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柴达木枸杞离体快繁苗的移栽方法: 本发明涉及一种柴达木枸杞离体快繁苗的移栽方法，该方法包括以下步骤：⑴将生根培养基中生长10~14天、根发育良好的柴达木枸杞再生植株从生根培养基中取出，然后用室温下的自来水清洗去根部附着的培养基，得到洁净再生植株；⑵将洁净...; 王莉李毅任刚胡延萍王溪王建科石琳冯承彬唐楠; 文献传递

西藏嵩草ISSR-PCR反应体系优化研究被引量：3: 2016年; 西藏嵩草(Kobresia tibetica)为莎草科嵩草属多年生草本,根状茎短,秆密集丛生。生于海拔2 550~4 950 m的河滩地、湿润草地、高山灌丛草甸,分布于甘肃、青海、四川西部、西藏东部,其根系发达,喜湿,耐寒,生活力强。西藏嵩草繁殖以营养繁殖为主、有性繁殖为辅,其茎叶茂盛,有较高的营养价值,产草量高,是青藏高原夏、秋两季的主要放牧饲草。该研究以青藏高原高寒沼泽化草甸的建群种和优势种——西藏嵩草为材料,对影响其ISSR-PCR反应的因素(Mg^(2+)、Taq DNA聚合酶、dNTP、引物和模板DNA)进行5因素4水平的正交试验,以确定西藏嵩草ISSR分析的最佳反应体系,并筛选适宜的ISSR引物及各引物的最佳退火温度。结果表明:建立了适宜于西藏嵩草ISSR-PCR反应的最佳体系为20μL反应液中包括10×PCR buffer 2μL、1.5mmol·L^(-1)Mg^(2+)、1.0 U Taq DNA聚合酶、0.100 mmol·L^(-1)dNTP、0.3μmol·L^(-1)引物和30~40 ng DNA模板;同时从100条ISSR引物中筛选出了扩增结果清晰、稳定的12条引物,各引物的最佳退火温度为48.0~53.2℃(引物不同,其最佳退火温度也不同);西藏嵩草ISSR-PCR适宜的扩增程序为首先预变性94℃ 5min,然后变性94℃ 20s、复性48.0~53.2℃ 1min、延伸72℃ 80s、38个循环,最后72℃延伸6min。体系稳定性验证结果表明,该体系在西藏嵩草其他样品中所得条带清晰且多态性丰富,为后续西藏嵩草的遗传多样性分析和优良牧草种质资源筛选研究奠定了基础。该研究结果对以西藏嵩草为优势种的高寒沼泽化草甸研究及湿地生态系统的修复和保护具有重要意义。; 胡延萍包蕊王莉石琳李毅; 关键词：莎草科 ISSR-PCR 正交设计

一种离体条件下柴达木枸杞不定苗诱导的方法: 本发明涉及一种离体条件下柴达木枸杞不定苗诱导的方法，该方法包括以下步骤：⑴每年5~7月份取柴达木枸杞优株上的当年生嫩枝，并将叶片去除，用流水冲洗干净后，将枝条剪段后漂洗、消毒即得无菌茎段；⑵将无菌茎段作为外植体接种在预培...; 王莉李毅胡延萍石琳王溪王建科冯承彬唐楠; 文献传递

柴达木枸杞优质种苗离体微扦插快速繁殖方法: 本发明涉及一种柴达木枸杞优质种苗离体微扦插快速繁殖方法，该方法包括以下步骤：⑴将所获得的柴达木枸杞不定苗进行单株分离后，转接到一级苗生长培养基中培养，10~14天后即得一级苗；⑵将一级苗剪切成段后转接到二级苗培养基中培养...; 王莉李毅任刚胡延萍石琳王溪王建科冯承彬唐楠; 文献传递

水葫芦苗ISSR-PCR体系的优化与引物筛选被引量：2: 2017年; 以改良CTAB法提取水葫芦苗基因组DNA为模板,利用正交设计试验对影响ISSR-PCR反应体系的5个因素(TaqDNA聚合酶,dNTP,引物,模板及Mg^(2+))进行了优化筛选。经极差分析和方差分析,最终建立了水葫芦苗ISSR-PCR的最佳反应体系。结果表明,总体积20μL的反应体系中各因素浓度分别为:TaqDNA聚合酶0.025 U/μL、Mg^(2+)1.5 mmol/L、dNTP 1.0 mmol/L、引物0.5μmol/L、模板DNA 1.5 ng/μL。通过筛选得到10条扩增条带清晰的ISSR引物,并通过梯度PCR确定了各引物的最适退火温度。在此基础上对循环次数进行优化,最终确定最佳循环次数为40次。; 王建科李毅李毅胡延萍石琳王莉; 关键词：ISSR-PCR 正交设计

一种离体条件下柴达木枸杞不定苗诱导的方法: 本发明涉及一种离体条件下柴达木枸杞不定苗诱导的方法，该方法包括以下步骤：⑴每年5~7月份取柴达木枸杞优株上的当年生嫩枝，并将叶片去除，用流水冲洗干净后，将枝条剪段后漂洗、消毒即得无菌茎段；⑵将无菌茎段作为外植体接种在预培...; 王莉李毅胡延萍石琳王溪王建科冯承彬唐楠; 文献传递

云生毛茛ISSR-PCR体系优化与引物筛选被引量：8: 2016年; 旨在建立稳定可靠的云生毛茛ISSR-PCR反应体系。采用正交试验设计方法,对影响云生毛茛ISSR-PCR扩增结果的Mg2+、d NTP、Taq DNA聚合酶、引物、模板DNA五个因素进行优化筛选,对反应程序进行优化,建立适用于云生毛茛的最佳反应体系和扩增程序,并对反应体系和扩增程序进行验证;在此基础上筛选多态性好的ISSR引物,采用梯度法筛选各个引物的最适退火温度。结果表明,云生毛茛20μL ISSR-PCR的最佳反应体系为:模板DNA 30 ng,Mg2+1.95 mmol/L,Taq DNA聚合酶0.04U/μL,d NTP 0.150 mmol/L,引物0.5μmol/L;最佳反应程序为:94℃预变性5 min;94℃变性20 s,49.6-60.6℃复性1 min,72℃延伸100 s,38个循环;72℃下延伸6 min。在优化的反应体系和反应程序条件下,从100条ISSR引物中筛选获得16条ISSR扩增引物,并确定了引物各自的最适退火温度。经过不同居群云生毛茛的验证,证明优化后体系扩增条带清晰且重复性好,可用于后续云生毛茛遗传多样性的研究。; 石琳胡延萍王建科王钧许小宁李毅王莉; 关键词：ISSR-PCR 正交实验设计引物筛选

柴达木枸杞离体快繁苗的移栽方法: 本发明涉及一种柴达木枸杞离体快繁苗的移栽方法，该方法包括以下步骤：⑴将生根培养基中生长10~14天、根发育良好的柴达木枸杞再生植株从生根培养基中取出，然后用室温下的自来水清洗去根部附着的培养基，得到洁净再生植株；⑵将洁净...; 王莉李毅任刚胡延萍王溪王建科石琳冯承彬唐楠; 文献传递

青藏高原珍稀藏药水母雪莲药材DNA微量提取方法优化被引量：2: 2016年; 本研究采用改良CTAB法、改良SDS法、高盐低p H法提取自然风干的水母雪莲植株的基因组DNA,并对提取方法进行优化筛选出适合于水母雪莲药材DNA的提取方法。研究表明改良CTAB(CTAB浓度为2%,PVP浓度为1%,β-巯基乙醇浓度为2%)法所提取的基因组DNA得率较高,且使用氯仿/异戊醇抽提两次时提取出的DNA质量较好,能够满足ISSR分析要求。在此基础上对实验材料进行预处理,优化获得了完全适用于水母雪莲风干药材DNA提取的一整套提取流程。该方法能够有效去除次生代谢产物对DNA提取的影响,且对原材料消耗较少,可以应用于后续水母雪莲种质资源鉴定和遗传多样性分析。; 王钧胡延萍王建科石琳杨文韬杨文韬李毅; 关键词：水母雪莲改良CTAB法前处理

正交设计优化黑褐苔草ISSR-PCR反应体系被引量：6: 2014年; 采用正交设计对黑褐苔草(Carex atro fusca)ISSR-PCR反应的Mg^(2+)、Taq DNA聚合酶、dNTP、引物和DNA模板进行优化,以期建立最佳反应条件并筛选退火温度。结果表明:黑褐苔草20μL ISSR-PCR最佳反应体系为:1.80μmol·L^(-1)Mg^(2+)、0.60 U Taq DNA聚合酶、0.125μmol·L^(-1)dNTP、0.3μmol·L^(-1)Primer和50 ng DNA模板;引物UBC807适宜退火温度为55℃。该体系能在不同个体中扩增出清晰的、稳定性好的条带。; 胡延萍王莉包蕊石琳旭荣花李毅; 关键词：ISSR-PCR 正交设计

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石琳

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