0.001)和健康对照组(52.20±28.28pg/mL,P<0.001)。而健康对照组与非结核肺部疾病组差异无统计学意义(P>0.05)。结核特异性IFN-γ诊断结核病的临界值为143pg/mL,其灵敏度和特异性分别为86.3%和77.8%。结论全血γ-干扰素释放试验可能成为活动性结核病辅助诊断指标之一。; 王莹阳幼荣尹文东吴雪琼于庭; 关键词：结核 Γ-干扰素

结核分枝杆菌重组Ag85A、Ag85B蛋白免疫原性的研究被引量：3: 2011年; 目的研究结核分枝杆菌重组Ag85A(rAg85A)和/或Ag85B(rAg85B)蛋白与母牛分枝杆菌菌苗(Mycobacteri-um vaccae,MV)联合免疫的免疫原性。方法 60只雌性BALB/c小鼠随机分为下列6组:(1)阴性对照组:磷酸盐缓冲液(PBS)组,(2)阳性对照组:卡介苗(BCG)组,(3)阳性对照组:MV组,(4)实验组:rAg85A-MV组,(5)实验组:rAg85B-MV组及(6)实验组:rAg85A-rAg85B-MV组。每2周免疫1次,共免疫3次。末次免疫结束后第14天杀鼠,用ELISA法检测血清中IgGI、gG1和IgG2a水平;ELISPOT检测脾脏分泌γ干扰素(IFN-γ)的T淋巴细胞斑点数;流式细胞术检测全血单个核细胞内Th1和Th2百分比。结果三个实验组小鼠血清抗体水平均明显高于三个对照组(P<0.001);三个实验组和两个阳性对照组小鼠的T淋巴细胞斑点数均明显高于阴性对照组(P<0.05);rAg85A-rAg85B-MV组小鼠Th1百分比明显高于其余五组(P<0.001),三个实验组Th1/Th2比值均明显高于三个对照组(P<0.05)。结论结核分枝杆菌rAg85A和rAg85B蛋白均具有很强的免疫原性,与MV联合免疫可增强其Th1型细胞免疫应答。; 尹文东于庭梁艳阳幼荣肖漓王兰王莹史迎昌张俊仙吴雪琼; 关键词：结核分枝杆菌 AG85A AG85B 母牛分枝杆菌疫苗

呼吸道合胞病毒F蛋白基因片段真核细胞表达纯化及其ELISA建立的研究: 2011年; 目的表达纯化人呼吸道合胞病毒(HRSV)F蛋白基因片段,建立间接夹心酶联免疫吸附分析法(ELISA),为进一步大量表达F基因、构建基因工程疫苗和快速临床检测奠定基础。方法逆转录并扩增F基因中的F1片段,连接到载体中,转染真核细胞,诱导并纯化重组F蛋白。将纯化重组F蛋白免疫小鼠制备抗体血清,并建立间接夹心ELISA。通过100份标本应用"金标法"对所建立的方法进行验证。结果成功获得F基因中F1片段的扩增产物,筛选阳性克隆,得到相对分子质量为45000的大量表达蛋白。确定了间接夹心ELISA的最佳反应条件和工作浓度;鼠抗F1IgG最佳质量浓度为3.2μg/mL,样品最佳反应时间为37℃70 min,酶标兔抗鼠IgG最佳工作浓度为1∶6 000。与"金标法"对比,阳性样品的变异系数为3.2%～8.6%,阴性样品的变异系数为5.1%～8.3%,均小于10.0%,表明该方法有良好的重复性。结论构建的重组真核细胞能够大量表达F蛋白,纯化的F蛋白具有很好的免疫原性,制备的抗体血清用于ELISA能够得到准确的检测结果。; 包洪刘爱忠尹文东李艳蕾于庭; 关键词：呼吸道合胞病毒重组蛋白

结核分枝杆菌重组Ag85A、Ag85B蛋白联合母牛分枝杆菌免疫原性的研究: 目的：将Ag85A-pET30a大肠杆菌基因工程菌和Ag85B-pET24b大肠杆菌基因工程菌诱导表达并纯化后获得rAg85A和rAg85B蛋白。研究rAg85A和/或rAg85B蛋白与MV联合免疫的免疫原性。方法：用...; 尹文东; 关键词：结核分枝杆菌 AG85A AG85B 母牛分枝杆菌疫苗; 文献传递

蛋白芯片联合检测多种结核抗体在结核病诊断中的应用价值被引量：12: 2011年; 目的设计并建立一种基于结核分支杆菌表面抗原表位的蛋白芯片检测方法,用来进行临床分离样本的检测,探讨其在临床诊断中的应用价值。方法利用生物信息学方法,分析结核分枝杆菌抗原Ag85A,38 kD,CFP10,MPT51,16 kD,TB10.4和ESAT-6的表位,并克隆表达这些优势肽段,用于制备多靶点的蛋白芯片;使用该芯片对300株临床分析样本进行检测,与商品化蛋白芯片结果进行比较,分析其敏感性与特异性。结果在200例临床确诊结核病人中,商品化芯片检测敏感性为35.5%。而本文建立的蛋白芯片检测敏感性为98.5%;在100例临床检测非结核病人中,商品化芯片特异性92%,而本文建立的蛋白芯片特异性97%。结论基于优势表位的蛋白芯片敏感性及特异性均显著高于商品化试剂盒,具有较高的临床诊断价值,可提高检测阳性率。; 陈红兵吴丽霞张娟李静王卉蒋俊张小刚尹文东于庭; 关键词：结核分枝杆菌蛋白芯片

结核分枝杆菌Ag85A/MPT-64融合基因DNA疫苗的构建及免疫研究中ELISPOT技术的应用: 目的构建编码结核分枝杆菌蛋白Ag85A/MPT-64融合基因为基础的DNA疫苗,并利用ELISPOT技术检测去免疫原性。方法利用PCR和基因克隆技术从结核分枝杆菌H37Rv基因组中扩增出Ag85B/MPT-64编码基因,...; 包洪李艳蕾尹文东王莹于庭; 关键词：结核分枝杆菌 AG85A DNA疫苗 ELISPOT; 文献传递

结核分枝杆菌Ag85A/MPT-64融合基因DNA疫苗的构建及免疫研究中ELISPOT技术的应用: 目的：构建编码结核分枝杆菌蛋白Ag85A／MPT-64融合基因为基础的DNA疫苗，并利用ELISPOT技术检测去免疫原性。方法：利用PCR和基因克隆技术从结核分枝杆菌H37Rv基因组中扩增出Ag85B／MPT-64编码基...; 包洪李艳蕾尹文东王莹于庭; 关键词：结核分枝杆菌 DNA疫苗 ELISPOT技术; 文献传递

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尹文东