李志杰
- 作品数：26 被引量：87H指数：5
- 供职机构：南方医科大学附属新会医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省科技计划工业攻关项目国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 内毒素诱导性基因启动子结合蛋白的筛选新方法及其应用被引量：2
- 2008年
- 目的建立研究DNA-蛋白质相互作用的新方法。方法选择6只SPF级BALB／c小鼠，模型组经尾静脉注射脂多糖（LPS）25mg／kg，使平均动脉压（MAP）降至40mmHg（1mmHg=0．133kPa）造成内毒素休克，然后迅速处死，正常对照组同期处死，取肝脏组织。利用生物素一链亲和素系统结合磁珠分离技术筛选内毒素诱导基因（LIG）启动子的结合蛋白。用聚合酶链反应（PCR）扩增末端带生物素标记的LIG启动子探针，提取动物肝脏组织胞核蛋白，与制备的LIG启动子探针进行孵育，再以标记有链亲和素的磁珠分离LIG启动子-蛋白反应复合物，使用不同浓度NaCl洗脱结合的蛋白，使用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）分离样品蛋白，并对凝胶进行银染显色，比较模型组与正常对照组的差异条带。结果两组胞核蛋白中共观察到15条差异条带。分析差异条带显示，与正常对照组比较，在低亲和力作用水平，LPS作用后有4个蛋白开始与LIG启动子作用力增强，而有1个蛋白则同启动子的相互作用减弱；在DNA-蛋白质高亲和力作用水平，则有9个蛋白因LPS刺激而同DNA的结合力增强，有1个蛋白同启动子的相互作用消失。结论成功建立了生物素-链亲和素结合磁珠分离技术的新方法，为研究DNA-蛋白质相互作用开拓了新思路，并从“转录调控组学”角度深入理解基因表达调控机制奠定了基础。
- 王娟刘志锋徐佳杨莉李志杰邓鹏姜勇
- 关键词：DNA-蛋白质相互作用启动子基因表达调控
- 人可溶性晚期糖基化终产物受体的原核表达及活性鉴定被引量：3
- 2005年
- 目的构建人可溶性晚期糖基化终产物受体(hsRAGE)His融合蛋白表达载体并在原核细胞表达与纯化。方法PCR扩增hRAGE基因编码区的胞质外段,利用分子克隆技术将其重组于pET-14b载体中。利用酶切、序列分析鉴定克隆正确性。转化大肠杆菌BL21(DE)3,用异丙基b-D硫代半乳糖(IPTG)诱导融合蛋白表达。以尿素对获得的包涵体进行处理,用金属螯合亲和层析的方法纯化融合蛋白并进行复性。以Western印迹和ELISA法对融合蛋白的免疫原性及与AGE的结合活性进行鉴定。结果克隆的hsRAGE完全正确,经过表达与纯化,获得了相对分子质量约45000的融合蛋白。纯化得到的变性蛋白经复性后可被相应抗体识别。所得到的hsRAGE具有与AGE相互结合的活性,并能够抑制AGE诱导的内皮细胞NF-kB的表达。结论成功地构建了hsRAGE融合蛋白原核表达载体且获得高效表达,得到大量的复性蛋白;该蛋白具有特异的免疫原性,保持与AGE的结合活性,并能够有效阻断AGE-RAGE相互作用。
- 赵善超姜勇刘靖华李志杰邓鹏张桂林刘志强张训侯凡凡郑少斌
- 关键词：晚期糖基化终产物
- 整合素α_v重组腺病毒的构建和鉴定及对人肝癌细胞黏附特性的影响
- 2006年
- 目的构建表达人整合素αv亚基(整合素αv)重组腺病毒,并在人肝癌细胞株SMMC7721细胞中表达,探讨整合素αv对肝癌细胞黏附特性的影响。方法将人整合素αvcDNA克隆到腺病毒穿梭质粒pAd-Track巨细胞病毒(CMV)启动子下游,与腺病毒骨架质粒pAdEasy1在细菌内同源重组,在HEK293A细胞中包装成整合素αv重组腺病毒。以重组腺病毒感染SMMC7721细胞24h后,用蛋白质免疫印迹法(West-ernblot)检测整合素αv的表达;通过黏附实验研究其对SMMC7721细胞黏附的影响。结果构建了整合素αv重组腺病毒载体并制备出高滴度重组腺病毒。重组腺病毒感染SMMC7721细胞后,整合素αv能够正确表达,并且SMMC7721细胞黏附率显著高于对照组和空白组(P<0.01)。结论整合素αv基因在SMMC7721细胞的黏附中起重要作用,是肿瘤转移的重要分子基础。
- 李旭艳刘靖华李志杰莫永炎刘亚伟刘志锋邓鹏姜勇
- 关键词：整合素细胞黏附腺病毒载体
- 高迁移率族蛋白1诱导内皮细胞释放细胞因子的作用及其与脂多糖对白细胞介素6释放的协同效应被引量：11
- 2006年
- 目的 观察高迁移率族蛋白1（HMGB1）对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）释放细胞因子的影响及其对脂多糖（LPS）诱导细胞因子白细胞介素6（IL-6）表达的作用。方法 用LiquiChip液相蛋白芯片系统检测重组HMGB1蛋白（15ng／ml）诱导HUVEC 11种细胞因子／趋化因子的水平变化；检测不同浓度HMGB1（0～75ng／ml）刺激后不同时间点（0、1、3、6、12和24h）HUVEC分泌IL-6的水平以及HMGB1（15ng／ml）与LPS（10ng／ml）共同刺激对HUVEC分泌IL-6的影响。结果 HMGB1刺激后HUVEC分泌粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）、干扰素γ（IFN-γ）、IL-6、IL-8和单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）的水平明显升高（均P〈0．01），分别是对照（未加刺激）的5．7、4．2、27．8、12．8和5．4倍；HMGB1蛋白以时间和剂量依赖方式诱导IL-6的分泌，在刺激后3～6h，IL-6水平开始增加，在6h时IL-6由对照的32ps／ml±21pg／ml增加到75pg／ml±22pg／ml（P〈0．01），12h（453pg／ml±78pg／ml）～24h（901pg／ml±184pg／ml）持续升高（P〈0．01）；随着HMGB1浓度的增加，IL-6的水平也明显增加，当HMGB1浓度为3、15、75ng／ml时，IL-6分别是155ps／ml±33pg／ml、901pg／ml±184pg／ml、1508pg／ml±378pg／ml，与基础值32pg／ml±21pg／ml相比，差异有统计学意义（P〈0．01）。分别用LPS（10ng／ml）和HMGB1（15ng／ml）单独刺激HUVEC时，IL-6的含量从基础的32pg／ml±22pg／ml分别增加至289pg／ml±42pg／ml和901pg／ml±184pg／ml（均P〈0．0l）；如果用二者共同刺激HUVEC，IL-6的生成量大大增加（2361pg／ml±299pg／ml），二者存在协同作用（F=69．405，P〈0．01）。结论 HMGB1蛋白可诱导HUVEC释放多种炎性细胞因子；HMGB1诱导IL-6的上调具有时效性和量效性关系，并可协同LPS刺激HUVEC释放IL-6，在脓毒症的发生和发展中起重要作用。
- 刘靖华李志杰唐靖刘亚伟赵雷邓鹏姜勇
- 关键词：脓毒症细胞因子
- 阿奇霉素联合氯霉素治疗恙虫病66例临床分析被引量：18
- 2011年
- 目的:总结恙虫病的治疗经验。方法:对66例恙虫病病例作回顾性分析,对不同抗感染药物治疗疗效和转归加以总结。结果:不同抗感染药物临床主要症状消失时间有显著差异,治愈率无差别。结论:氯霉素两天联合阿奇霉素治疗效果好且副作用少。
- 华美香李志杰
- 关键词：丛林斑疹伤寒阿奇霉素氯霉素
- 阿德福韦酯治疗慢性乙型肝炎的效果观察
- 2014年
- 目的:探讨阿德福韦酯治疗慢性乙型肝炎(乙肝)病症的临床效果。方法:分析应用阿德福韦酯治疗慢性乙肝106例患者的效果。结果:阿德福韦酯在治疗慢性乙肝病症上效果较为明显,HbeAg、HbsAg、HBV-DNA、ALT四项指标在治疗前后及治疗时间上相比效果差异有统计学意义(P<0.05)。结论:阿德福韦酯抑制乙肝病毒效果明显,治疗状况较好,且不良反应较小。
- 游长胜李志杰周清霞林华强
- 关键词：阿德福韦脂慢性乙型肝炎
- 脓毒症单核巨噬细胞特异性结合肽的筛选被引量：6
- 2007年
- 利用噬菌体随机肽库展示技术,筛选出与脓毒症单核/巨噬细胞特异性结合的短肽,探索脓毒症治疗的新方法.分别以经过脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)处理的人外周血单核细胞株(THP-1)细胞作为筛选的靶细胞,以未经LPS处理的THP-1细胞作为非特异性噬菌体吸附细胞,对噬菌体随机环七肽库进行4轮"差减"筛选,经过细胞ELISA验证阳性噬菌体克隆,对获得的阳性克隆进行DNA测序及生物信息学分析,并进一步利用免疫荧光实验,鉴定噬菌体克隆与LPS处理THP-1细胞的结合特异性.4轮筛选后,随机挑取的噬菌体克隆,测序后得到可与LPS处理的THP-1细胞特异性结合肽.对去冗余后的七肽进行Clustal W多序列比对分析和BlastP蛋白同源相似性分析,细胞免疫荧光检测确定获得的噬菌体展示七肽可与LPS处理的THP-1细胞特异性结合.噬菌体随机肽库技术为脓毒症单核/巨噬细胞表面靶位的筛选提供了高效、快捷的筛选体系,实验获得的多肽基序具有高度保守性和细胞特异性,这些多肽的生物活性将是下一步的研究内容.
- 丁宁刘承武李志杰刘靖华邓鹏姜勇
- 关键词：噬菌体展示肽库脓毒症
- 基于细胞穿透肽技术对p38丝裂原活化蛋白激酶蛋白功能的研究被引量：4
- 2006年
- 目的构建基于TAT技术的p38MAPK蛋白转运系统并对导入细胞的融合蛋白的功能进行鉴定。方法采用亚克隆方法构建重组质粒pHis-TAT-p38和pHis-TAT-p38(AF)无活性突变体,并诱导原核表达纯化融合蛋白;将这两种蛋白加入培养的ECV304细胞,在高渗刺激下,通过检测p38底物ATF2的磷酸化水平,以观察由TAT转导进入细胞His-TAT-p38及其无活性突变体对内源性p38活性的影响。结果酶切和测序结果表明,载体构建正确;SDS-PAGE凝胶电泳可见原核表达纯化得到高纯度目的蛋白;Westernblot表明,融合蛋白His-TAT-p38及其突变体能够以一种时间和浓度依赖性方式高效转导进入细胞;导入His-TAT-p38蛋白后,结果发现导入的野生型p38可增强内源性p38的功能,而无活性突变体则竞争性抑制了内源性p38MAPK蛋白的功能,从而阻止或抑制其对内源性底物ATF2的磷酸化,使得信号不能传递下去,进而抑制p38MAPK通路的活动。结论成功建立了基于TAT的蛋白转运系统,并证实TAT能够以浓度和时间依赖方式高效转运蛋白进入真核细胞;进入细胞的His-TAT-p38和His-TAT-p38无活性突变体蛋白均具有较高的生物学活性,在高渗刺激作用下前者可以增加p38磷酸化水平,而后者则显著抑制p38信号通路的活性。
- 杨丽萍刘志锋黎永明李志杰姜勇
- 关键词：P38丝裂原活化蛋白激酶蛋白转导
- 社会支持干预对感染科护士职业倦怠的影响被引量：7
- 2017年
- 目的:探讨社会支持干预对感染科护士职业倦怠的影响。方法:对感染科就职的护士(包括轮科的护士)共51名进行职业倦怠量表调查并进行社会支持干预,比较进行社会支持干预前后的职业倦怠情况。结果:经社会支持干预后,总体来说,护士的职业倦怠情况明显改善。结论:进行社会支持干预能减轻感染科护士职业倦怠,提高工作绩效,维护护理队伍的稳定。
- 冯少英李志杰陈影霞袁艳嫦陈洁周清霞龙军萍
- 关键词：护士职业倦怠社会支持感染科
- T7噬菌体展示筛选系统筛选与p38 MAPK及PRAK相结合蛋白
- ABSTRACT IN CHINESEp38 MAPK是一种应激激活的丝/苏氨酸蛋白激酶,属于MAPK超家族;目前已发现p38 MAPK家族成员有p38(α)、p38 β、p38 γ、p38 δ,分子量约38~40kD....
- 李志杰
- 关键词：蛋白激酶蛋白相互作用信号通路
- 文献传递
