周峰
- 作品数：5 被引量：11H指数：1
- 供职机构：武汉大学人民医院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 蓝舌病毒选择性诱导肾癌细胞凋亡的研究被引量：1
- 2015年
- 目的研究蓝舌病毒湖北株（BTV-HbC3）对原代培养二倍体人肾小管上皮细胞（RTECs）、人肾癌细胞（A498）和小鼠肾癌细胞（Renca）的感染特性，并探讨其靶向性杀伤肾癌细胞作用及其机制。方法原代培养二倍体人肾小管上皮细胞（RTECs）并应用透射电镜方法鉴定，以1MOI BTV—HbC3感染RTECs、A498和Renea细胞48h后，观察光镜下细胞病变效应和扫描电镜下超微结构变化；MTT-F检测分别在0．001、0．01、0．1、1和10MOI的病毒感染RTECs、A498和Renca3种细胞48h后的存活率；用流式细胞仪AnexinV／FITC±P1分析1MOI BTV-HbC3感染3种细胞48h后凋亡情况，并检测A498和Renca细胞感染后的DNA ladder条带；流式细胞仪PI单染法分析感染前后细胞周期的变化；荧光显微镜观察感染后A498和Renca细胞核和内质网的变化。结果成功培养出二倍体的原代人肾小管上皮细胞，BTV-HbC3感染细胞A498和Renca细胞48h后均出现显著的细胞病变效应，电镜下胞浆中均出现典型的病毒颗粒；而RTECs对病毒不敏感，电镜下形态无变化，胞浆内未见病毒颗粒；10MOI的BTV-HbC3感染RTECs、A498和Renea细胞48h后存活率分别为：（99．25±3．27）％、（25．69±3．50）％和（22．63±5．85）％，A498和Renca细胞与RTECs比较有显著差异（P〈0．05）；流式细胞仪检测1MOI的BTV．HbC，感染48h后RTECs、A498和Renea早期凋亡率分别为（2．04-0．9）％、（52．04-3．4）％、（40．04-2．4）％（P〈0．01），A498和Renca细胞呈现典型的凋亡条带。细胞周期检测显示感染后A498和Renca细胞出现了s期阻滞，荧光显微镜观察到A498和Renca细胞核染色质固缩，边聚，内质网出现大量空泡，未感染A498及感染A498细胞内质网荧光值分别为56．396±7．658、33．497±5．836（P〈0．01）；而感染后Renea内质网也出现空泡，未感染A498及感染A498细胞内质网荧光值分别为70．146±4．754、42．
- 杜贤进张杰董长垣周晓光王肖周峰
- 关键词：溶瘤病毒蓝舌病毒肾肿瘤
- 原代肾上皮细胞改良培养方法被引量：8
- 2009年
- 背景：目前国内对上皮细胞的研究多采用细胞株的方式,但其离体时间长,细胞易产生变异,而原代培养则与体内状态更相近,希望能为组织工程肾脏相关研究提供肾上皮细胞来源。目的：探索原代肾上皮细胞培养的条件和方法。建立一套高效快捷的原代肾上皮细胞培养方案。设计、时间及地点：单一样本观察,开放性实验,于2007-12/2008-03在武汉大学病毒学国家重点实验室分子病毒与癌研究室完成。材料：新生2~4dSPF级雄性SD大鼠鼠婴12只。方法：取SD大鼠,切取双侧肾脏组织,将其反复剪成约1mm×1mm×1mm块,加入2.5g/L的胰酶和0.4g/L乙二胺四乙酸,放入37℃恒温水浴箱消化,30min后移至200目钢网过滤,去除未消化组织块和细胞团,收集网下悬液1000r/min低温离心5min,用DMEM（pH7.2）培养基制成细胞悬液,以4×108L-1密度接种于培养瓶中,置CO2培养箱中培养。再将细胞悬液接种到一个培养瓶内,静止培养30min,镜下观察细胞部分贴壁,将培养液连同尚未贴壁细胞一起吸到另一瓶内,继续培养,重复上述操作一次,纯化肾上皮细胞。主要观察指标：以4×108L-1密度接种于培养瓶中培养。用4g/L锥虫蓝染色检测肾上皮细胞的存活率,不着色者为存活细胞。并观察肾上皮细胞的形态学变化、贴壁率。结果：肾上皮细胞存活率为95.20%,4h约60%的细胞贴壁,12h85%以上的细胞已经贴壁。24h后肾上皮细胞伸出伪足呈梭形、多角形,具有胞核一两个,细胞大小均匀,生长迅速,三四天后形成细胞簇,最后肾上皮细胞连接成片生长。结论：该肾上皮细胞培养方法存活率、贴壁率高,是一种可靠的肾上皮细胞培养方法。
- 周峰杜贤进董长垣张杰
- 关键词：肾上皮细胞原代培养
- 蓝舌病毒HbC3对人肾癌细胞的感染杀伤作用被引量：1
- 2010年
- 目的观察蓝舌病毒湖北株（BTV—HbC3）对人肾癌ACHN细胞的感染特性，探讨其杀伤肾癌细胞作用及其机制。方法BTV—HbC3感染肾癌ACHN细胞，观察细胞病变效应及显微电镜变化，噻唑蓝（MTY）比色法检测细胞存活率，RNA凝胶电泳检测BTV—HbC3在ACHN细胞内的增殖．DNAladder法检测感染后凋亡并用流式细胞仪检测感染后细胞凋亡指数。结果BTV—HbC3感染细胞后有明显的细胞病变效应，细胞胞质内出现病毒颗粒，细胞肿胀破裂，1MOI的BTV—HbC3感染ACHN细胞24、36、48h的存活率分别为68．14±5．13、57．14±2．68、42．21±5．63。RNA电泳出现L1—L3、M4-M6和S7-S10特征性病毒dsRNA，DNA ladder显示非特异凋亡表现，流式细胞仪检测1MOI的BTV—HbC3感染ACHN细胞24、36、48h后可见低亚二倍体峰，比例分别为13．7％、18．5％和24．2％。结论BTV-HbC3能有效地杀伤人肾癌ACHN细胞。
- 杜贤进周峰董长垣郭应禄张杰
- 关键词：溶瘤病毒
- 溶瘤病毒与肿瘤被引量：1
- 2009年
- 溶瘤病毒治疗肿瘤是一种全新的肿瘤基因治疗方法，利用病毒自身特性发现并杀伤肿瘤细胞，近年来受到人们广泛关注。溶瘤病毒包括细小病毒、呼肠孤病毒、新城疫病毒、水疱性口炎病毒、麻疹病毒、腺病毒、疱疹病毒和甲型流感病毒等。目前已经有多个溶瘤病毒产品进入抗肿瘤临床试验阶段，且疗效较为显著。本文对该领域最新研究进展作一概述。
- 周峰张杰
- 关键词：肿瘤基因治疗溶瘤病毒基因治疗
- 蓝舌病毒湖北株对小鼠肾癌细胞体内外的杀伤效应被引量：1
- 2010年
- 目的 观察蓝舌病毒湖北株（BTV-HBC3）对小鼠肾癌细胞株Renca体内外的杀伤效应.方法 接种1 MOI的BTV-HBC3于Renca细胞,观察Renca感染后的细胞病变效应（CPE）,应用扫描电镜观察感染48 h后的超微结构,以噻唑蓝（MTT）比色法检测病毒分别以不同感染复数（MOI）感染Renca细胞后24、36、48 h的细胞存活率,并应用琼脂糖凝胶电泳分析感染后48 h的Renca细胞及其对照组病毒基因组.同时制备BALB/C小鼠Renca细胞荷瘤动物模型,观察应用BTV-HBC3处理后皮下荷瘤生长,并进行苏木素-伊红（HE）染色病理分析,应用免疫组织化学检测病毒蛋白的表达.结果 Renca细胞感染BTV-HBC348 h后,CPE程度大于90%,透射电镜下,胞质内可见增殖的病毒颗粒,呈晶格状排列.Renca细胞接种1 MOI的BTV-HBC3 24、36、48 h后细胞的存活率分别为（44.45±5.26）%、（30.47±4.77）%、（20.34±5.26）%,且该病毒对Renca细胞的杀伤作用呈现一定的量效关系;感染后细胞进行琼脂糖电泳可以检测到特异性长（L）、中（M）、短（S）3组分片段的病毒的dsRNA基因组;体内实验表明BTV-HBC3也明显抑制肿瘤生长（P〈0.01）;组织病理学观察中肿瘤组织未见坏死区,可见大片透明空泡样组织,肿瘤组织内可见腺体样结构,而小鼠其他各脏器组织切片中未见病毒感染,治疗组肿瘤组织可见病毒蛋白的阳性染色,其余组织器官经免疫组织化学分析未见病毒蛋白表达.结论 蓝舌病毒湖北株对小鼠肾癌细胞体内外具有显著的靶向杀伤效应.
- 杜贤进张杰董长垣周峰郭应禄王肖周晓光
- 关键词：溶瘤病毒蓝舌病毒肾细胞癌
