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血管紧张素Ⅱ相关基因BC097361的克隆表达及多克隆抗体的制备: 目的：构建血管紧张素Ⅱ相关新基因BC097361的原核表达载体，诱导BC097361基因的融合蛋白表达，并对其进行纯化，制备兔抗BC097361融合蛋白多克隆抗体并进行鉴定，从而探讨该基因在肝纤维化发生中的作...; 梁赟磊; 关键词：血管紧张素融合蛋白多克隆抗体肝纤维化; 文献传递

终末期肝病病情预后判断模式的演变及评价: 2008年; 近年来,终末期肝病的治疗方案不断增多,正确判断肝病病情能够指导临床医生选择更加合理的治疗方案。目前应用的判断预后的公式先后经历了Child-Turcotte分级。; 梁赟磊邢卉春; 关键词：终末期肝病评分系统判断预后失代偿期肝硬化预后判断

血管紧张素Ⅱ相关新基因BC097361融合蛋白的表达、纯化及多克隆抗体的制备被引量：2: 2009年; 目的构建血管紧张素Ⅱ相关新基因BC097361的原核表达载体，诱导融合蛋白的表达，并对其进行纯化；制备兔抗BC097361蛋白多克隆抗体并进行鉴定。方法应用RT—PCR技术，以LX02细胞总RNA为模板，扩增BC097361目的基因片段，构建原核表达载体pET-32a（＋）-BC097361。转化大肠埃希菌BL21（DE3），异丙基-β-半乳糖苷诱导并通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析、Western blot分析证实融合蛋白表达的特异性。大量表达后利用Ni^＋亲和柱对表达蛋白进行纯化及柱上复性。纯化蛋白免疫新西兰兔，获得抗BC097361蛋白的多克隆抗体。以纯化的BC097361蛋白为抗原，分别以免疫前后的新西兰兔血清作为第一抗体，利用Western blot和酶联免疫吸附法对多克隆抗体进行特异性分析及效价检测。结果扩增获得BC097361基因片段，成功表达了BC097361相关蛋白，经十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western blot分析得到证实。成功获得融合蛋白及兔抗BC097361多克隆抗体。酶联免疫吸附法检测证实多克隆抗体效价〉1：320000，Western blot、免疫组织化学检测证明多克隆抗体的特异性良好。结论利用大肠埃希菌BL21（DE3）能够成功表达BC097361蛋白，获得高特异性、高效价兔抗BC097361蛋白的多克隆抗体，为今后研究BC097361蛋白的生物学特性奠定了基础。; 王琦梁赟磊魏红山邢卉春成军兰孟东张斌; 关键词：肝纤维化基因原核表达蛋白纯化

应用酵母双杂交技术筛选与乙型肝炎病毒e抗原结合蛋白2结合的肝细胞蛋白编码基因被引量：1: 2008年; 目的构建乙型肝炎病毒e抗原结合蛋白2(HBEBP2)的真核表达载体并筛选人肝细胞中与HBEBP2相互作用的基因。方法通过PCR扩增获得HBEBP2基因,构建真核表达载体pGBKT7-HBEBP2,转化酵母菌AH109并在其中进行表达。随后与预转化了人肝细胞文库质粒pACT2的酵母细胞Y187进行配合,在营养缺陷型培养基(SD/-Trp/-Leu/-His/-Ade)和铺有X-α-gal的营养缺陷型培养基(SD/-Trp/-Leu/-His/-Ade)上进行双重筛选获得阳性克隆。提取文库质粒pACT2-DNA并与pGBKT7-HBEBP2共同转化AH109酵母菌株,于铺有X-α-gal的营养缺陷型培养基(SD/-Trp/-Leu/-His/-Ade)上进行筛选以排除假阳性克隆。挑取真阳性克隆送测序,并进行生物信息学分析。结果筛选出6种与HBEBP2相互作用的蛋白,其中包括人类线粒体蛋白、人类α-2-糖蛋白1、人类磷酸甘露糖-p-长醇利用缺陷1和人类丝氨酸蛋白酶抑制剂等4个已知功能蛋白及2个未知功能序列。结论筛出人肝细胞中一组与HBEBP2相互作用的蛋白,为进一步探讨HBEBP2在HBV致病过程中的作用奠定了基础。; 梁赟磊成军邢卉春王琦李越张斌樊万虎袁菊张黎颖洪源; 关键词：双杂交系统技术蛋白质相互作用

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梁赟磊

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