王玲
- 作品数：15 被引量：23H指数：3
- 供职机构：中山医科大学更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金国家教育部“211”工程更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 蚊虫细胞色素P450基因系列研究被引量：1
- 2001年
- 报告中山医科大学寄生虫学教研室医学昆虫学室近 5年来有关蚊虫细胞色素P45 0基因 (CYP45 0 )系列研究结果 ,包括 :①通过简并引物PCR分别从致倦库蚊、白纹伊蚊及中华按蚊中获得 3个、2个、2个CYP4家族成员基因片段 ;通过简并引物PCR及RT PCR从白纹伊蚊中获得 16个CYP6家族成员基因片段 ;②利用cDNA末端快速扩增 (RACE)法获得了白纹伊蚊CYP6家族 3个新的全长cDNA序列及 7个超过其全长一半以上的cDNA序列。GenBankaccessionnumber分别为AF2 83836 AF2 83838(全长cDNA序列 )和AF2 84782 AF2 84783(非全长cDNA序列 ) ,被国际P45 0命名委员会正式命名为CYP 6N3v1 v3(全长cDNA序列 )和CYP 6N3v4、CYP 6N4v1 v6 ,并证实这些新基因同时存在于白纹伊蚊溴氰菊酯抗性株及敏感株中 ;③运用基因步移方法从白纹伊蚊溴氰菊酯抗性株中扩增出CYP 6N3上游 3 0 76bp调控序列 ;④对白纹伊蚊CYP 6N3、CYP 6N4非翻译区序列功能分析显示 :昆虫CYP45 0与其它真核mRNA翻译起始及终止机制相似 ,但具有多态性的特点 ;⑤对白纹伊蚊CYP 6N3上游启动子区序列特征与功能分析显示 :蚊虫中CYP45 0转录起始存在着复杂性 ;⑥证实蚊虫中 CYP6存在多样性 ,并分析讨论了此种多样性形成的可能机制 ;⑦分析讨论了蚊虫细胞色素P45 0
- 黄炯烈周国理吴瑜葛春喜王玲
- 关键词：按蚊属伊蚊属库蚊属蚊虫基因扩增
- 基因步移在分离蚊虫细胞色素P450启动子中的应用及意义被引量：2
- 2001年
- 【目的】快速扩增出白纹伊蚊溴氰菊酯抗性株CYP 6N3基因 (CYP 6N3)上游启动子区序列。【方法】根据本室已获得的白纹伊蚊CYP 6N亚家族新成员CYP6N3全长cDNA的 5′ 末端核苷酸序列 ,设计 2个反向特异引物 (GSP1和GSP2 ) ,利用 4种限制性内切酶 DraⅠ、EcoRⅤ、Pvu Ⅱ和 StuⅠ分别消化白纹伊蚊溴氰菊酯抗性株高分子量基因组DNA ,消化产物与适配子连接产生 4种消化的DNA库 (DL1、DL2、DL3及DL4) ,并分别以此为模板 ,进行基因步移。用特异引物GSP1与适配子引物AP1进行第 1步PCR扩增 ,然后再以第 1步PCR产物为模板、用内部特异引物GSP2与内部适配子引物AP2进行第 2次PCR扩增。【结果】第 1步PCR结果显示 :在上述 4种消化文库中分别扩增出约 80 6、2 190、2 2 0 6和 3 0 76bp的特异条带 ;第 2步PCR结果与第 1次PCR相类似 ,但各泳道主带扩增效率明显升高。【结论】本实验已成功地获得了白纹伊蚊溴氰菊酯抗性株 CYP6N3上游启动子区核苷酸序列及其 4种限制性内切酶图谱。此外还对基因步移法在昆虫细胞色素P45 0多样性及其参与杀虫剂抗性分子机理研究中的意义进行了讨论。
- 周国理黄炯烈吴瑜王玲
- 关键词：伊蚊属细胞色素P450CYP蚊虫
- 致倦库蚊实验室保种方法初探
- 1997年
- 王玲
- 关键词：白纹伊蚊致倦库蚊生殖功能存活率雌蚊
- 全文增补中
- 白纹伊蚊细胞色素P450 CYP6N亚家族新成员5’-及3’-非翻译区序列功能分析被引量：2
- 2001年
- 目的 获得白纹伊蚊细胞色素P45 0CYP6N亚家族新成员 5’ -及 3’ -非翻译区 (untranslatedregion ,UTR)核苷酸序列 ,并进行功能分析。方法 以本文作者已获得的白纹伊蚊溴氰菊酯抗性株一新的细胞色素P45 0CYP6基因cDNA片段 ,设计 1对特异性引物 ,以反向引物 ,进行 5’ -cDNA末端快速扩增 (rapidamplificationofcDNAends ,RACE) ,以正向引物进行 3’ -RACE。然后分别进行克隆、测序和鉴定 ,以获得 5’ -UTR和 3’ -UTR ,并运用PC/GENE软件分析其功能。结果 获得CYP6N亚家族中两个新成员 5’ -UTR及 3’ -UTR ;其结构特征包括 :两个新成员前导序列均为 46个核苷酸 ;起始密码子ATG两侧核苷酸 - 3位是A、+ 4位是T ;5’ -UTR区域无稳定性的发卡结构 ;终止密码子在CYP6N3为TAA、在CYP6N4为TAG ,紧挨其 3’端核苷酸分别为A和G ,翻译产物羧基端均为亮氨酸。结论 成功地获得了白纹伊蚊细胞色素P45 0CYP6N亚家族两个新成员 5’ -及 3’ -非翻译区序列 ,进一步分析表明该两个新成员均能进行有效翻译 ,昆虫细胞色素P45 0基因翻译起始调控与翻译终止调控有部分类似于脊椎动物mRNA的翻译调控 ,但具有多态性的特点。
- 周国理黄炯烈吴瑜王玲
- 关键词：白纹伊蚊细胞色素P450非翻译区
- CYP4基因表达量在致倦库蚊溴氰菊酯抗性株和敏感株生活史各期中的初步研究被引量：1
- 1998年
- 本文用磁性分离法直接从蚊虫组织中提取mRNA．用地高辛标记的p450 CYP4基因片断为探针与mRNA杂交．检测致倦库蚊溴氰菊酯抗性株和敏感株生活史各期中CYP4基因表达量的变化情况。结果显示：两株的生活史各期中CYP4基因的表达量以幼虫为最高，蛹期最低，而抗性株与敏感株间同期的CYP4基因表达量未见显著差别。
- 肖静王玲黄炯烈
- 关键词：基因表达库蚊生活史敏感株抗性株
- 白纹伊蚊溴氰菊酯抗性株CYP6基因全长cDNA的快速扩增被引量：4
- 1999年
- 根据本室已获得的白纹伊蚊溴氰菊酯抗性株CYP6家族成员cDNA序列片段，设计一对特异性引物．以上述蚊株总RNA为模板，分别进行5’-cDNA末端快速扩增(5’-RACE)和3’-cDNA末端快速扩增(3’-RACE)，所获得的产物经1．2％琼脂糖凝肢电薄，显示：5’-RACE产物达I.5kb，3’-RACE产物达500bp，扣陈两者重叠部分的已知cDNA片段(250bp)，则该CYP6家族成员生长cDNA长度达1．75kb，与其它昆虫中已知的CYP6家旅全长cDNA长度相似；然后再分别切胶回收，并以此(RACE产物)为模板，用上述双引物进行PCR鉴定，结果显示2个RACE产物均包含有已知的250bp cDNA片段，提示所得的RACE产物为该CYP6家族成员生长cDNA。
- 周国理黄炯烈詹希美姚其方王玲
- 关键词：白纹伊蚊CDNA杀虫剂
- 白纹伊蚊溴氰菊酯抗性株CYP6基因cDNA片段的克隆与鉴定被引量：10
- 2000年
- 目的】获得白纹伊蚊溴氰菊酯抗性株CYP6基因家族中的一个cDNA片段。【方法】根据家蝇CYP6A1、CYP6D1以及致倦库蚊CYP6E同源区氨基酸序列,设计1对简并引物,进行反转录PCR,获得一大小与设计的细胞色素P450基因片段相符合的cDNA片段。将该片断与pUC19质粒重组,并克隆至JM109大肠杆菌中,经筛选后测序;将推导的氨基酸序列进行同源性分析,并用PC/GENE软件绘制系统树。【结果】获得了1条长240bp的核酸序列;所得序列与昆虫CYP6家族的同源性在36.3%～46.8%之间,但CYP6D1除外,其同源性为29.1%;而与CYP4家族同源性较低,与CYP4C1、CYP4D1、CYP4D2同源性分别为333%、329%和299%;与哺乳动物CYP3A亚家族同源性亦较高;所绘制的系统树显示出与同源性分析相一致的结果。
- 周国理黄炯烈姚其方詹希美葛春喜王玲
- 关键词：伊蚊属杀虫剂抗药性基因扩增
- 白纹伊蚊细胞色素P450 CYP6N3基因的原核表达及鉴定被引量：1
- 2002年
- 目的 对白纹伊蚊细胞色素P4 5 0CYP6N3基因进行原核表达 ,以获得高效表达蛋白。方法 根据CYP6N3基因的全长cRNA为模板进行RT -PCR。产物经T -A克隆测序鉴定后 ,亚克隆入原核融合表达载体 pGEX - 4T - 1(含有编码 2 6KDaGST的基因序列 )中 ,在大肠杆菌BL2 1(DE3)中进行原核表达。将细菌总蛋白进行SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分析 ,通过Westernblot分析鉴定目的蛋白的位置 ,并运用核酸蛋白分析仪扫描凝胶以确定表达产物的含量。结果 获得了高效表达的融合蛋白GST -CYP6N3,表达量占菌体总蛋白的 37 4 9%。结论 本实验成功地异源表达了白纹伊蚊CYP6N3基因 ,为体外重建细胞色素P4 5 0CYP6N3单加氧酶系 。
- 吴瑜黄炯烈周国理葛春喜王玲
- 关键词：白纹伊蚊细胞色素P450原核表达
- 白纹伊蚊和致倦库蚊Wolbachia 16S rRNA序列测定与分析被引量：1
- 2002年
- 【目的】PCR法扩增与测定白纹伊蚊和致倦库蚊的细胞内共生菌 Wolbachia16SrRNA序列 ,分析其种系发生关系及传播方式。【方法】从单只雌蚊中提取DNA ,PCR法扩增 16SrRNA序列 ,扩增产物进行克隆及测序。【结果】从白纹伊蚊和致倦库蚊分别扩增出Wolbachia 16SrRNA序列 ,并克隆入 pGEM T载体 ,测序证明两序列长度分别为 897bp。【结论】成功克隆了白纹伊蚊和致倦库蚊Wolbachia 16SrRNA序列。测序和同源性分析表明 ,它们之间的同源性为 99 9%,提示Wolbachia在白纹伊蚊和致倦库蚊可能存在水平传播的方式。
- 葛春喜黄炯烈陈观今潘实清吴瑜王玲
- 关键词：伊蚊属库蚊属WOLBACHIA种系发生致倦库蚊
- 白纹伊蚊细胞色素P450 CYP6N3基因分子进化机制初探被引量：3
- 2000年
- 为了初步探讨白纹伊蚊细胞色素P450 CYP6家族新基因分子进化机理,根据已获得的白纹伊蚊溴氰菊酯抗性株一新的细胞色素P450CYP6基因cDNA片段,设计反向引物,进行5’-cDNA末端快速扩增（rapid amplification of cDNA ends,RACE）;以正向引物进行3’-RACE。然后分别进行克隆、测序和鉴定。根据获得白纹伊蚊CYP6家族新成员全长cDNA序列,运用PC/GENE软件分析其5’-UTP区DNA序列相似性及编码区氨基酸残基相似性、构建系谱树。结果获得的3个全长序列中5’-UTP区DNA序列完全相同;编码区氨基酸残基相似性为3/497或4/497个氨基酸差异,而且此种差异均位于蛋白质功能非保守的基因区域;构建的系谱树显示CYP6N3基因与冈比亚按蚊CYP6N1-2亲缘关系最近,而与致倦库蚊的CYP6E1、CYP6F1亲缘关系较远。说明白纹伊蚊CYP6N3基因较致倦库蚊的CYP6E1、CYP6F1基因更为古老;白纹伊蚊CYP6N3各等位基因变异体是通过整个CYP6N3基因座的新近复制而产生。
- 周国理黄炯烈吴瑜王玲
- 关键词：白纹伊蚊细胞色素P450分子进化变异体
