陈丽峰 作品数:11 被引量:24 H指数:3 供职机构: 第三军医大学 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 全军“十五”指令性课题 国家重点基础研究发展计划 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 更多>>
双链小片段干扰RNA抑制缺氧条件下乳鼠心肌细胞缺氧诱导因子1α表达 被引量:2 2004年 目的 构建含缺氧诱导因子 1α(HIF 1α)小片段干扰RNA(siRNA)靶序列的U6启动子表达框结构 ,观察其对缺氧条件下乳鼠心肌细胞HIF 1α表达的影响。 方法 分离培养乳鼠心肌细胞 ,分为常规培养液对照组、RNA干扰 (RNAi)组 (转染无效干扰序列Ⅳ )、RNAi抑制组 (转染有效干扰序列并按下游引物不同分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组 )。设计、合成 3对 (Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ )含HIF 1α编码基因片段(正、反义 )和 1对 (Ⅳ )随机序列 (正、反义 )的PCR下游引物。PCR法构建U6启动子表达框及相应正、反序列表达框 ,同时转染心肌细胞。每组每时相点 5皿细胞。于缺氧 1h后 ,用蛋白免疫印迹法(Western blot)测定其蛋白水平表达 ,免疫组织化学法检验干扰效果。缺氧 6h后采用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)法检测HIF 1αmRNA的表达。 结果 筛选出的最佳抑制片段为Ⅱ组序列。缺氧 1h,对照组、RNAi组心肌细胞HIF 1α蛋白水平显著增高 ,Ⅰ、Ⅱ、ⅢRNAi抑制组HIF 1α蛋白水平较对照组明显降低 ,其中Ⅱ组降低最为显著 (P <0.0 1);缺氧 6h,RNAi组心肌细胞HIF 1αmRNA水平较常氧条件下明显增高 (P <0.0 1);RNAi抑制Ⅱ组未见明显增高 (P >0.0 5 )。 结论 构建的HIF 1αⅡ组表达框能有效地抑制缺氧乳鼠心肌细胞HIF 党永明 黄跃生 杨宗城 张东霞 李晓东 张铭 陈丽峰关键词:细胞低氧 心肌细胞 蛋白免疫印迹法 氯霉素处理对急性缺氧大鼠脑线粒体氧化呼吸功能的保护作用 <正> 目的:观察线粒体蛋白合成特异抑制剂氯霉素处理大鼠急性缺氧暴露后脑线粒体呼吸功能和细胞色素氧化酶(COX)活性的变化,以期了解线粒体基因组表达在缺氧引起线粒体呼吸功能改变中的作用。方法:健康雄性Wistar系大鼠随... 陈丽峰 柳君泽 宋熔文献传递 氯霉素处理对大鼠脑皮质细胞色素氧化酶亚基表达协调性的影响 2004年 目的 通过应用线粒体蛋白合成特异抑制剂氯霉素(CAP)处理后 ,观察大鼠脑皮质线粒体COX亚基Ⅰ和Ⅳ以及线粒体转录因子 (mtTFA)、核呼吸因子 1(NRF 1)等相关转录调控因子的基因表达改变 ,以了解在特异性阻断线粒体蛋白翻译后细胞核与线粒体基因组在转录与翻译水平上的变化 ,探讨mtDNA与nDNA组之间的相互关系。方法 成年♂Wistar系大鼠分为对照组和药物处理组 ,药物处理连续7d腹腔注射 0 5 %CAP ,10 0mg·kg-1,1次 / 12h。RT PCR分析脑组织COXI、COXIV、NRF 1及mtTFAmRNA水平 ,Westernblot分析脑组织线粒体COXI、COXIV及组织NRF 1蛋白。结果 CAP组脑线粒体COX亚基Ⅰ蛋白含量降低(P <0 0 5 ) ,COXⅣ /COXⅠ比值增高 ,COXImRNA水平以及COXIVmRNA与蛋白水平均无改变 (P >0 0 5 )。同时 ,mtTFA的mRNA以及NRF 1的mRNA及蛋白含量与对照组比较均无差异。结论 线粒体内COXⅠ蛋白水平的变化对mtDNA的转录不存在反馈调节机制 ,而且线粒体基因组对细胞核基因组也没有可观察到的反馈效应。 宋熔 柳君泽 陈丽峰关键词:细胞色素氧化酶 氯霉素 线粒体 亚基表达 细胞核基因组与线粒体基因组的相互调控 被引量:5 2005年 The overall cellular gene expression is well realized by the coordinated regulation between nuclear DNA and mitochondria DNA. Coordinated regulation between two genomes plays a key role not only in mitochondria biogenesis and protein synthesis but also more importantly in the regulation of gene expression of mitochondria respiratory chain subunits in order to mediate the mitochondrial respiratory function. In the present review, we focus on the mechanism of coordinated regulation between two genomes. 陈丽峰 柳君泽关键词:基因 缺氧时线粒体呼吸链亚基表达与氧化磷酸化功能的关系 线粒体是细胞氧化呼吸和产生能量的主要场所,机体90%以上的氧在线粒体消耗.缺氧使得线粒体产能功能降低,ATP生成减少,导致细胞的结构与功能障碍,这是缺氧引起机体功能活动障碍的核心.本文就缺氧时线粒体呼吸链亚基表达与氧化磷... 柳君泽 宋熔 陈丽峰关键词:线粒体 文献传递 线粒体能量生成各环节在模拟高原缺氧大鼠脑ATP生成障碍中的作用 被引量:1 2009年 柳君泽 夏琛 徐瑜 宋蓉 陈丽峰 陈丽芬关键词:心肌线粒体 高原缺氧 氧化磷酸化 质子漏 细胞色素氧化酶 缺氧复合氯霉素处理对大鼠脑皮质线粒体氧化呼吸功能及COX活性的影响 被引量:1 2005年 目的观察大鼠经不同时间低压缺氧并复合线粒体蛋白翻译特异抑制剂氯霉素(CAP)处理后,脑组织线粒体呼吸功能和COX活性的变化以及CAP处理对缺氧过程中线粒体氧化呼吸功能的影响。方法成年雄性Wistar大鼠随机分为对照组、单纯药物处理组和缺氧复合药物处理组,后者为模拟海拔5000m高原连续低压缺氧暴露1、5、15d和30d,分别于动物处死前7d按100mg/kg体质量,腹腔注射0·5%CAP。高速离心密度梯度法分离大鼠脑皮质线粒体,Clark氧电极法测定线粒体呼吸活性,极谱法测量COX活性。结果与对照组相比,单纯CAP处理大鼠脑线粒体ST3、RCR、OPR及COX活性显著降低;复合缺氧后则线粒体呼吸功能及COX活性明显改善,且随缺氧时间的延长而基本恢复到平原对照组水平。结论缺氧可以改善氯霉素处理大鼠脑皮质COX活性及线粒体的氧化呼吸功能,提高氧化磷酸化效率,其改善程度具有时间依赖性,随缺氧时间的延长而逐渐恢复。 宋熔 柳君泽 陈丽峰关键词:缺氧 氯霉素 线粒体 细胞色素氧化酶 急性低压缺氧大鼠脑线粒体基因组与细胞核基因组相互关系的研究 <正> 目的:通过观察线粒体蛋白合成特异抑制剂(氯霉素)处理大鼠急性缺氧暴露后脑线粒体细胞色素氧化酶(COX)亚基Ⅰ和ⅣmRNA及蛋白的表达,探讨缺氧时mtDNA与nDNA的相互关系。方法:Wistar系大鼠随机分为平原... 柳君泽 陈丽峰 宋熔文献传递 氯霉素处理对急性缺氧大鼠脑线粒体氧化呼吸功能变化研究 被引量:6 2004年 目的 通过观察氯霉素处理大鼠急性缺氧暴露后脑线粒体呼吸功能和细胞色素氧化酶 (COX)活性变化 ,了解线粒体基因组表达在缺氧引起线粒体呼吸功能改变中的作用。方法 以成年雄性Wistar大鼠建立氯霉素药物处理及高原缺氧模型。应用差速离心法提取脑皮质线粒体 ,Clark氧电极法测定线粒体呼吸功能 ,及细胞色素C氧化酶 (COX)的活性。结果 ①急性缺氧 2 4h后大鼠脑线粒体Ⅲ态呼吸 (ST3 )、呼吸控制率 (RCR)显著降低 ,呼吸Ⅳ态 (ST4)较对照组显著升高 ;②氯霉素处理加缺氧组大鼠脑线粒体ST3较对照组显著降低 ,ST4较对照组、单纯缺氧、氯霉素组比较均显著降低 ,RCR与对照组比较显著降低 ,但高于单纯缺氧、氯霉素组 ;③单纯缺氧、氯霉素处理组脑组织COX活性显著降低 ,而氯霉素处理加缺氧组较单纯缺氧组COX活性从正常组的 65 .7%恢复至 86.5 %。结论 ①线粒体蛋白合成的抑制可导致线粒体氧化功能障碍 ,提示线粒体基因组的完整表达在其呼吸功能发挥中的重要作用 ; 陈丽峰 柳君泽 宋熔 党永明关键词:缺氧 线粒体 细胞色素氧化酶 氯霉素 烫伤诱导大鼠心肌细胞缺氧诱导因子-1α定位表达的研究 被引量:3 2003年 目的 探讨 40 %Ⅲ度烫伤大鼠早期心肌组织中缺氧诱导因子 1α(HIF 1α)的蛋白表达的变化规律及其定位分布意义。方法 采用 40 %TBSAⅢ度烫伤大鼠模型 ,蛋白免疫印迹法 (Western blot)测定HIF 1α蛋白水平表达 ,免疫组化法定位显示HIF 1α表达。结果 烫伤后大鼠心肌组织内HIF 1α蛋白表达量明显升高。左、右心室HIF 1α蛋白表达不同 ,HIF 1α蛋白表达增加主要定位于细胞核。结论 严重烧伤可以诱导心肌组织HIF 1α蛋白表达增加。左心室对照组HIF 1蛋白含量明显高于右心室。HIF 1α蛋白表达增加主要分布于心肌细胞核内 ,诱导下游因子表达。 党永明 黄跃生 陈丽峰关键词:心肌缺血 免疫印迹