占思远
- 作品数：15 被引量：36H指数：4
- 供职机构：四川农业大学更多>>
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- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 南江黄羊脂肪型脂肪酸结合蛋白(A-FABP)基因多态性与生长性状关联分析被引量：4
- 2012年
- 根据山羊A-FABP mRNA序列设计2对引物扩增南江黄羊A-FABP基因部分外显子3、内含子3和外显子4序列,利用克隆测序的方法寻找南江黄羊A-FABP基因的多态性,采用PCR-RFLP的方法进行多态性检测并与生长性状进行关联性分析。结果显示,在南江黄羊A-FABP基因第3内含子和第4外显子序列上分别发现T143C和T546C2个点突变位点,其中T546C位点为同义突变,这2处突变各自产生3种基因型CC、TC和CC,χ2检验显示,这2个位点均处于中度多态且在南江黄羊群体中分布处于Hardy-Weinberg平衡(P>0.05)。关联分析显示,T143C位点TC基因型公羊个体的成年胸围显著长于TT型(P<0.05);T546C位点CC基因型公羊个体的周岁体长显著长于TT基因型(P<0.05),TC基因型母羊个体的6月龄体质量和胸围均显著长于CC基因型(P<0.05),其余生长性状在不同基因型个体间差异不显著(P>0.05)。结果表明:南江黄羊A-FABP基因第3内含子和第4外显子多态性可能对个体生长性状产生一定的影响。
- 蒋婧王林杰李利占思远程波周忠强梁青董恩妮张红平
- 关键词：南江黄羊A-FABP基因PCR-RFLP生长性状
- 一种新型培养皿摇晃装置
- 本实用新型公开了一种新型培养皿摇晃装置，包括工作台、培养皿固定装置和晃动装置，所述工作台用于安装培养皿固定装置以及晃动装置，工作台包括可活动的工作板和空心台体，工作板上设有多个培养皿固定装置；所述工作台顶部设有方形开口，...
- 张潇何威肖苗张红平李利王林杰仲涛郭家中占思远曹家雪代定卉陈媛
- 文献传递
- 一种获得山羊MEF2C基因新转录剪切体的方法
- 本发明属于家畜基因工程技术领域，公开了一种获得山羊MEF2C基因三种转录剪切体的方法。首先从南江黄羊肌肉组织中分离出核糖核酸；设计特定的引物，利用PCR扩增出cDNA片段。经过克隆和测序分析证实了在山羊MEF2C基因转录...
- 沈并兵占思远李利张红平王林杰仲涛
- 文献传递
- 山羊胎儿背最长肌发育过程中lncRNAs的鉴定及其功能验证
- 产肉性状作为影响肉羊生产效益的重要经济性状，一直是肉羊遗传育种研究领域关注的热点。肌肉生长的分子调控机制解析是肉羊分子育种改良的突破口。山羊的骨骼肌生长发育过程受到多种调节因子的共同作用，以往的相关研究主要集中在DNA、...
- 占思远
- 关键词：山羊胎儿期长链非编码RNA基因功能
- 文献传递
- 山羊不同组织及不同发育时期骨骼肌内参基因的表达稳定性分析被引量：14
- 2014年
- 为筛选出山羊不同组织、不同时期骨骼肌及骨骼肌卫星细胞(Skeletal muscle satellite cells,SMSCs)中稳定表达的内参基因,以出生后3日龄的山羊不同组织(心、肝、脾、肺、肾、大脑、大肠、小肠、背最长肌、臂三头肌和半膜肌)和不同时期(3、30、60、90和120 d)的3种骨骼肌(背最长肌、臂三头肌和半膜肌)以及培养至不同阶段(1、3、4和7 d)的山羊SMSCs为研究对象,运用qRT-PCR技术及geNorm分析软件,探索9个内参基因(ACTIN、GAP—DH、TOP2β、YWHAZ、SDHA、PGK1、RP2、RPL4和HPRT1)mRNA的表达稳定性。结果表明,在同一时期的11个组织中,内参基因表达稳定度的排序:HPRT1>RP2>TOP2β>SDHA>GAPDH>ACTIN>YWHAZ>PGK1>RPL4,需要2个内参基因(HPRT1和RP2)共同校正目的基因的表达;在不同发育时期的骨骼肌中,各内参的稳定度:YWHAZ>ACTIN>HPRT1>RPL4>TOP2β>SDHA>PGK1>GAPDH>RP2,需引入3个内参(YWHAZ、ACTIN和HPRT1)才能准确地校正定量结果;在SMSCs中各内参表达的稳定度排序:PGK1>SDHA>ACTIN>RPL4>GAPDH>TOP2β>YWHAZ>RP2>HPRT1,需要3个合适的内参(PGK1、SDHA和ACTIN)作为标准化指标校正定量数据。本试验分别筛选出了能在山羊同一时期不同组织、不同发育时期的骨骼肌及SMSCs中稳定表达的内参基因及需要引入的内参数目,有利于更加准确地校正基因mRNA水平的表达量,为更好地研究基因功能奠定了基础。
- 陈利赵薇占思远李丹李利仲涛王林杰张红平
- 关键词：山羊荧光定量PCR内参基因
- 山羊EDNRA基因编码区克隆与组织表达规律分析
- 2019年
- 【目的】旨在探究EDNRA基因在山羊心脏、肝、脾、肺、肾、大脑、网膜脂肪组织中的表达情况。【方法】采用克隆、测序的方法得到山羊EDNRA基因CDS全长的碱基序列,用生物信息学软件进行序列分析、亲水性/疏水性分析、潜在的信号肽位点分析、亚细胞定位分析、蛋白质的二级结构和三级结构预测及系统进化树分析,最后采用实时荧光定量PCR(qPCR)测定EDNRA基因在山羊心脏、肝、脾、肺、肾、大脑、网膜脂肪组织中mRNA的表达量。【结果】成功克隆了EDNRA的CDS序列,得到山羊EDNRA基因包含一个1 284 bp的最长开放阅读框。该序列编码427个氨基酸,含信号肽序列(第1到第20位氨基酸)以及7型跨膜受体同系物结构域。基因编码产物具有疏水性,属分泌蛋白,有35个磷酸化修饰位点。二级结构主要为α-螺旋。系统进化树分析表明,山羊EDNRA基因和绵羊、牛以及野牛的亲缘关系较近。qPCR结果表明,山羊EDNRA基因在心脏中的表达量最高,在肝、脾、肾、大脑、网膜组织中的表达量较低,而在肺中表达最少。【结论】EDNRA可能在心脏行使功能过程中发挥重要作用。
- 王梦周靖宣占思远王林杰李利张红平仲涛
- 关键词：蛋白结构预测山羊
- 山羊IGFBP家族基因的克隆及其组织表达规律的研究
- IGFs和IGFBPs之间是一个复杂的生长调节轴,IGFBPs通过不同的亲和力与IGFs结合以调节游离IGFs的生物学活性,从而实现对动物生长发育的调控。本研究以培育品种南江黄羊为试验材料,应用RT-PCR和克隆技术从南...
- 占思远
- 关键词：南江黄羊IGFBP-2IGFBP-3实时定量PCR
- 山羊IGFBP3基因cDNA编码序列克隆的方法
- 本发明公开了一种山羊IGFBP3基因cDNA编码序列克隆的方法，其核苷酸序列如序列表SEQ ID NO：1所示，包括以下步骤：A1、提取山羊背最长肌组织中的总RNA，然后将总RNA反转录成cDNA；A2、引物的设计和PC...
- 占思远张红平李利王林杰仲涛
- 文献传递
- 山羊clock和cry1基因的克隆及其在大脑和垂体中表达差异的研究被引量：6
- 2012年
- 本研究旨在探讨生物钟基因clock和cry1在山羊出生后不同时期的大脑和垂体中的表达差异。在出生后30、60、90和120d共屠宰24只南江黄羊羔羊(公母各12只),取其大脑皮质层和垂体组织样品用于抽提RNA,进行分子克隆和实时荧光定量PCR分析。结果,分离克隆得到了山羊clock基因外显子1到外显子8以及cry1基因外显子6到外显子15的CDS区序列,其长度分别为1 479bp和993bp,其中clock基因部分CDS区序列与绵羊、牛、人和小鼠的对应序列相似性分别为99%、90%、94%和92%,cry1基因部分CDS区序列与绵羊、牛、人和小鼠的对应序列相似性分别为99%、98%、94%和87%。组织表达分析结果表明,性别对clock和cry1基因的表达影响不显著(P>0.05),2个基因在垂体中的mRNA表达量极显著高于大脑中的表达量(P<0.01);在不同时期的垂体组织中,clock和cry1基因表达量均呈现先上升后下降的趋势;在不同时期的大脑组织中,clock基因的表达量趋于波动平衡,呈现上升趋势,cry1基因的相对表达量呈细微的上升趋势。结果提示:clock和cry1基因的CDS区在物种间保守性较高。clock和cry1基因在山羊大脑和垂体组织中起到重要的作用,且其mRNA发育性表达模式具有组织特异性。
- 占思远罗万伟程波蒋婧李利王林杰张红平王永龚华斌邓中宝
- 关键词：山羊CLOCK基因分子克隆
- 山羊IGFBP-2基因的克隆、序列分析及其组织表达被引量：3
- 2016年
- 【目的】克隆获得南江黄羊IGFBP-2(Insulin-like growth factor binding protein-2)基因的CDS区全序列,对其进行生物信息学分析,并分析IGFBP-2的mRNA和蛋白组织表达特征,为深入研究该基因在出生后山羊生长和发育过程中的作用以及表达调控提供基础资料。【方法】下载NCBI的Gen Bank数据库中公布的绵羊(Ovis aries,NM_001009436)和牛(Bos taurus,NM_174555)的IGFBP-2基因的mRNA序列,经序列比对后采用保守区域序列并利用Primer Premier 6.0软件设计克隆引物,经PCR扩增后采用TA克隆技术获取含有阳性克隆子的菌液,送公司测序得到山羊IGFBP-2基因的完整编码区序列,并利用Edit Seq、DNAMAN 6.0、MEGA 6.0和Ex PASy在线平台等软件对CDS区序列和其编码的氨基酸序列进行生物信息学分析;获得山羊IGFBP-2基因CDS区序列后,利用该序列设计实时荧光定量PCR(Q-PCR)引物,采用Q-PCR和蛋白质免疫印迹杂交(Western blotting)方法检测了IGFBP-2的mRNA和蛋白在出生后南江黄羊不同组织(心脏、肝脏、肺、背最长肌、半膜肌和臂三头肌)和不同发育阶段(3、30、60、90和120 d)的表达情况。【结果】1克隆得到954bp的南江黄羊IGFBP-2基因的CDS区全序列,碱基组成为GC含量69.39%,AT含量30.61%,共编码317个氨基酸残基,预测的山羊IGFBP-2蛋白分子量大小为33.8808 kD,等电点为7.82,二级结构由无规卷曲(68.14%)、α-螺旋(18.30%)和延伸链(13.56%)三种形式组成;蛋白结构域分析发现,IGFBP-2蛋白序列包含保守的IB(IGFBP homologues)和TY(Thyroglobulin typeΙrepeats)结构域,IB结构域位于第37—125位氨基酸处,TY结构域位于第250—302位氨基酸处;2磷酸化位点预测发现,IGFBP-2蛋白中存在Ser(5)和Thr(7)共12个磷酸化位点;糖基化位点预测发现,IGFBP-2蛋白序列中存在10个N-糖基化位点和2个O-糖基化位点;3CDS区序列相似性比较发现,山羊IGFBP-2与绵羊、牛、猪、人和小鼠的相似性分别达到98.99%、97.73%、8
- 占思远董尧李利仲涛王林杰张红平
- 关键词：山羊IGFBP-2基因克隆荧光定量PCR
