刘海飞
- 作品数：9 被引量：59H指数：4
- 供职机构：青岛大学医学院附属医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 重组腺相关病毒2介导hTGF-β_1基因体内转染兔退变髓核细胞对蛋白多糖含量的影响被引量：1
- 2010年
- 目的应用重组腺相关病毒2(recombinant adeno-associated virus2,rAAV2)介导hTGF-β1基因体内转染兔退变椎间盘髓核细胞,观察基因产物的表达及其对退变髓核细胞蛋白多糖合成的生物调节作用。方法于24只成年新西兰大白兔,雌雄不限,体重1.7～2.2kg,L1、2、L2、3、L3、4、L4、5椎间盘注射25μL浓度为1mmol/L的纤维结合素片段(fi bronectin fragment,Fn-f)制备椎间盘退变模型,注射Fn-f4周时的造模椎间盘模拟早期退变的椎间盘。将24只兔随机分为3组(n=8),A、B、C组分别于造模椎间盘髓核内注射25μL rAAV2-hTGF-β1(1×1012vg/mL)、rAAV2-增强绿色荧光蛋白(enhanced green?uorescent protein,EGFP,rAAV2-EGFP)、PBS。术后1周A、C组各处死2只兔,取髓核组织采用免疫组织化学染色观察hTGF-β1的表达;术后4、8、12周每组取2只兔髓核组织,35S整合分析法检测新合成蛋白多糖的含量;术后12周处死B组2只兔,荧光显微镜观察髓核组织中EGFP的表达。结果术后1周,免疫组织化学染色示A组髓核细胞及基质中广泛存在强阳性染色颗粒,C组仅存在少量阳性颗粒。35S整合法检测示,各时间点A组35S蛋白多糖合成率均高于B、C组,比较差异有统计学意义(P<0.05);B、C组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。术后12周,荧光显微镜下观察B组盘髓核组织可见大量绿色荧光表达。结论新型基因转导载体rAAV2可有效介导hTGF-β1基因体内转染兔退变髓核细胞,基因产物可持续表达超过12周,hTGF-β1可有效促进退变髓核细胞蛋白多糖的合成。
- 刘海飞宁斌王德春胡有谷
- 关键词：HTGF-Β1髓核细胞蛋白多糖
- 椎间盘退行性变的生物学治疗研究进展被引量：8
- 2006年
- 刘海飞王德春胡有谷
- 关键词：椎间盘退行性变生物学治疗椎间盘退变椎间盘突出症椎间盘组织病理基础
- 椎间盘的营养与退变被引量：13
- 2006年
- 刘海飞王德春胡有谷
- 关键词：椎间盘退变营养供应血管组织病理基础代谢废物
- 兔退变椎间盘体内转染hTGF－β1、β3的生物学效应被引量：3
- 2011年
- 目的 应用重组腺相关病毒2（recombinant adeno-associated virus,rAAV2）介导人转化生长因子β1（human transforming growth factor-β1,hTGF-β1）和β3（hTGF-β3）单基因或双基因联合体内转染退变兔髓核细胞,观察基因产物的表达及其对基质成分蛋白多糖和Ⅱ型胶原合成的生物调节作用.方法 36只新西兰大白兔注射纤维结合素片段（fibronectin fragment,Fn-f）制造椎间盘退变模型.造模成功后,随机分为5组：实验A组8只,造模椎间盘髓核内注射rAAV2-hTGF-β1;实验B组6只,注射rAAV2-hTGF-β3;实验C组6只,联合注射rAAV2-hTGF-β1和rAAV2-hTGF-β3;实验对照D组8只,注射rAAV2介导的增强绿色荧光蛋白（enhanced green fluorescent protein,EGFP）;空白对照E组8只,髓核内注射PBS.1周后处死A组及E组中各2只兔,收获髓核组织,制作冰冻切片,免疫组化法观察hTGF-β1的表达;基因转导后4、8、12周每组处死2只兔取髓核组织组织培养和裂解,35S整合分析法检测新合成蛋白多糖的含量,免疫印迹法检测髓核Ⅱ型胶原的含量.术后12周时处死D组剩余的2只兔,观察EGFP的表达.结果 （1）术后1周,免疫组化染色显示A组髓核组织切片中髓核细胞内及细胞间hTGF-β1阳性表达较E组显著增多,基因产物大量有效表达;（2）术后4、8、12周实验A组、B组、C组基因转染后蛋白多糖表达较E组提高1.28～2.06倍,Ⅱ型胶原表达提高1.25～1.73倍,差异均有统计学意义;C组蛋白多糖表达较A组、B组提高1.195～1.290倍,Ⅱ型胶原表达较A组、B组提高1.152～1.219倍,差异有统计学意义;A组、B组间或D组、E组间蛋白多糖及Ⅱ型胶原表达差异均无统计学意义;（4）术后12周,D组髓核细胞胞质内及细胞间质中观察到大量绿色荧光,基因产物EGFP仍有大量表达.结论 AAV作为新型基因转导载体可以有效介导治疗基因体内转染兔退变的髓核细胞,基因转染1周目的 基因即大量表达且持续表达超过12�
- 刘海飞宁斌王德春胡有谷
- 关键词：椎间盘转化生长因子B转染基因疗法
- 应用纤维结合素建立新型兔腰椎间盘退变模型被引量：10
- 2013年
- 目的应用兔椎间盘内显微注射纤维结合素片段（Fn-f）的方法建立新型动物椎间盘退变模型。方法34只新西兰大白兔随机分为3组：实验组（16只），L1-2L2-3，L3-4，L4-5，椎间盘髓核内显微注射30kDa的Fn-f25μl；对照组（16只）相应髓核内注射磷酸盐缓冲液（PBS）25汕l；空白组（2只）不做处理。术后4、8、12周处死实验组及对照组各4只兔，对髓核组织切片行番红O染色和HE染色，采用^35S整合分析法检测髓核蛋白多糖合成。实验组和对照组中各取4只兔分别于术前及术后4、8、12和16周行腰椎数字化x射线摄影（DR）检查，测量计算椎间盘高度指数（DHI），术后16周处死，行番红O染色、HE染色和蛋白多糖合成测定。空白组2只兔处死后检测髓核蛋白多糖合成。结果实验组兔椎间盘髓核细胞数目进行性减少，内层纤维环结构紊乱、破坏；髓核区4周后出现进行性缩小，术后16周髓核区消失，与内层纤维环组织不能分辨。实验组兔椎间盘蛋白多糖合成率进行性下降（F=263．241，P=0．000）；术后各时间点，实验组兔椎间盘蛋白多糖合成率均较对照组显著降低（t=-27．010～-2．833，P〈0．05）。术后8周DR示造模椎间隙开始出现明显狭窄，进行性加重，12周时椎间盘及临近椎体前方出现骨赘，16周时骨赘增生明显。术后4周，实验组与对照组DHI百分比（DHI％）分别为96．5％±1．7％和97．4％±1．2％，差异无统计学意义（P〉0．05）；术后8、12和16周，实验组DHI％分别为85．6％±3．8％、77．2％±3．5％和65．5％±5．6％，均较对照组明显减低（t=-21．225～-10．795，P〈0．01）。结论显微注射Fn-f可使兔腰椎间盘发生缓慢的、进行性的、与人椎间盘自然退变过程相似的退变，具有较好的模拟性和重复性，为椎间盘退变分子水平的研究提供了一种新型的、实用的动物模型。
- 刘海飞张晗乔光曦陶昊陈峰扈延龄王德春胡有谷
- 关键词：疾病模型动物腰椎椎间盘纤维结合素
- 浮肩损伤的手术治疗效果被引量：1
- 2011年
- 目的探讨浮肩损伤(FSI)的手术治疗效果。方法 FSI病人9例,肩胛颈骨折合并同侧锁骨骨折6例,合并肩锁关节脱位3例;右侧5例,左侧4例。均行切开复位内固定治疗,锁骨和肩胛骨骨折采用重建钢板固定,肩锁关节脱位采用锁骨钩钢板固定。结果 9例病人均得到6个月～5年(平均26个月)的随访,锁骨和肩胛骨骨折均于术后3～5个月愈合,6例病人肩关节活动基本正常,3例病人肩活动范围轻度受限,2例病人肩关节活动时有轻度疼痛。肩关节功能CONSTANT评分平均为88.6分。结论切开复位内固定早期功能锻炼治疗FSI效果良好。
- 乔光曦王丽君刘海飞叶发刚季爱玉
- 关键词：浮肩损伤
- PDLLA可吸收螺钉和金属螺钉治疗下胫腓联合分离的前瞻性对照研究被引量：21
- 2010年
- 目的通过前瞻性随机对照研究比较及评价聚-DL-乳酸(PDLLA)可吸收螺钉和钛合金金属螺钉治疗踝关节骨折中下胫腓联合损伤分离的临床疗效。方法对2005年4月～2008年6月58例伴有下胫腓联合损伤分离或可疑下胫腓联合损伤分离的闭合性踝关节骨折病例纳入本项研究,术前随机将患者分为两组,根据术前X线测量和术中牵拉实验最终确诊47例下胫腓联合分离患者,应用PDLLA可吸收螺钉治疗22例,金属螺钉治疗25例,金属螺钉在术后10～12周取出。在术后6个月,对手术侧踝关节的AOFAS踝关节功能评分、踝关节活动度、X线正位片TFCS和TFO宽度和异物反应发生进行比较。结果两组均获得满意疗效,两组间踝关节功能评分,踝关节活动度和X线片测量均无统计学差异(P>0.05)。结论 PDLLA可吸收螺钉治疗下胫腓联合损伤分离效果可靠有效,并且免除二次手术取钉,有广泛临床应用价值。
- 扈延龄袁万青王兰凤刘海飞金丹
- 关键词：下胫腓分离聚-DL-乳酸可吸收螺钉
- 成人退变髓核细胞微载体旋转立体培养对细胞外基质合成的影响被引量：2
- 2013年
- 目的探讨成人退变髓核细胞的体外微载体旋转立体培养模式及其对细胞外基质合成的影响。方法标本取自2005年9月至2009年5月因椎间盘疾患而施行椎体间融合术的患者，对总共34个退变的髓核组织进行体外培养，将其随机分为单层培养组和微载体旋转立体培养组。对2种培养方式的对数生长期髓核细胞进行Ⅰ、Ⅱ型胶原的SP-ABC免疫组化法染色，并行Ⅰ、Ⅱ型胶原的Wester nblot定量检测；用”S标记放射免疫定量分别检测两组处于不同生长期细胞的蛋白多糖含量，数据采用两独立样本的t检验进行统计分析。结果Ⅰ、Ⅱ型胶原的SP-ABC免疫组化法和Westernblot定量检测均显示微载体培养组高于单层培养组。SP-ABC免疫组化法结果：Ⅰ型胶原：32．5±4．4比15．2-4±1．2，t=2．871，P〈0．01；Ⅱ型胶原：43．6±4．1比23．1±2．2，t=2．375，P〈0．05；Westernblot定量检测结果：Ⅰ型胶原：0．62±0．08比0．504-0．06，t=3．327，P〈0．01；Ⅱ型胶原：1．464-0．08比0．86±0．04，t=2．453，P〈0．05。^35S标记放射免疫显示两种生长期的髓核细胞，微载体培养组表达蛋白多糖的含量均高于单层培养组（稳定生长期：348214±312比21046±673，t=2．134，P〈0．05；对数生长期：451344±175比321934±713，t=2．801，P〈0．01）。结论微载体旋转立体培养法对成人退变髓核细胞基质内Ⅰ、Ⅱ型胶原和蛋白多糖的表达具有正向调控的作用，可以适用于成人退变髓核细胞的大量扩增。
- 宁斌刘海飞龚维明赵凯杜红霞刘勇王德春胡有谷
- 关键词：椎间盘细胞外基质微球体胶原蛋白聚糖类
- 腺相关病毒介导hTGF-β1和hTGF-β3双基因体内联合转染对兔退变椎间盘的生物学效应
- 目的应用腺相关病毒(adenoassociated virus,AAV)介导人转化生长因子β1(human transforming growth factor-β1,hTGF-β1)和β3(hTGF-β3)双基因联合体...
- 刘海飞王德春胡有谷
- 关键词：腺相关病毒
- 文献传递
