吴振芳
- 作品数:8 被引量:43H指数:4
- 供职机构:四川农业大学生命科学与理学院更多>>
- 发文基金:国家自然科学基金四川省教育厅自然科学科研项目四川省应用基础研究计划项目更多>>
- 相关领域:生物学农业科学轻工技术与工程化学工程更多>>
- 易错PCR技术提高黑曲霉N25植酸酶活力的研究被引量:6
- 2010年
- 利用易错PCR技术对黑曲霉(Aspergillus niger)N25的植酸酶基因phyA进行定向进化研究,突变基因产物重组于表达载体pET32a(+)中,并导入大肠杆菌BL21(DE3)构建突变体文库,经筛选获得了最佳突变菌株pET32a-phyAep,其植酸酶活力比出发酶提高了41.8%。突变酶的酶学性质研究发现,与野生酶相比,它的热稳定性,最适温度和最适pH值无显著变化。
- 冯慧玲李春梅吴振芳陈惠
- 关键词:植酸酶定向进化易错PCR酶活力
- 蛋白质新功能定向进化研究策略被引量:1
- 2009年
- 利用定向进化策略改造蛋白质功能已经在农业、工业和医药等领域得到了广泛的应用。蛋白质工程的最新进展是利用定向进化策略对自然界蛋白质引入新功能,但由于其决定因素比较复杂,是研究者面临的一个重大挑战。详细介绍了国外近年发展的蛋白质新功能定向进化研究策略:对传统突变体库构建策略进行改进以及非同源重组改造技术的开发,是早期引入蛋白质新功能的常用手段,利用计算/理性设计与定向进化相结合引入蛋白质新功能是近年定向进化研究的一个重大突破,而噬菌体展示技术是蛋白质新功能筛选的主要策略。蛋白质新功能的分子进化模型已逐渐成为蛋白质工程改造的新思路。
- 吴振芳陈惠曾民吴琦
- 关键词:定向进化噬菌体展示
- 内切葡聚糖酶基因在毕赤酵母中高效表达及其结构域重构研究
- 纤维素酶是一组复合酶的统称,主要包括内切葡聚糖酶(endo-glucanase),纤维二糖水解酶(cellobihydrolase)和β-葡萄糖苷酶(β-1,4-glucosidase),这三种酶协同作用将纤维素转化成葡...
- 吴振芳
- 关键词:枯草芽胞杆菌毕赤酵母内切葡聚糖酶基因
- 文献传递
- 毕赤酵母中植酸酶和内切葡聚糖酶共表达菌株的构建及其高效表达(英文)被引量:4
- 2010年
- 植酸酶和内切葡萄糖苷酶广泛应用于动物饲料添加剂中,能更有效地帮助饲料的利用,同时为动物的生命活动提供必需的重要物质。首先构建重组质粒pPICZα-EG,经过线性化后,电转化到含有植酸酶phyA基因的毕赤酵母感受态细胞中,构成含有植酸酶基因和内切葡萄糖苷酶基因的重组体菌株GS115-phyA-EG。经甲醇诱导后其活性分别达到出发菌株GS115-phyA和GS115-EG的39.4%和56.2%。酶学性质的分析显示,最适反应温度和最适反应的pH值分别为55℃和5.5,植酸酶和内切葡萄糖苷酶在温度为45℃-55℃,pH值为4.5~5.5时,酶活相对稳定,均能达到最高酶活的80%以上。结果表明这种在同一个系统种同时表达2种酶的方法能更好地节约时间和成本,使其在饲料工业的应用上有更广阔的前景。
- 吴振芳唐自钟陈惠韩学易赖欣吴琦
- 关键词:植酸酶内切葡聚糖酶毕赤酵母
- 一种基于96孔板的植酸酶高通量筛选方法
- 本发明公开了基于96孔板的植酸酶高通量筛选方法,包含以下步骤:A1,获得突变植酸酶基因;突变模板的准备;A2,植酸酶毕赤酵母突变体库的构建;A3,基于96孔板方法的植酸酶高通量筛选;建立了在96孔板上进行毕赤酵母生长表达...
- 陈惠曾民廖燕吴琦吴振芳韩学易
- 文献传递
- 枯草芽孢杆菌C-36内切葡聚糖酶基因的克隆及其在大肠杆菌中融合表达被引量:11
- 2009年
- 以自行分离筛选出的天然枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)C-36的染色体DNA为模板,PCR扩增得到含有内切葡聚糖酶基因的DNA片段,将其克隆到pMD-18T载体中,序列分析表明,克隆得到的DNA片段全长1602bp,编码一个含有499个氨基酸的多肽。与其他芽孢杆菌内切葡聚糖酶基因序列比对,其核苷酸同源率为90%~93%,其编码的氨基酸序列的同源性在90%~98%,已将此基因注册GenBank(DQ782954)。将含内切葡聚糖酶基因的重组克隆质粒进行亚克隆,用Kpn I和EcoR I双酶切后,与相同酶切的表达载体pET-32a相连接,并导入大肠杆菌BL21中表达。蛋白质电泳实验结果表明在6.47×10^4处有表达蛋白带。经测定表达蛋白比酶活力达99.02U/mL,为出发菌C-36(63.78U/mL)的1.55倍。
- 官兴颖吴振芳吴琦胥兵陈惠
- 关键词:枯草芽孢杆菌克隆内切葡聚糖酶基因
- 饲料植酸酶及其酶工程改造的研究进展
- 2008年
- 韩学易吴振芳阮景军陈惠曾民
- 关键词:工程改造植物性饲料单胃动物抗营养因子抗营养作用