高诗博
- 作品数：3 被引量：4H指数：2
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- 相关领域：医药卫生化学工程更多>>
- 人胎盘来源Ⅳ型胶原蛋白的提取与纯化被引量：3
- 2013年
- 目的从人胎盘中分离纯化Ⅳ型胶原蛋白,为制备其抗体提供抗原。方法选择人胎盘为提取原料,用胃蛋白酶消化、氯化钠盐析、凝胶化、超速离心、离子交换层析等方法,提取纯化Ⅳ型胶原蛋白。采用SDS-PAGE对提取的Ⅳ型胶原蛋白进行鉴定。结果胃蛋白酶消化法,使获得胶原蛋白的胶原链部分断裂,凝胶化方法可预先分离出组织中的Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型胶原蛋白,保留了Ⅳ、Ⅴ胶原蛋白,DEAE-Sephrose层析图表明,层析柱吸附的蛋白经洗脱得一主峰,经SDS-PAGE证实提取的Ⅳ型胶原蛋白的分子量80Kd和40Kd两条带。结论从人胎盘中提取的Ⅳ型胶原蛋白纯度高,符合Ⅳ型胶原的特征。提取材料广泛、实验条件简便,结果可靠。
- 吴鹏高诗博徐军
- 关键词：凝胶化纯化
- 抗Ⅳ型胶原荧光抗体的制备及性质研究
- 2015年
- 目的采用异硫氰酸荧光素标识Ⅳ型胶原单克隆抗体,为直接或间接荧光方法检测人体肝脏或血液中Ⅳ型胶原含量奠定基础。方法采用直接透析方法进行荧光素标识,标识后通过Sephadex G25凝胶过滤,除去多余的荧光素和其他杂质,获得标识荧光抗体纯品。经SDS-PAGE和双向免疫扩散凝胶电泳,对标识抗体进行纯度,荧光特性,抗体特异性进行检测鉴定。结果经全自动化学发光荧光图像分析仪检测SDSPAGE电泳结果,激发波490nm,发射波510nm,在150KD处有一条黄绿荧光带,其他处未见条带出现,凝胶图像分析仪检测纯度达96%;免疫琼脂双向扩散电泳结果显示,标识抗体与未标识抗体与抗原之间均有乳白色沉淀线,且沉淀物含量一致,荧光分析仪检测标识抗体与中心孔之间有黄绿色荧光条带。结论采用本研究方法制备的荧光抗体具有纯度高、荧光性好、特异性强等特点,为临床检测人体Ⅳ型胶原含量提供便利。
- 吴鹏王英皎孟丽红高诗博徐军
- 关键词：荧光抗体荧光素FITC
- Ⅳ型胶原多克隆抗体的制备及性质研究被引量：2
- 2014年
- 目的通过免疫母鸡制备抗人Ⅳ型胶原多克隆抗体(IgY),为检测人血清Ⅳ型胶原含量提供IgY。方法采用人胎盘来源的Ⅳ型胶原蛋白作为抗原,免疫Leghorn母鸡,采用PEG方法分离纯化鸡卵黄中的抗体,获得抗体粗提物。经Sephadex G100凝胶过滤制备多克隆抗体纯品。使用SDS-PAGE、免疫琼脂双向扩散等方法对提取物的含量、纯度及特异性进行鉴定。结果电泳结果显示,抗体粗提物纯度为81%。抗体纯品仅在70kd和25kd处各有一条带,纯度达到96%;免疫琼脂双向扩散实验结果显示,抗体纯品、粗品及免疫三周后鸡血清均与中心孔的抗原形成抗原抗体复合物的乳白色沉淀线。结论本研究分离纯化方法制备的抗Ⅳ型胶原IgY,具有抗体纯度高、特异性强等特点,为多克隆抗体广泛应用奠定了基础。
- 吴鹏王英娇高诗博徐军
- 关键词：IGY多克隆抗体
