甘萍
- 作品数：3 被引量：6H指数：2
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- 肺炎链球菌表面蛋白C对人嗜中性粒细胞释放CXCL8的影响被引量：2
- 2012年
- 目的原核表达肺炎链球菌表面蛋白C(Pneumococcal surface protein C,PspC),并分析该蛋白对人嗜中性粒细胞释放CXCL8的影响。方法将重组质粒pET-32a(+)/PspC转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达TRx-His-PspC融合蛋白并纯化;通过肠激酶切掉融合蛋白的TRx-His部分,获得PspC蛋白,免疫小鼠,获得抗PspC抗体。分离人外周血嗜中性粒细胞,经MTT法检测PspC蛋白对嗜中性粒细胞增殖活力的影响;QRT-PCR检测PspC蛋白及抗PspC抗体对人嗜中性粒细胞释放CXCL8的影响。结果表达的TRx-His-PspC融合蛋白相对分子质量约为80 000,目的蛋白约占菌体总蛋白的21%,可与His Tag McAb特异性结合。获得的PspC蛋白相对分子量约为60 000,免疫小鼠获得了高滴度的抗PspC中和抗体(1∶12 000)。分离的人外周血嗜中性粒细胞纯度>98%,活细胞比例大于96%,经不同浓度的PspC蛋白刺激人嗜中性粒细胞,不会引起宿主细胞的细胞毒作用;不同浓度的PspC蛋白刺激人嗜中性粒细胞8 h后,CXCL8基因mRNA转录水平显著上调(P<0.01),且呈剂量依赖性;CXCL8的释放均呈剂量依赖性增强(P<0.01),且24 h高于12 h;抗PspC抗体可显著抑制PspC蛋白刺激人嗜中性粒细胞释放CXCL8。结论 PspC蛋白可上调人嗜中性粒细胞趋化因子CXCL8的合成和释放,揭示了嗜中性粒细胞和肺炎链球菌致病因素之间的关系,为控制肺炎链球菌侵入性疾病奠定了基础。
- 刘清爽甘萍曹炬徐蕾
- 关键词：肺炎链球菌表面蛋白嗜中性粒细胞白细胞介素-8
- 原核表达肺炎链球菌毒力蛋白PspA对人类嗜中性粒细胞释放CXCL8的影响被引量：1
- 2012年
- 目的探讨原核表达肺炎链球菌表面蛋白A(PspA)对人类嗜中性粒细胞释放CXCL8的影响。方法将重组质粒pET-32a(+)/PspA转化到大肠埃希菌BL21(DE3)中,经异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷诱导重组菌表达TRx-His-PspA融合蛋白并纯化;通过肠激酶切掉融合蛋白的TRx-His部分,获得PspA蛋白。用PspA蛋白免疫小鼠,获得抗PspA抗体。再将PspA蛋白加入到人类嗜中性粒细胞的培养基中共孵育,检测CXCL8释放水平的差异;最后,用抗PspA抗体检测其对PspA蛋白促人类嗜中性粒细胞释放CXCL8的影响。结果中性粒细胞细胞内合成和释放到培养基上清液的CXCL8显著增加(P<0.05);而加入了抗PspA抗体后,PspA蛋白刺激人中性粒细胞释放CXCL8的能力明显减弱。结论 PspA可以上调人类嗜中性粒细胞趋化因子CXCL8的合成和释放,揭示了中性粒细胞和肺炎链球菌致病因素之间的关系。
- 徐蕾陈丹甘萍曹炬
- 关键词：膜蛋白质类中性粒细胞CXCL8
- 肺炎链球菌表面蛋白A诱导人中性粒细胞生产CXCL8的机制被引量：3
- 2013年
- 目的研究肺炎链球菌表面暴露的毒性表面蛋白A(PspA)促进CXCL8分泌的可能机制。方法使用炎症相关的信号分子NF-κB、p38MARK、ERK、JNK的抑制剂预处理人嗜中性粒细胞后,观察PspA对CXCL8分泌作用的影响。从受PspA刺激的人嗜中性粒细胞中分别提取细胞总蛋白和细胞核提取物,用ELISA法测定p38MAPK蛋白的活力和NF-κB的浓度的改变,并且采用Western blot方法进一步验证PspA对p38MAPK和IkB-α蛋白磷酸化水平的影响。结果使用NF-κB,p38MARK的抑制剂预处理人嗜中性粒细胞后,可以扭转PspA促中性粒细胞分泌CXCL8的现象;而ERK,JNK的抑制剂无此效果。另一方面,PspA可以上调中性粒细胞中的P38 MAPK蛋白的含量和NF-κB的浓度,也可以提高p38MAPK和NF-κB通路抑制蛋白IkB-α的磷酸化水平。结论肺炎链球菌PspA诱导人体中性粒细胞释放CXCL8受p38蛋白和NF-κB途径的调控。
- 徐蕾陈丹甘萍曹炬
- 关键词：肺炎链球菌中性粒细胞CXCL8NF-ΚB
