任高伟
- 作品数：8 被引量：6H指数：2
- 供职机构：中国医科大学附属盛京医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金辽宁省博士科研启动基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人巨细胞病毒UL135蛋白结合蛋白的酵母双杂交筛选
- 目的：利用酵母双杂交系统从人胎脑cDNA文库中筛选与人巨细胞病毒UL135编码蛋白相互作用的蛋白。
方法：将成功构建的酵母诱饵表达载体pGBKT7-UL135转化到酵母菌AH109中，再将人胎脑文库DNA转化到...
- 邹飞任高伟周晓薇阮强孙峥嵘
- 关键词：人巨细胞病毒酵母双杂交系统基因筛选
- 文献传递
- 人巨细胞病毒临床分离株UL131A-128mRNA转录方式的研究被引量：1
- 2011年
- 目的 研究人巨细胞病毒（ human cytomegalovirns,HCMV） UL131 A-128序列在临床低传代分离株中的转录方式.方法 用3＇RACE技术扩增HCMV不同临床株,不同时期的UL131A,UL128,UL130的mRNAs并测序分析；利用PCR技术在HCMV临床株cDNA文库中筛选分别含有UL13IA,UL130,UL128序列的阳性克隆,测序并分析结果.结果 成功在临床低传代分离株中得到UL13IA,UL128,UL130基因的转录结构,UL131A,UL130的转录方式和文献报道一致,UL131A含有两个外显子,UL130为此区域内唯一不含内含子的基因.而UL128基因的转录本呈现了两种转录方式,一种结构包含三个外显子,长度为519 bp；而另一种结构包含三个外显子和第一内含子结构,长度为642 bp,在不同病毒株的不同时期均显示了包含第一内含子结构转录本的含量明显高于仅有外显子结构的UL128转录本的含量.UL131A-128三个基因在病毒的即刻早期,早期,晚期均存在.3＇RACE得到结果与HCMV cDNA文库筛选得到的结果相一致.结论 UL131A,UL130和UL128基因的mRNA结构的起始位点不同,但他们在3’末端拥有共同的终止位点.HCMV临床株UL 131A-128基因转录方式的复杂结构可能在HCMV感染的不同时期具有重要作用.
- 任高伟崔鑫马艳萍王宁吉耀华齐莹阮强孙峥嵘
- 关键词：巨细胞病毒RNA信使转录
- 人巨细胞病毒UL135蛋白结合蛋白的酵母双杂交筛选被引量：2
- 2009年
- 目的利用酵母双杂交系统从人胎脑cDNA文库中筛选与人巨细胞病毒(HCMV)UL135编码蛋白相互作用的蛋白。方法将成功构建的酵母诱饵表达载体pGBKT7-UL135转化到酵母菌AH109中,再将人胎脑文库DNA转化到含有pGBKT7-UL135的酵母细胞中,筛选与HCMVUL135编码蛋白相互作用的细胞蛋白,并对阳性克隆进行测序和生物信息学分析。结果最终确认60个克隆与HCMVUL135编码蛋白相互作用,其中2个克隆与Thy-1高度同源。结论成功应用酵母双杂交系统筛选出与HCMVUL135编码蛋白相互作用的蛋白,其中Thy-1在HCMV感染致病过程中可能起重要作用。
- 邹飞任高伟周晓薇马艳萍齐莹阮强孙峥嵘
- 关键词：人巨细胞病毒酵母双杂交系统
- 与人巨细胞病毒UL128两种不同结构蛋白相互作用蛋白的筛选与分析
- 2010年
- 目的 利用酵母双杂交系统从人胎脑cDNA文库中筛选与两种不同转录结构的人巨细胞病毒（HCMV）UL128编码蛋白相互作用的蛋白,比较两者相互作用蛋白之间的异同点.方法 通过3＇RACE和5＇RACE技术扩增出两种HCMV UL128片段,其大小分别为519 bp和642 bp,并将其成功构建到酵母诱饵表达载体pGBKT7中.将以上两种酵母表达载体分别转化到酵母菌AH109中,再将文库DNA转化到已含有酵母表达载体的AH109中,筛选与两种片段大小不同的UL128编码蛋白相互作用的人胎脑蛋白,并对筛选得到的阳性克隆进行测序和生物信息学分析.结果 筛出EFEMP2与UL128-519 bp编码蛋白相互作用,THY-1与UL128-642 bp编码蛋白相互作用.结论 成功构建pGBKT7 UL128-519 bp和pGBKT7 UL128-642 bp,并应用酵母双杂交系统分别筛选出EFEMP2和THY-1与UL128-519 bp和UL128-642 bp编码蛋白相互作用,在所筛选得到的相互作用蛋白之间未发现有相同的蛋白,UL128-519 bp和UL128-642 bp所编码的蛋白在HCMV感染致病过程中可能发挥不同的作用.
- 任高伟崔鑫马艳萍齐莹阮强孙峥嵘
- 关键词：人巨细胞病毒酵母双杂交
- 筛选与分析与人巨细胞病毒UL133编码蛋白相互作用的蛋白被引量：3
- 2011年
- 目的应用酵母双杂交技术筛选人胎脑c;;DOI:10.3969/j.issn.NA文库中与人巨细胞病毒(HCMV)UL/b′UL133编码蛋白相互作用的蛋白,为研究UL/b′编码蛋白的生物学功能,揭示HCMV先天感染的致病机制奠定基础。方法设计特异性引物,在引物上下游分别引入NdeⅠ和BamHⅠ限制性内切酶识别位点,采用PCR技术扩增HCMV临床分离株H株的UL133基因片段,将其扩增产物与载体pGBKT7同时使用NdeⅠ和BamHⅠ进行双酶切,纯化后,将UL133片段插入到pGBKT7载体上,构建诱饵质粒pGBKT7-UL133,并测序分析。利用醋酸锂小量酵母转化方法 ,将测序正确的诱饵质粒pGBKT7-UL133转化入AH109酵母感受态细胞中,然后将转化的菌液涂布在色氨酸缺陷型培养基(-Trp)上,筛选阳性菌落。再将人胎脑c;;DOI:10.3969/j.issn.NA文库质粒转化到含pGBKT7-UL133质粒的AH109菌株中,在四缺培养基(-Ade/-H is/-Leu/-Trp)中筛选,在铺有X-Gal的滤纸上进行显色反应,提取显蓝色的阳性酵母筛选质粒,运用电穿孔方法将其转化到TG1的大肠杆菌中,并行PCR鉴定,提取大肠杆菌中的文库质粒,并将其回转到含诱饵质粒pGBKT7-UL133的酵母菌株中,进行回转验证。对筛选到的阳性克隆进行测序和生物信息学分析。结果用于酵母双杂交筛选的诱饵质粒pGBKT7-UL133成功构建,含有诱饵质粒的酵母菌株在-Trp上生长。转化有人胎脑c;;DOI:10.3969/j.issn.NA文库和诱饵质粒pGBKT7-UL133的酵母菌AH109,在四缺培养基中观察到有28个酵母菌落生长,通过显色反应、酵母质粒转化及回转酵母细胞筛选得到4个阳性克隆。通过序列比对,发现在这些基因中,其中一个基因编码人类还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NA;;DOI:10.3969/j.issn.PH)依赖性氧化还原酶1。结论成功应用酵母双杂交系统筛选出与HCMV UL/b′区UL133编码蛋白相互作用的蛋白-NA;;DOI:10.3969/j.issn.PH,提示UL133蛋白可能在增加病毒毒力和传染性,干扰细�
- 崔鑫任高伟王桂丽齐莹马艳萍阮强孙峥嵘
- 关键词：人巨细胞病毒酵母双杂交系统
- 与人巨细胞病毒UL130编码蛋白相互作用蛋白的筛选
- 2010年
- 目的利用酵母双杂交技术筛选与人巨细胞病毒(HCMV)UL130表达产物有相互作用的细胞蛋白及其编码基因,了解其在宿主基因组中的地位功能。方法将成功构建的酵母诱饵表达载体pGBKT7-UL130转化到酵母菌AH109中,再将人胎脑文库DNA转化到含有pGBKT7-UL130的酵母细胞中,筛选与HCMVUL130编码蛋白相互作用的细胞蛋白,并对阳性克隆进行测序和生物信息学分析。结果最终确认9个克隆与HCMVUL130编码蛋白相互作用,其中2个克隆与突触小体相关蛋白(SNAP)高度同源。结论成功应用酵母双杂交系统筛选出与HCMVUL130编码蛋白相互作用的蛋白,其中SNAP在HCMV感染致病过程中可能起重要作用。
- 任高伟崔鑫齐莹马艳萍阮强孙峥嵘
- 关键词：人巨细胞病毒酵母双杂交系统
- 酵母双杂交技术筛选人巨细胞病毒UL131A的相互作用蛋白
- 2010年
- 目的:利用酵母双杂交系统从人胎脑cDNA文库中筛选与人巨细胞病毒(HCMV)UL131A编码蛋白相互作用的蛋白.方法:将成功构建的酵母诱饵表达载体pGB-KT7-UL131A转化到酵母菌AH109中,再将人胎脑文库DNA转化到含有pGBKT7-UL131A的酵母细胞中,筛选与HCMV UL131A编码蛋白相互作用的细胞蛋白,并对筛选得到的阳性克隆进行测序和生物信息学分析.结果:成功构建酵母诱饵表达载体pGBKT7-UL131A,并将其与人胎脑cDNA文库共转化到酵母细胞AH109中,最终确认有23种人胎脑文库蛋白与HCMV UL131A编码蛋白相互作用,其中一种与Thy-1蛋白高度同源,其同源性高达99%.结论:成功应用酵母双杂交系统筛选出与HCMV UL131A编码蛋白相互作用的蛋白,其中Thy-1在HCMV感染致病过程中可能起重要作用.
- 任高伟崔鑫齐莹马艳萍阮强孙峥嵘
- 关键词：人巨细胞病毒酵母双杂交系统
- 人巨细胞病毒UL141编码蛋白相互作用蛋白的筛选和分析被引量：1
- 2013年
- 目的应用酵母双杂交技术筛选人胎脑cDNA文库中与人巨细胞病毒(HCMV)UL141编码蛋白相互作用的蛋白,以进一步研究HCMV UL141的生物学功能,为揭示HCMV先天感染机制奠定基础。方法采用PCR技术扩增HCMV-UL141基因片段,将其插入到pGBKT7载体中,构建成诱饵质粒pGBKT7-UL141。然后将pGBKT7 UL141转化到酵母感受态细胞AH109中,于一缺培养基(SD/Trp)上筛选生长。再将人胎脑cDNA文库质粒转化到含有pGBKT7-UL141质粒的AH109菌株中,在四缺培养基(SD/Trp/Leu/His/Ade)中筛选相互作用的人胎脑cDNA文库蛋白。通过显色反应挑选显蓝色的阳性克隆,提取相应质粒将其转化到大肠杆菌中,并进行回转验证。最后对筛选得到的阳性克隆进行测序及生物信息学分析。结果诱饵质粒pGBKT7UL141构建成功。筛选获得6个克隆与HCMV-UL141编码蛋白相互作用,其中1个基因编码人类染色质解旋酶DNA结合蛋白3(CHD3)。结论成功应用酵母双杂交系统筛选出与HCMV-UL141编码蛋白相互作用的人体组织蛋白——CHD3,提示UL141蛋白可能与病毒的免疫逃避,干扰正常细胞的生长、分化相关。
- 卢志涛王桂丽马艳萍崔鑫任高伟齐莹阮强孙峥嵘
- 关键词：人巨细胞病毒酵母双杂交系统
