韩磊
- 作品数：39 被引量：105H指数：6
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- miR-221与miR-222通过靶基因TIMP3调控胶质瘤细胞侵袭能力被引量：4
- 2011年
- 目的 探讨miR-221和miR-222在胶质瘤细胞侵袭过程中的作用及其机制.方法 采用反义寡核苷酸下调miR-221和miR-222表达,Transwell、Western blot、荧光素酶实验及体内实验分别检测细胞侵袭能力、体内肿瘤生长、相关基因蛋白表达变化及靶基因鉴定.结果 下调miR-221和miR-222表达能明显抑制胶质瘤细胞侵袭能力,同时相关侵袭蛋白MMP2和MMP9表达下降.miRNA靶基因预测软件分析、Western blot、荧光素酶实验证实TIMP3是miR-221和miR-222的靶基因.裸鼠皮下肿瘤模型显示下调miR-221和miR-222表达抑制体内肿瘤生长.免疫组化发现TIMP3表达上调,MMP2和MMP9表达下调.结论 在胶质瘤细胞中,侵袭相关蛋白TIMP3是miR-221和miR-222的一个新靶基因.
- 翟博智张春智韩磊浦佩玉康春生
- 关键词：神经胶质瘤MIR-221MIR-222TIMP3
- 敲低U251细胞miR-221/222表达对其基因组表达的影响
- 2011年
- 目的 采用基因表达谱芯片和生物信息学方法研究miR-221/222对胶质瘤U251细胞株信号通路的调控作用.方法 miR-221/222反义寡核苷酸瞬时转染人胶质瘤细胞株后提取总RNA进行基因表达谱检测,对差异表达基因行生物信息学分析,将核心转录因子进行实验验证.结果 敲低胶质瘤U251细胞中miR-221/222表达后,基因表达谱分析确定158个差异表达基因;生物信息学分析发现干扰素-α信号通路是受差异表达基因调节最显著的通路,其中STAT1和STAT2是干扰素-α通路的核心蛋白.结论 抑制miR--221/222基因簇表达可部分通过干扰素-α通路上调STAT1和STAT2 mRNA的翻译水平,并使U251细胞mRNA的表达谱发生改变.
- 杨旸张春智杨卫东韩磊张安玲浦佩玉康春生
- 关键词：MIR-221MIR-222神经胶质瘤
- RNA干扰敲低Dicer对胶质瘤细胞恶性表型的影响被引量：4
- 2011年
- 目的 观察应用RNA干扰（RNAi）技术敲低Dicer酶后,在体外对U251人胶质瘤细胞生物学特征的影响.方法 构建针对Dicer基因的小分子干扰RNA重组腺病毒表达载体（rAd-Dicer）转染至U251细胞.应用RT-PCR检测Dicer mRNA水平的变化,应用免疫荧光和Western blot方法检测Dicer基因在蛋白水平的变化,并对肿瘤细胞中相关功能蛋白的表达进行分析比较.应用MTT法、流式细胞术和Transwell方法评价肿瘤细胞转染前后生物学行为的变化.结果 rAd-Dicer可显著抑制U251细胞Dicer基因的表达;与正常对照组（control）和阴性对照组（rAd-HK）比较,Western blot分析结果显示p-AKT,MMP2/9,PCNA,Cyclin a,VEGF,CD34功能蛋白在rAd-Dicer转染组细胞中表达明显上调;细胞周期结果表明rAd-Dicer转染组进入S期的细胞数增加了 14.1%～15.3%,MTT和Transwell实验结果显示rAd-Dicer转染组细胞增殖速率和体外侵袭能力显著增强.结论 敲低Dicer酶表达后,U251细胞表型具有更为恶性转化的倾向,由此初步推测全面抑制细胞microRNAs表达有可能促进肿瘤生成.
- 韩磊张安玲岳晓许鹏杨旸王广秀贾志凡浦佩玉康春生
- 关键词：神经胶质瘤DICERRNA干扰生物学表型
- beta-catenin信号通路调控胶质瘤生长的机制研究
- 目的Wnt/beta-catenin信号通路,是调控细胞生长、增殖和凋亡的关键途径。其异常激活与多种肿瘤的发生和发展密切相关。本实验拟探索Wnt/beta-catenin信号通路活性与胶质瘤关系,并进一步阐述抑制Wnt/...
- 岳晓康春生张志勇杨旸黄凯史振东兰凤鸣韩磊张安玲浦佩玉
- 关键词：胶质瘤细胞信号通路BETA-CATENIN
- 胃癌中组蛋白H3第4位赖氨酸及第27位赖氨酸乙酰化的表达及Wnt／β-连环蛋白信号通路活性改变对其表达水平的影响被引量：1
- 2016年
- 目的观察组蛋白H3第4位赖氨酸乙酰化（H3K4AC）及组蛋白H3第27位赖氨酸乙酰化（H3K27AC）在胃癌及正常胃黏膜组织中的表达，并分析与临床病理特征的关系，探讨Wnt／β-连环蛋白（β-catenin）信号通路与组蛋白乙酰化修饰之间的相互关系。方法首先利用组织芯片技术免疫组织化学的方法检测H3K4AC和H3K27AC在45例不同级别胃癌及其癌旁组织和10例正常胃黏膜组织中的表达。然后通过Western blot方法检测加入Wnt／β-catenin信号通路抑制剂FH535及激活剂Wnt3a后组蛋白乙酰化表达的变化。结果免疫组织化学结果显示H3K4AC在正常组织、癌旁组织及胃腺癌中表达阳性率分别为90．0％、88．9％、77．8％，H3K27AC表达阳性率分别为100．0％、95．6％、88．9％，结果提示与正常胃黏膜组织比较，胃癌组织中H3K4AC和H3K27AC表达水平明显下调（P〈0．05）；H3K4AC在高分化、中分化、低分化胃癌中表达阳性率分别为100．0％、91．7％、69．2％，H3K27AC表达阳性率分别为100．0％、91．7％、84．6％，差异有统计学意义（P〈0．05）。加入Wnt／β-catenin信号通路抑制剂后，H3K4AC及H3K27AC与对照组比较均出现表达下凋（P〈0．05），而加入该通路激活剂后，目的蛋白则表现为上升趋势。结论H3K4AC和H3K27AC在胃癌组织中呈低表达状态，并与肿瘤分化程度相关；Wnt／β-catenin信号通路活性改变可以调控组蛋白乙酰化的表达。
- 李朝霞刘茜王蕊韩磊姜葵张庆瑜
- 关键词：组蛋白乙酰化胃癌
- VHL基因对U251胶质瘤细胞侵袭和迁移的影响被引量：1
- 2014年
- 目的:研究VHL基因对U251胶质瘤细胞侵袭和迁移能力的影响。方法:使用VHL表达质粒转染胶质瘤细胞,采用RT-PCR检测VHL mRNA表达,Western blot检测VHL、MMP-2、MMP-9蛋白表达,应用Transwell体外侵袭实验、划痕实验检测上调VHL基因后对U251胶质瘤细胞侵袭迁移能力的影响。使用VHL表达质粒处理后的U251细胞建立裸鼠颅内模型,利用免疫组织化学染色法对颅内模型组织切片中VHL、MMP-2、MMP-9蛋白表达进行检测。结果:VHL表达质粒转染胶质瘤细胞后VHLmRNA、VHL蛋白表达增高,MMP-2、MMP-9蛋白表达下降;并抑制U251胶质瘤细胞侵袭迁移能力。对染色后的组织切片进行分析,VHL表达质粒处理组中VHL的表达较对照组明显升高,MMP-2、MMP-9蛋白较对照组表达减少。结论:VHL基因能够有效抑制U251胶质瘤细胞侵袭迁移能力,VHL基因可成为治疗胶质瘤的一个有效靶点。
- 肖兵叶敏华周旋吴淼经韩磊康春生祝新根
- 关键词：胶质瘤迁移基质金属蛋白酶
- Ad-PTEN增强LY294002对人胶质瘤细胞系U251的生长抑制作用被引量：2
- 2010年
- 目的在体外实验中，利用携带野生型PTEN基因的重组腺病毒（Ad—PTEN）和P13K的小分子抑制剂LY294002联合抑制P13K／AKT信号通路，观察两者联合对人胶质瘤细胞系U251生长有无正向协同作用及探讨产生这种作用的机制。方法15251细胞按处理方式不同分为4组：DMSO对照组、空载病毒对照组、LY294002组和联合组（LY294002＋Ad—PTEN组）。在U251细胞系中导入LY294002并转染Ad—PTEN病毒后，提取总蛋白，用Westernblotting检测PTEN表达状态及P13K、AKT表达情况；用MTT法检测Ad—PTEN和LY294002对U251生长抑制率、流式细胞仪检测细胞周期、AnnexinV法检测细胞凋亡，观察导人LY294002和转染Ad—PTEN后U251增殖能力的改变；用划痕实验、Transwell实验观察LY294002及Ad—PTEN对U251迁移和侵袭能力的影响；Westernblotting检测P13K／AKT信号通路下游相关蛋白表达水平变化。结果Westernblotting显示：与DMSO组和空载病毒组相比，LY294002组P13K、AKT蛋白表达水平明显降低，联合组（LY294002＋Ad—PTEN）的WEN蛋白明显上调，而P13K、AKT蛋白下降水平比LY294002组更为显著。联合组与LY294002组、空载病毒组、DMSO组相比细胞周期阻滞在G0／G1期；联合组凋亡率比其他三组明显增加；自培养第2天起，联合组细胞增殖速率呈下降趋势。联合组侵袭和迁移细胞的相对数少于LY294002组、空载病毒组和DMSO组。Westernblotting结果证明位于P13K／AKT下游的MMP-2、MMP-9、PCNA、Bcl-2、CyclinD1、NF—KB、FAK蛋白表达水平显著下调。结论小分子抑制剂LY294002能够有效抑制U251中P13K、AKT蛋白的表达，联合转染Ad—PTEN后不仅能提高PTEN蛋白的表达水平，对P13K、AKT的抑制更为显著。在体外实验中，联合Ad—PTEN和LY294002能够有效地通过阻滞细胞周期、减少细胞凋亡来抑制U251的增殖能力，并能够抑制细胞的侵袭和迁移能力，两者联合使用具有正向协同作用
- 刘哲李文良康春生宋云朋韩磊张安玲
- 关键词：LY294002P13K/AKT胶质瘤
- 抑制组蛋白去乙酰化酶与DNA甲基转移酶活性对胶质瘤恶性表型的影响
- 2012年
- 目的:探讨阻断组蛋白去乙酰化酶与DNA甲基转移酶的活性后对胶质瘤恶性表型的抑制作用。方法:选择丙戊酸(VPA)为组蛋白去乙酰化酶抑制剂,5-氮杂-2′-脱氧胞苷(Aza)为DNA甲基转移酶抑制剂。将U251胶质瘤细胞分为对照组、VPA治疗组、Aza治疗组和VPA+Aza联合治疗组。采用四唑盐(MTT)比色法分析肿瘤细胞增殖活性,流式细胞术分析细胞周期,Annexin V-FITC染色检测细胞凋亡,2D MatrigeⅠ、3D MatrigeⅠ、TransweⅡ法检测胶质瘤细胞侵袭能力,并建立U251细胞裸鼠皮下移植瘤模型,进行肿瘤局部多点注射上述药物治疗,治疗24d,每4天测量肿瘤体积。结果:与对照组比较,在治疗2d后各治疗组肿瘤细胞的增殖均出现明显抑制,S期和G2/M期细胞比例减少,诱导细胞周期阻滞于G0/G1期,治疗组细胞凋亡率明显下降,侵袭和运动迁移能力均明显下降,各治疗组鼠移植瘤体积增长较对照组明显减缓,与对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。以上结果均以VPA+Aza联合治疗组最为显著。结论:联合阻断DNA甲基转移酶和组蛋白去乙酰化酶活性可抑制胶质瘤表观遗传学特征,抑制胶质瘤恶性表型。
- 王晓蕊杜汋浦佩玉康春生韩磊
- 关键词：神经胶质瘤组蛋白去乙酰化酶抑制剂肿瘤侵润
- miR-27b通过调控β-catenin/Tcf-4通路调节胶质瘤恶性表型
- 目的我们的前期研究发现证实miR-27b在高级别胶质瘤细胞系高表达。但是,目前还没有miR-27b在胶质瘤恶性表型的功能研究。我们此项研究的目的是为了证实miR-27b在胶质瘤中的潜在功能及其相关机制。方法 RT-PCR...
- 陈灵朝韩磊张开亮史振东张安玲郑永日浦佩玉蒋传路康春生
- 关键词：胶质瘤
- 反义miR-21增加U251脑胶质瘤细胞对5-氟尿嘧啶化疗敏感性的研究被引量：8
- 2010年
- 目的探讨as—miR-21增加U251脑胶质瘤细胞对5-FU化疗敏感性的效果。方法透析法制备5-FU／PAMAM载体，透射电镜观察形态，紫外分光光度计检测载药率和包封率；流式细胞仪检测转染效率并分析细胞凋亡比例；MTT法检测共转染后细胞生长抑制效果；免疫荧光检测Ki67和Bcl-2蛋白表达；Transwell检测细胞侵袭能力变化。结果纳米微粒形态规整；平均包封率为66．21％，平均载药量为31．77％；PAMAM转染效率为70．53％；共转染组细胞生长显著抑制（F=273．345，P=0．000）；凋亡比例升高（F=43．21，P=0．000），Ki67、Bcl-2表达均下调；细胞侵袭能力显著下降。结论PAMAM可以有效同载as—miR-21和5-FU，且更加有效地抑制U251脑胶质瘤细胞的体外生长并增加对5-FU的化疗敏感性。
- 任玉周旋原续波许鹏王广秀贾志凡张安玲韩磊浦佩玉康春生
- 关键词：PAMAM
