汪亦品 作品数:13 被引量:28 H指数:3 供职机构: 南京医科大学附属逸夫医院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 江苏高校优势学科建设工程资助项目 江苏高校优势学科建设工程项目 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 更多>>
肝癌细胞中EP3受体亚型表达及其调控肝癌细胞生长的研究 被引量:1 2013年 目的:研究肝癌细胞中EP3受体剪接体亚型的表达类型及其调控肝癌细胞生长的功能。方法:EP3受体激动剂Sulprostone处理肝癌细胞株观察其生长情况;二维电泳和质谱分析研究EP3受体激动与下游信号蛋白之间的关系;Real-TimePCR实验鉴定肝癌细胞株中EP3受体剪接体亚型的表达类型。结果:10μmol/L Sulprostone处理CCLP1细胞24 h后,细胞生长率上调了31.46%(P<0.01);给予CCLP1细胞10μmol/L Sulprostone处理24 h后,二维电泳和质谱实验的结果显示促进细胞增殖侵袭、与细胞代谢正相关的蛋白水平升高,降低细胞代谢速度、减慢细胞生长、抑制细胞侵袭转移的相关蛋白水平下降;Real-Time PCR实验检测肝癌细胞,结果表明肝细胞癌HUH-7、Hep3B、HepG2细胞及胆管细胞癌HuCCT1、CCLP1细胞表达EP3-4、EP3-5、EP3-6和EP3-7 4种剪接体亚型。结论:EP3受体通过上调促细胞生长代谢蛋白,下调抑制细胞生长代谢蛋白而发挥促进肝癌细胞增殖的作用。肝细胞癌HUH-7、Hep3B、HepG2细胞及胆管细胞癌HuCCT1、CCLP1细胞表达EP3-4、EP3-5、EP3-6和EP3-7 4种EP3受体剪接体亚型。 陈萌 马娟 夏树开 汪亦品 白小明 张丽 冷静关键词:PGE2 肝癌 RASAL1蛋白在食管鳞癌中的表达及其临床病理意义 2013年 目的:观察Ras蛋白激活物类似物-1(Ras protein activator like 1,RASAL1)蛋白在食管鳞癌组织中的表达情况及其与肿瘤病理分级的相关性,探讨其与食管鳞癌发生、发展的关系。方法:应用组织芯片技术及免疫组织化学实验检测92例食管鳞癌组织及其癌旁食管黏膜组织中RASAL1蛋白的表达,采用LeicaQ550图像分析仪定量分析免疫组化结果。结果:免疫组织化学实验结果表明,病理分型Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型食管鳞癌组织中RASAL1蛋白的表达强度较癌旁食管正常黏膜组织明显下降,且癌组织中RASAL1蛋白表达下降程度与肿瘤分化程度呈一致趋势。计算机图像分析结果显示,与肿瘤周围正常对照组织相比,Ⅰ型和Ⅲ型分别下降了74.9%和93.8%,统计学检验结果显示差异均有统计学意义(P均<0.01)。结论:RASAL1蛋白的表达下调与食管鳞癌的发生、发展密切相关,且可能与食管鳞癌的病理分型有关。 姜时雨 汪亦品 花悦 李力 陈晟 冷静关键词:组织芯片 食管鳞癌 免疫组织化学 EP2受体介导的前列腺素E_2影响胆管细胞癌细胞HuCCT1细胞间黏附因子-1表达和侵袭的研究 2012年 目的 :探讨前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)通过EP2受体影响人胆管细胞癌细胞HuCCT1细胞间黏附因子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)的表达及癌细胞的侵袭能力。方法:用PGE2、EP1~4四种受体激动剂(17-phenyltrinorProstaglandin E2、Butaprost、Sulprostone和Prostaglandin E1 Alcohol)、EP2受体抑制剂AH6809、腺苷酸环化酶(AC)抑制剂SQ22536和蛋白激酶A(PKA)抑制剂H89处理HuCCT1细胞,通过Western blot、划痕试验等方法检测ICAM-1的蛋白表达水平以及HuCCT1细胞侵袭能力的变化。结果:PGE2明显提高HuCCT1细胞ICAM-1蛋白的表达水平,5μmol/L PGE2处理HuCCT1细胞24 h后,ICAM-1蛋白表达水平与对照组相比上升了66.17%(P<0.05),并呈浓度依赖性和时间依赖性;5μmol/L PGE2处理HuCCT1细胞24 h后,HuCCT1细胞的侵袭能力较对照组增强了43.29%(P<0.01)。10μmol/L EP1~4受体激动剂处理HuCCT1细胞24 h后,ICAM-1蛋白的表达水平与对照组相比明显增高,其中EP2受体激动剂上升了257.88%(P<0.05),10μmol/L EP2受体激动剂处理HuCCT1细胞24 h后,HuCCT1细胞的侵袭能力较对照组增强了56.99%(P<0.01);10μmol/LEP2受体抑制剂AH6809处理后ICAM-1蛋白的表达水平与PGE2组相比下降了49.14%(P<0.05),细胞侵袭能力下降了52.06%(P<0.01)。25μmol/L AC抑制剂SQ22536、10μmol/L PKA抑制剂H89处理HuCCT1细胞后,ICAM-1蛋白的表达水平较EP2受体激动剂处理组分别下降了72.87%(P<0.05)和80.78%(P<0.05)。结论:PGE2可通过EP2受体激活cAMP-PKA信号转导通路上调HuCCT1细胞ICAM-1的表达,从而促进HuCCT1细胞的侵袭转移。 许燕 白小明 张丽 马娟 张海 汪亦品 冷静关键词:胆管细胞癌 前列腺素E2 CAMP-PKA 细胞间黏附因子-1 前列腺素E2对人肝癌细胞β1-integrin表达调控及相关机制的研究 被引量:1 2013年 目的:阐明前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)通过EP1受体上调肝癌细胞Huh-7中β1-integrin的表达及其相关的信号转导通路。方法:用PGE2、EP1受体激动剂(17-PT-PGE2)、EP1受体抑制剂SC19220、NF-κB抑制剂PDTC处理Huh-7细胞,通过Western blot、免疫荧光组织化学实验等方法检测β1-integrin蛋白表达水平和NF-κB的活性。结果:5μmol/L的PGE2处理Huh-7细胞24 h后,β1-integrin的表达水平与对照组相比上升了129.48%(P<0.01),5μmol/L EP1受体激动剂17-PT-PGE2处理使细胞β1-integrin的蛋白表达水平升高了216.34%(P<0.01)。10μmol/L的EP1受体抑制剂SC19220处理后β1-integrin表达水平与PGE2组相比下降了34.51%(P<0.05)。免疫荧光组织化学实验显示17-PT-PGE2处理Huh-7细胞120 min后,NF-κB核表达水平明显增加;Western blot实验显示5μmol/L 17-PT-PGE2处理Huh-7细胞120 min后,磷酸化NF-κB-p65上升了209.27%(P<0.01)。NF-κB抑制剂PDTC处理Huh-7细胞后β1-integrin蛋白表达水平与EP1受体激动剂组相比降低了63.49%(P<0.01)。结论:PGE2可通过EP1受体上调Huh-7细胞中β1-integrin的表达,此调节作用可能与NF-κB信号转导通路有关。 王洁 白小明 张海 汪亦品 张丽 马娟 冷静关键词:前列腺素E2 Β1-INTEGRIN NF-ΚB HBV DNA一步法定量检测性能验证及评价 被引量:14 2017年 目的 评估一步法HBV DNA定量检测试剂的分析性能及其临床应用价值.方法 采用江苏省临床检验中心室间质控品和南京医科大学附属逸夫医院收集的高浓度临床标本,对一步法HBV DNA定量检测试剂的精密度、标本携带污染、正确度、功能灵敏度、分析测量范围等性能参数进行方法学性能验证和评价.结果 低浓度和高浓度标本的批内CV均≤5%,且重复性精密度<3/5TEa,中间精密度<4/5 TEa;无标本携带污染;正确度符合江苏省室间质评要求;功能灵敏度可以达到100 IU/ml,天间重复CV值≤20%;在7.58×10^1 ~ 7.58×10^8 IU/ml分析测量范围线性关系良好.结论 定量检测项目在正式用于患者标本检测前必须对检测系统的分析性能做详细充分的评价,通过验证一步法HBV DNA定量检测试剂可以满足目前乙肝筛查和临床疗效监测的需求,并且经济简便,适用于临床常规检测. 应葳 李万春 宋涛 王珏 莫伏根 汪亦品 程茂良关键词:乙型 荧光定量PCR NLRP3在鼻咽癌中的表达及其临床意义 被引量:4 2016年 目的:探讨炎症小体NLRP3在鼻咽癌组织和正常鼻咽黏膜组织中的表达水平变化及其与患者临床预后的关系。方法:采用实时定量PCR和免疫组化检测40例鼻咽癌组织和12例正常鼻咽黏膜组织中NLRP3的表达水平。结果:1NLRP3在鼻咽癌组织中表达显著高于正常鼻咽黏膜组织(P<0.05);2在鼻咽癌患者中,NLRP3的表达水平与肿瘤的淋巴结转移以及患者的临床预后有关(P<0.05),NLRP3高表达患者较低表达患者具有更好的局部无复发生存率和无瘤生存率,但与年龄和组织病理类型无明显相关关系(P>0.05)。结论:NLRP3具有提示鼻咽癌肿瘤转移及判断患者预后的价值。 汤俊照 汪亦品关键词:NLRP3 肿瘤转移 鼻咽癌 E-cadherin表达下调致GSK-3β磷酸化失活的分子机制研究 被引量:3 2012年 目的:探讨E-cadherin表达下调在肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中诱导GSK-3β磷酸化失活信号通路的调控机制。方法:运用RNA干扰技术建立E-cadherin表达缺失的稳定细胞株。Western blot实验检测稳定株细胞(HepG2-E-cadherin-shRNA)E-cadherin的表达水平以及GSK-3β与Akt的磷酸化水平;用10μmol/L PI3K抑制剂(LY294002)处理HepG2-E-cadherin-shRNA细胞,Western blot检测细胞GSK-3β磷酸化水平,RT-PCR检测HepG2-E-cadherin-shRNA细胞PTEN和Egr-1的mRNA水平,Western blot检测细胞PTEN的蛋白表达水平。结果:Western blot实验结果表明,HepG2-E-cadherin-shRNA稳定株细胞E-cadherin表达水平较空白对照组下调约82.54%,GSK-3β磷酸化水平较空白对照组上升约298.93%,Akt磷酸化水平较空白对照组上升约218.98%;LY294002作用4 h后,GSK-3β磷酸化水平与空白对照组相比下降至48.13%;RT-PCR结果显示,下调HepG2细胞E-cadherin表达水平后,细胞PTEN的mRNA水平下降至76.14%,Egr-1的mRNA水平下降至66.89%,PTEN的蛋白表达水平下降至53.77%。结论:人HCC细胞中E-cadherin抑制性表达导致细胞内GSK-3β磷酸化失活很可能是通过PI3K/Akt的信号通路实现的。 马修平 张海 汪亦品 张丽 马娟 彭韬 冷静关键词:E-钙黏蛋白 肝细胞肝癌 糖原合酶激酶3Β PGE<sub>2</sub>对胆管细胞癌HuCCT1细胞侵袭能力的影响及相关机制的研究 研究背景:前列腺素E<sub>2</sub>(prostaglandin E<sub>2</sub>,PGE<sub>2</sub>)是花生四烯酸经过环氧合酶-2(COX-2)催化的代谢产物,PGE<sub>2</sub... 汪亦品关键词:胆管细胞癌 MMP2 Huh7细胞中边缘群细胞分选及其增殖分裂能力的研究 被引量:3 2010年 目的:探讨Huh7细胞中边缘群细胞的分选及边缘群细胞在增殖及分裂能力方面与非边缘群细胞的差异,为肝癌的治疗探索新的思路。方法:采用流式细胞仪分选Huh7细胞中的边缘群细胞和非边缘群细胞,用荧光显微镜观察其胞内Hoechst33342荧光染色强度差异;以半定量RT-PCR测定ABCG2 mRNA表达水平的差异;应用免疫荧光染色检测ABCG2蛋白表达的差异并观察其增殖和不对称分裂能力的差异。结果:非维拉帕米处理组边缘群细胞比例约为2.22%,经维拉帕米阻断后边缘群细胞比例减少至0.74%;边缘群细胞中Hoechst33342的荧光强度明显较非边缘群细胞弱,在边缘群细胞中ABCG2 mRNA表达水平是非边缘群细胞的4.32倍(P<0.01),增殖能力是非边缘群细胞的2.7倍(P<0.01),且边缘群细胞能产生ABCG2(+)和ABCG2(-)子代细胞,而非边缘群细胞只能产生ABCG2(-)子代细胞。结论:Huh7细胞中存在少量边缘群细胞(2.22%),其增殖能力较非边缘群细胞强且具有不对称分裂能力(自我更新和定向分化),具有肿瘤干细胞的特性;因此边缘群细胞分选可以作为肿瘤干细胞分离的一种方法,并且在肿瘤的耐药和进展中具有更重要作用,进一步探讨针对Huh7边缘群细胞生物学行为的研究有望开辟肝癌治疗的新思路。 丁景弦 白小明 张海 汪亦品 彭韬 冷静关键词:肝癌 维拉帕米 HOECHST33342 ABCG2 PGE2对胆管细胞癌HuCCT1细胞侵袭能力的影响及相关机制的研究 研究背景:前列腺素E(prostaglandin E,PGE)是花生四烯酸经过环氧合酶-2(COX-2)催化的代谢产物,PGE主要通过与细胞膜表面四种EP受体( EP1、EP2、EP3和EP4受体)结合,激活下游信号转导... 汪亦品关键词:胆管细胞癌 PGE2 MMP2