李睿
- 作品数：11 被引量：10H指数：2
- 供职机构：兰州生物制品研究所有限责任公司更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
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- 重组大肠杆菌pET-28(a)/LF/BL21的传代稳定性被引量：2
- 2012年
- 目的通过菌株传代方法观察携带致死因子(lf)基因的重组大肠杆菌pET-28(a)/LF/BL21的传代稳定性。方法将重组菌株pET-28(a)/LF/BL21在含有卡那霉素的LB培养基中连续传代至100代,比较第1、10、20、50、100代菌株的菌落形态、细菌形态、生化特性、质粒保有率、生长速度等的差异;取各代次菌株提取质粒DNA且分别进行双酶切及PCR鉴定、DNA测序;诱导表达各代次菌株,比较各代次菌株的重组rLF蛋白的表达水平及免疫反应性。结果各代次菌株菌落形态、生化特性、生长速度等方面与原始种子库无明显差异;在传至100代时的质粒保有率为76%;各代次菌株重组质粒电泳图谱、酶切图谱、PCR图谱未改变,未见lf基因变异;各代次菌株的总蛋白电泳图谱r、LF蛋白表达量r、LF蛋白的免疫反应性与原始种子库无明显差异。结论重组大肠杆菌pET-28(a)/LF/BL21具有较好的传代稳定性。
- 李睿王革钱秋娟王秉翔
- 冻干乙型脑炎减毒活疫苗的冻干工艺优化研究被引量：3
- 2009年
- 为了研究优化冻干乙型脑炎减毒活疫苗的冻干工艺,运用正交试验法L934考察不同冻干参数对该疫苗成品质量的影响,以外观、残余水分、病毒滴度以及热稳定性为直观分析指标,并对病毒滴度进行方差分析。结果显示,主干燥时间和主干燥真空压力对病毒滴度的影响有显著统计学意义(P<0.05)。优化的冻干参数为预冻温度-35℃、时间2h;主干燥温度从-35℃升温至-10℃,再由-10℃升温至33℃,总耗时16h,真空压力0.220mbar;二次干燥的温度维持于30℃,真空压力为0.001mbar,终点测试压力无变化时结束。对冻干乙型脑炎减毒活疫苗冻干参数筛选优化后,可得到较佳的冻干曲线,经验证该曲线适用于生产。
- 李睿徐斌王弢
- 关键词：冻干工艺正交试验
- 氢氧化铝吸附炭疽杆菌重组保护性抗原的影响因素
- 2011年
- 目的探讨氢氧化铝吸附炭疽杆菌重组保护性抗原(Recombinant protective antigen,rPA)的影响因素。方法取含不同PO43-浓度的PBS和添加EDTA的PBS,分别稀释rPA后,加入氢氧化铝,放置2～8℃及(23±2)℃作用不同时间,检测A280和A260值,计算未吸附的rPA蛋白量,并比较不同溶液中氢氧化铝对rPA的吸附效果。结果氢氧化铝对rPA的吸附率随PO43-浓度的增加而降低;PBS中添加EDTA后,氢氧化铝对rPA的吸附效果明显下降;2～8℃较(23±2)℃的吸附率略有增加,但不同时间的吸附量无明显差异;在H2O中氢氧化铝对rPA的吸附效率比在PBS中高。结论稀释缓冲液和离子强度、EDTA均可影响氢氧化铝与rPA的吸附效果,但吸附温度和时间对吸附的影响不大。
- 王革李睿王秉翔
- 关键词：氢氧化铝炭疽抗原
- 西林瓶装注射用水的装量检查分析被引量：2
- 2010年
- 为了检查西林瓶装注射用水的实际分装量是否符合2005年版《药典》三部要求,按照2005年版《药典》三部中"生物制品分装和冻干规程",分装规格为0.8ml的西林瓶装注射用水10000瓶,随机在分装过程的前、中、后阶段共抽取100瓶,轧盖、目检。分别用1ml标定注射器及1ml普通无菌注射器抽取每瓶注射用水的实际体积,以t检验法对实际抽取量与标示量的差值进行统计学分析,结果显示其与2005年版《药典》三部要求分装附加量为0.1ml相比有显著性差异(P<0.001)。
- 徐斌蒋井明李睿
- 关键词：T检验
- 从大肠杆菌中表达纯化炭疽杆菌保护性抗原
- 目的：利用基因重组技术获取炭疽杆菌保护性抗原(PA)。
方法：将炭疽杆菌保护性抗原编码基因pag与pET载体连接构建重组质粒，转化大肠杆菌DE3，诱导表达炭疽杆菌保护性抗原，并经亲和层析及凝胶过滤纯化此抗原。
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- 王革尤明强李睿王秉翔
- 关键词：炭疽杆菌保护性抗原基因重组生物学活性
- 文献传递
- 联动灌装线的验证研究
- 2002年
- 目前国内对小瓶清洗、干热灭菌、灌封三位一体联动分装线的验证处于起步阶段 ,而国外的某些验证试验方法对于国内大多数制药行业又是不切实际的。依据国内外的有关资料 ,按照现行GMP的要求 ,结合生产的实际情况 ,建立了一套验证试验方法 。
- 徐斌李国晏崔萱林周园李睿杨勇
- 关键词：干热灭菌灌封GMP药品生产
- 冻干乙型脑炎减毒活疫苗的冻干工艺优化研究
- 目的：研究优化冻干乙型脑炎减毒活疫苗的冻干工艺。
方法：运用正交实验法L634考察不同冻干参数对该疫苗成品质量的影响，以外观、残余水分、病毒滴度以及热稳定性为直观分析指标，并对病毒滴度进行方差分析。
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- 李睿徐斌王弢
- 关键词：冻干工艺正交试验病毒滴度
- 文献传递
- 炭疽杆菌保护性抗原在大肠杆菌中的表达及其纯化被引量：1
- 2010年
- 利用基因重组技术获取炭疽杆菌保护性抗原(PA)。将炭疽杆菌保护性抗原编码基因pag与pET载体连接构建重组质粒,转化大肠杆菌DE3株,诱导表达炭疽杆菌保护性抗原,并经亲和层析及凝胶过滤纯化此抗原。实验成功构建了表达炭疽杆菌保护性抗原的重组菌株,纯化后PA纯度达90%,且经检测纯化产物具有天然PA的生物学活性。同时表明从大肠杆菌中纯化PA较以往从炭疽杆菌中获取PA简便易行。
- 王革尤明强李睿王秉翔
- 关键词：纯化
- 麻疹减毒活疫苗冻干工艺的优化被引量：3
- 2010年
- 目的优化麻疹减毒活疫苗的冻干工艺。方法以预冻过程(温度、时间)、升华干燥过程(温度、时间、真空控制值)、解析干燥过程(温度、时间、真空控制值)冻干参数为影响因素,应用L(827)正交试验设计冻干曲线,对8批麻疹减毒活疫苗半成品进行冻干,采用直观分析法的综合平均值R()iⅠ和极差R(i)j分析不同批次冻干制品的干损率、病毒滴度、热稳定性和残余水分,筛选最优因素水平组合,并对其进行适用性验证。结果优化的麻疹减毒活疫苗冻干工艺参数为:预冻:温度5～-25℃、时间0.5h,温度-25～-40℃采用大于1℃/min的冻结速率,温度-40℃、保持时间3h;升华干燥:温度-40～-20℃、时间1.5h、真空控制值0.16mbar,温度-20℃、保持时间8h、真空控制值0.16mbar,温度-20～30℃、时间5h、真空控制值0.16mbar;解析干燥:温度保持30℃、时间6h、真空控制值0.005mbar,以优化的麻疹减毒活疫苗冻干工艺冻干的制品成型良好,干损率平均为1.36%,稳定性好,残余水分在1.62%～1.67%之间。结论优化的麻疹减毒活疫苗冻干工艺适合麻疹疫苗大规模生产。
- 徐斌王弢周园李睿刘毅
- 关键词：麻疹疫苗疫苗减毒冷冻干燥法正交试验
- 可溶性重组炭疽保护性抗原的发酵、纯化及生物学特性分析
- 对表达炭疽保护性抗原(PA)的重组菌株进行发酵,并纯化、分析目的蛋白PA的生物学特性。试验结果显示重组菌株在LB、TB培养基中发酵,不限制通氧量、pH维持在6.8～7.6细胞株生长所能接受的范围、30℃条件下诱导,可获得...
- 王革尤明强李睿胡丽娜马维民卜培英王秉翔
- 关键词：发酵纯化生物学特性
- 文献传递
