蔡嘉斌 作品数:15 被引量:41 H指数:4 供职机构: 华中科技大学同济医学院 更多>> 发文基金: 教育部“新世纪优秀人才支持计划” 国家自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 更多>>
茉莉酸甲酯诱导人神经母细胞瘤细胞株BE(2)-C凋亡作用机制 被引量:2 2008年 探讨茉莉酸甲酯对人神经母细胞瘤细胞株BE(2)-C的生长抑制作用及其对凋亡抑制蛋白家族成员XIAP和survivin表达的影响。1-2 mmol·L^-1茉莉酸甲酯处理BE(2)-C细胞6-24 h后,MTT法检测瘤细胞生长活性,克隆形成实验检测细胞增殖能力,PI单染流式细胞术检测细胞周期,AO/EB荧光染色法、Hoechst 33258荧光染色法、Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡,半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(real-time RT-PCR)检测细胞周期素D1(cyclin D1)、X连锁凋亡抑制蛋白(X-linked inhibitor ofapoptosis protein,XIAP)及survivin表达。结果表明,各浓度茉莉酸甲酯作用后,BE(2)-C细胞呈时间、浓度依赖性生长抑制,1,1.5和2 mmol·L^-1茉莉酸甲酯作用24 h后,细胞生长抑制率为20.6%-85.5%(P〈0.01),IC50为1.35 mmol·L^-1;S期细胞比率增高,部分瘤细胞发生典型的凋亡形态学改变,早期凋亡细胞(FITC^+PI^-)分别占13.51%、17.32%和24.59%(均P〈0.01),细胞死亡率分别为29.36%、54.73%和75.52%(均P〈0.01);XIAP和survivin表达分别下调18.5%-68.9%和22.4%-48.7%(均P〈0.05),而cyclin D1表达无显著变化(P〉0.05)。可见,茉莉酸甲酯能通过诱导细胞周期阻滞和凋亡抑制人神经母细胞瘤细胞株BE(2)-C的生长活性,下调XIAP和survivin基因表达可能是其作用机制之一。 蒋国松 童强松 曾甫清 胡波 郑丽端 蔡嘉斌 刘媛关键词:茉莉酸甲酯 神经母细胞瘤 细胞周期阻滞 凋亡 X连锁凋亡抑制蛋白 SURVIVIN 小鼠缺氧诱导丝裂原因子基因启动子的结构与功能分析 被引量:2 2008年 缺氧诱导丝裂原因子(hypoxia-induced mitogenic factor,HIMF)是一种肺组织特异性生长因子,可刺激肺细胞增生和再生,但HIMF基因表达调控的机制尚未明确.为探索HIMF基因转录调控机制,首先以小鼠基因组DNA为模板,通过PCR扩增方法获得-348^+61bp、-302^+61bp、-131^+61bp、-68^+61bp的HIMF启动子片段,再将其定向克隆入pGL3-Basic载体,构建荧光素酶报告基因载体,并制备转录因子ETS-1结合位点的突变或缺失体.在阳离子脂质体的介导下,报告基因载体分别瞬时转染正常氧浓度条件下培养的小鼠肺上皮MLE-12和MLE-15细胞、结肠癌CT26细胞.结果发现,各HIMF启动子片段在MLE-12、MLE-15细胞中均有活性,但在CT26细胞中活性缺失;-302^-131bp区存在HIMF启动子的核心调控元件.针对该区域ETS-1转录因子结合位点进行突变或缺失,能导致HIMF启动子活性显著降低;凝胶电泳迁移率实验表明,该区段能结合ETS-1.结果提示,转录因子ETS-1参与正常氧浓度下HIMF启动子活性的调控,为研究HIMF基因的转录调控机制奠定了实验基础. 郑丽端 童强松 蔡嘉斌 蒋国松 刘媛 杜志勇 董继华关键词:启动子 报告基因 茉莉素对人神经母细胞瘤细胞株SK—N—SH的抑制增殖及诱导凋亡作用 被引量:4 2008年 目的观察茉莉素对人神经母细胞瘤细胞株SK—N—SH的抑制增殖及诱导凋亡作用,并比较茉莉酸甲酯、顺式茉莉酮、茉莉酸作用强度差异。方法1~10mmol/L茉莉酸甲酯、顺式茉莉酮、茉莉酸分别处理SK-N-SH细胞后,NTT法检测细胞生长活性;克隆形成实验检测细胞增殖能力;PI单染法流式细胞术检测细胞周期;AO/EB荧光染色法、Hoechst33258荧光染色法、Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞术检测细胞凋亡。结果各浓度茉莉素作用后,SK-N—SH细胞呈时间、浓度依赖性生长抑制,其中茉莉酸甲酯作用最强,1~10mmol/L茉莉酸甲酯作用24h后,细胞生长抑制率为(22.74~88.67)%,IC50为1.44mmol/L;2.5mmol/L茉莉酸甲酯、顺式茉莉酮、茉莉酸作用后,细胞克隆形成能力分别降低87.00%、78.66%、39.00%,细胞周期示S期细胞比率显著增高,G0/G1期细胞比率下降,部分细胞发生典型的凋亡形态学改变;1.5~2.5mmol/L茉莉酸甲酯作用后,细胞凋亡率为(23.77—36,43)%。结论茉莉素能通过减弱瘤细胞增殖、诱导细胞周期阻滞和凋亡等机制抑制人神经母细恩情瘤细胞株的生长活性。 蒋国松 童强松 曾甫清 郑丽端 蔡嘉斌 刘媛 顾朝辉 王智宇关键词:茉莉素 神经母细胞瘤 增殖 细胞周期 脱噬作用 RELMs家族及其生物学功能研究进展 被引量:2 2008年 The resistin-like molecules(RELMs)are a novel protein family with tissue-specific distribution.Recent evidences suggest their important roles in type II diabetes mellitus,inflammation,immunological reactions and cell proliferation,which provoked many interests for the researchers.This overview summarizes the structure,tissue distribution,biological functions,regulatory pathways,and their relationship with diseases of these family members. 蔡嘉斌 郑丽端 童强松关键词:抵抗素 生物学功能 基因表达调控 缺氧诱导丝裂原因子对胎肺形态发育及表面活性蛋白表达的影响 2008年 目的探讨缺氧诱导丝裂原因子(hypoxia-induced mitogenic factor,HIMF)对胎肺形态发育及表面活性蛋白B(surfactant proteinB,SP-B)、表面活性蛋白C(surfactant proteinC,SP-C)表达的调控作用。方法体外分离、培养小鼠第13.5天胎肺组织,分为HIMF处理组:在培养基中添加重组HIMF蛋白,终浓度为100nmol/L;对照组培养基中不加任何处理。分别在培养0、48、72h后,每组每时间点选取20例胎肺采用倒置显微镜和HE染色观察胎肺形态学和组织学的改变,采用Western印迹、免疫组化、实时逆转录-聚合酶链反应技术检测胎肺组织中SP-B和SP-C的蛋白、mRNA表达水平变化。结果HIMF处理组培养48、72h后,肺泡数目分别为(14.37±0.85)和(18.41±1.24)个/高倍视野,肺泡分支的数目分别为(2.51±0.35)和(3.28±0.51)个/高倍视野,均较对照组相应时间点[分别为(8.09±0.92)、(9.54±0.78)、(1.45±0.32)和(1.69±0.43)个/高倍视野]增加,差异有统计学意义(P〈0.05)。对照组胎肺体外培养72h后,SP—B、SP—C蛋白表达较少,染色强度弱,主要定位于Ⅱ型肺泡上皮细胞;HIMF处理组可见Ⅱ型肺泡上皮细胞内SP-B、SP-C弥漫表达,以靠近肺组织边缘为甚。HIMF处理组培养48和72h后,胎肺组织中SP-B、SP-C蛋白和mRNA水平均较对照组相应时间点增加,差异有统计学意义(P〈0.05)。结论HIMF可能通过上调胚胎组织中SP-B和SP-C的表达,促进胎肺形态发育,为进一步研究HIMF在胚胎肺泡发育和成熟中的作用奠定了基础。 童强松 郑丽端 熊宙芳 汤绍涛 蔡嘉斌 蒋国松 刘媛 董继华关键词:蛋白质类 神经生长因子 胚胎发育 肺表面活性物质相关蛋白质类 茉莉素对人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y的生长抑制作用及其机制研究 被引量:1 2008年 目的探讨茉莉素对人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y的生长抑制作用及其机制。方法0.5~2.5mmol·L^-1茉莉酸甲酯、顺式茉莉酮、茉莉酸分别处理SH—SY5Y细胞6~24h后,MTT法检测瘤细胞生长活性;PI单染流式细胞术检测细胞周期;Hoechst33258荧光染色法、AnnexinV-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡;RT—PCR检测PCNA、eyelinD1、N—myc基因表达。结果各浓度茉莉素作用后,SH-SYSY细胞呈时间、浓度依赖性生长抑制,其中茉莉酸甲酯作用最强;0.5~2.5mmol·L。茉莉酸甲酯作用24h后,细胞生长抑制率为5.75%~88.7%(P〈0.01),IC50为L47mmol·L^-1;2.5mmol·L^-1茉莉酸甲酯、顺式茉莉酮、茉莉酸作用后,G2/M期细胞比率增高,部分瘤细胞发生典型的凋亡形态学改变,细胞凋亡率分别为78.9%(P〈0.01)、37.46%(P〈0.01)、8.32%(P〈0.01);0.5~2.5mmol·L^-1茉莉酸甲酯作用24h后,PCNA、N-myc基因表达分别下调33.1%~61.8%(P〈0.01)、15.3%~50.6%(P〈0.01),而eyelin D1基因表达无变化(P〉0.05)。结论茉莉素能通过诱导细胞周期阻滞和凋亡抑制人神经母细胞瘤细胞株的生长活性,下调PCNA、N-myc基因表达可能是其作用机制之一。 蒋国松 童强松 曾甫清 胡波 郑丽端 蔡嘉斌 刘媛 顾朝辉 王智宇关键词:茉莉素 神经母细胞瘤 细胞周期阻滞 凋亡 肺组织特异性基因HIMF的克隆及其真核表达载体的构建 被引量:1 2008年 目的克隆小鼠肺组织特异性表达基因缺氧诱导丝裂原因子(hypoxia-induced mitogenic factor,HIMF),并构建其真核表达载体。方法采用Western blot法检测HIMF基因在小鼠不同脏器中的表达;从小鼠肺组织中提取总RNA,采用RT-PCR法扩增全长HIMF cDNA,克隆至T载体后进行核酸序列分析,并将其正向插入到真核表达载体pcDNA3.1/Zeo(+)的限制性内切酶位点EcoRⅠ;重组子在阳离子脂质体Lipofectamine 2000的介导下瞬时转染胚胎纤维母细胞NIH/3T3、肺Ⅱ型上皮细胞MLE-12、血管内皮细胞SVEC4-10,用Western blot及RT-PCR法检测细胞HIMF表达水平。结果HIMF特异性表达于小鼠肺组织,而其他脏器未见表达。成功克隆了小鼠HIMF全长cDNA(336bp),与GenBank报道的序列一致。真核表达载体pcDNA3.1-HIMF转染细胞后,细胞内HIMF mRNA和蛋白水平均显著增高(P<0.01)。结论从小鼠肺组织中克隆出HIMF这一组织特异性基因,为深入研究HIMF的生物学功能及其在肺部疾病靶向性生物治疗中的作用奠定了基础。 郑丽端 童强松 蔡嘉斌 蒋国松 刘媛 董继华关键词:组织特异性 基因表达 干细胞标志物CD133在神经母细胞瘤中的表达及其临床意义 被引量:8 2007年 目的研究干细胞标志物CD133在神经母细胞瘤中的表达及其临床意义。方法采用免疫组织化学法检测32例神经母细胞瘤(NB)、8例节细胞神经母细胞瘤(GNB)组织中CD133的表达,并分析CD133表达与临床分期、病理类型和患儿术后生存时间的关系。结果NB、GNB组织中CD133阳性检出率分别为46.9%(15/32)、37.5%(3/8),主要表达于瘤细胞的胞浆。1~2期、3~4期、4S期NB组织中CD133阳性检出率分别为30.7%、57.9%、37.5%,各分期间差异均具有显著性意义(P<0.05);预后不良组织型CD133阳性率(52.4%)显著高于预后良好组织型(36.8%,P= 0.007)。CD133阴性患儿平均生存时间较阳性患儿显著延长(P=0.026)。结论CD133可能与NB发生、发展相关,有望成为评估患儿预后的指标之一。 童强松 郑丽端 汤绍涛 阮庆兰 李时望 蒋国松 蔡嘉斌 刘媛关键词:肿瘤干细胞 神经母细胞瘤 小鼠睾丸新基因TSEG-2的克隆及表达分析 被引量:5 2009年 目的:利用生物信息学手段克隆小鼠睾丸特异性基因TSEG-2。方法:从二级表达序列标签(EST)数据库ZooDDD中获得小鼠正常睾丸表达的EST,通过dbEST数据库检索出与其高度同源的EST序列,构建EST叠加群,Biolign软件拼接,GeneScan软件预测contigs对应的基因组序列中的外显子、内含子;针对开放阅读框设计引物序列,采用RT-PCR从小鼠睾丸组织中克隆新基因的cDNA,分析该基因在小鼠睾丸不同发育阶段、隐睾中及各脏器中的表达,并对测序结果进行生物信息学分析。结果:成功克隆了小鼠睾丸新基因TSEG-2,全长451bp,开放阅读框为267bp,编码88个氨基酸。RT-PCR证实该基因开放阅读框正确,TSEG-2在小鼠睾丸组织中高表达,在4、9、14、18、21、38日龄和2、6月龄小鼠睾丸组织中呈现规律性表达,在隐睾组织中表达减弱,且与小鼠其他cDNA无同源性,获得GenBank登录号EU079025。功能区分析发现,小鼠TSEG-2cDNA序列定位于染色体15qE3,为可溶性非分泌型蛋白,有2个可能的蛋白激酶C(PKC)磷酸化位点,1个酪蛋白激酶Ⅱ(CK2)磷酸化位点,并可能是一种核蛋白。结论:获得小鼠睾丸特异性表达基因TSEG-2,诱导小鼠隐睾发生的17-β雌二醇可引发基因TSEG-2的下调,为进一步研究该基因的生物学功能和表达调控奠定了基础。 王智宇 童强松 曾甫清 刘媛 顾朝辉 郑丽端 蔡嘉斌 蒋国松关键词:睾丸 表达序列标签 生物信息学 小鼠 缺氧诱导丝裂原因子在先天性膈疝胎鼠肺中的表达 被引量:4 2007年 目的研究缺氧诱导丝裂原因子(hypoxia-induced mitogenic factor,HIMF)在先天性膈疝(congenital diaphragmatic hernia,CDH)胎鼠肺组织中的表达,探讨其在CDH肺发育不良中的作用。方法实验组10只BABL/C小鼠妊娠8 d时经胃管注入25 mg除草醚,正常对照组给予食用油,妊娠21 d行剖腹产,解剖胎鼠两侧肺组织,采用免疫组化、Western blot方法检测HIMF表达。结果实验组CDH致畸率56.5%,肺发育不良,处于假腺体期和原始肺小管期,HIMF蛋白显著表达下调(P<0.05);实验组内产生CDH者胎肺内HIMF表达水平与无CDH者比较差异无显著性意义(P>0.05)CDH膈疝侧与非膈疝侧肺组织HIMF表达差异无显著性意义(P>0.05)。结论在CDH肺发育不良组织中HIMF蛋白表达显著下调,且早于膈疝形成,可能参与CDH肺发育不良的发病机制。 童强松 郑丽端 汤绍涛 阮庆兰 蒋国松 蔡嘉斌 刘媛关键词:横膈 先天性 肺发育不良