李冉辉
- 作品数：42 被引量：56H指数：4
- 供职机构：南华大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>
- 原核表达载体pET30a／ATRX-C2193-2492的构建与诱导表达
- 2016年
- [目的]构建大鼠ATRX抗原端氨基酸序列的原核表达载体,为进一步制备ATRX多克隆抗体以及探讨ATRX蛋白在HPV16致宫颈癌中的作用奠定基础。[方法]以IF-GFP-ATRX质粒为模板,PCR扩增获得ATRX-C_(2193-2492)基因片段,并克隆至p ET30a(+)空载体上,转化E.coli BL21感受态细胞,构建原核表达载体p ET30a/ATRX-C_(2193-2492),经PCR、双酶切以及测序鉴定。将构建好的质粒p ET30a/ATRX-C_(2193-2492)转化,经IPTG诱导表达,利用镍离子亲和层析法纯化6His-ATRX-C_(2193-2492)蛋白。[结果]成功获得900 bp的ATRX-C_(2193-2492)基因片段并构建了原核表达载体p ET30a/ATRX-C_(2193-2492),且该载体能在E.coli中诱导表达分子量约34 k Da蛋白产物。[结论]原核表达载体p ET30a/ATRX-C_(2193-2492)能成功诱导表达分子量约34 k Da的ATRX-C_(2193-2492)蛋白,该蛋白纯化产物能为后续ATRX多克隆抗体的制备提供实验基础。
- 唐双阳刘志敏李冉辉申海艳赵兰华蔡恒玲万艳平
- 关键词：ATRX原核表达载体蛋白
- 生殖支原体脂质相关膜蛋白通过c-Src/ROS/Nrf2途径诱导胎盘滋养层细胞表达血红素氧合酶
- 2015年
- 目的探讨生殖支原体脂质相关膜蛋白（LAMPs）诱导胎盘滋养层细胞表达血红素氧合酶-1（HO-1）的分子机制。方法用0.5~5μg/m L生殖支原体LAMPs处理体外培养的胎盘滋养层细胞4~12 h,采用实时定量PCR和Western blot法分别检测HO-1 mRNA和蛋白的表达以及核因子相关因子-2（Nrf2）的核转位;比色法观察HO-1的酶活性;2＇,7＇-二氯二氢荧光黄二乙酸酯（H2DCFDA）检测活性氧产生。分别采用酪氨酸激酶c-Src抑制剂PP1、活性氧抑制剂N-乙酰半胱氨酸（NAC）和Nrf2 siRNA干预,观察HO-1的表达情况。结果生殖支原体LAMPs能诱导滋养层细胞HO-1 mRNA和蛋白的表达,上调其酶活性。同时,LAMPs也能诱导其产生活性氧,并促使Nrf2核转位。PP1和NAC预处理后,可明显降低HO-1的表达水平以及细胞核内Nrf2含量。采用Nrf2 siRNA转染后,HO-1的表达显著减少。结论生殖支原体LAMPs通过c-Src/ROS/Nrf2途径诱导滋养层细胞表达HO-1。
- 何璐游晓星李国华曾焱华李冉辉朱翠明余敏君陈忠东吴移谋
- 关键词：生殖支原体脂质相关膜蛋白血红素氧合酶-1滋养层细胞
- 穿透支原体铁蛋白抗氧化活性研究
- 目的 探索穿透支原体铁蛋白(Ferritin)的抗氧化功能及其作用机制.方法 利用生物信息学方法分析穿透支原体Ferritin蛋白的亲水性、二级结构和三级结构等生物学特征.设计特定引物PCR扩增目的片段,并将其连接到pm...
- 李冉辉曾焱华游晓星
- 关键词：穿透支原体铁蛋白抗氧化
- 香港海鸥菌OsmC蛋白的原核表达、纯化及活性研究
- 2015年
- [目的]原核表达纯化香港海鸥菌OsmC蛋白,并检测其抗氧化功能。[方法]通过PCR法扩增香港海鸥菌OsmC基因,将目的片段进行双酶切后连接到pET28a,构建重组质粒pET28a-OsmC并转化大肠杆菌,诱导OsmC蛋白表达,亲和层析纯化目的蛋白并利用氧化铁二甲酚橙实验检测其过氧化物酶活性。[结果]克隆得到全长基因,大小为441bp,编码147个氨基酸。得到重组表达质粒pET28a-OsmC,表达并纯化获得重组OsmC蛋白,OsmC蛋白能够降解H2O2。[结论]Osm C蛋白具有过氧化物酶活性,为研究香港海鸥菌的抗氧化机制奠定了基础。
- 黄海游晓星李冉辉
- 关键词：香港海鸥菌克隆
- 支原体脂肽经EGFR/MMP-9诱导气道上皮细胞分泌MUC5AC被引量：1
- 2015年
- 目的观察支原体巨噬细胞活化脂肽-2（MALP-2）诱导人气道上皮细胞分泌粘蛋白MUC5AC的分子机制。方法体外培养人气道上皮细胞NCI-H292,分别采用0、0.1、1.0和5.0μg/m L MALP-2刺激NCI-H292细胞24 h,采用酶联免疫吸附测定（ELISA）检测培养上清中MUC5AC和基质金属蛋白酶9（MMP-9）的含量;Western blot检测表皮生长因子受体（EGFR）磷酸化水平。同时采用EGFR抑制剂AG-1478或MMP-9抑制剂（MMP-9 Inhibitor I）处理细胞,观察其对MUC5AC分泌的影响。结果 NCI-H 292细胞未刺激时,MUC 5 AC以及MMP-9分泌水平极低。当给予0.1~5μg/m L MALP-2作用18 h后,MUC 5 AC的分泌水平显著增高。此外,5μg/m L MALP-2作用NCI-H 292细胞1 h后可诱导EGFR磷酸化。采用AG-1478预处理细胞1 h后,MMP-9及MUC 5 AC分泌水平明显减少,同时,采用10 nmol/L MMP-9抑制剂处理后也能下调MUC 5 AC水平。结论支原体MALP-2经EGFR/MMP-9诱导气道上皮细胞分泌MUC5AC。
- 文道林余敏君游晓星李冉辉陈列松朱翠明李媛媛曾焱华
- 关键词：MUC
- 解脲支原体Ferritin基因的原核表达及抗氧化功能研究被引量：5
- 2015年
- 目的构建解脲支原体Ferritin蛋白的原核表达载体,纯化重组Ferritin蛋白并测定其抗氧化功能,为解析解脲支原体的抗氧化机制奠定基础。方法利用荧光定量PCR检测氧化胁迫下Ferritin基因的相对表达量。根据Ferritin基因序列,设计引物,PCR扩增Ferritin全长片段。将解脲支原体Ferritin基因中编码色氨酸的密码子TGA突变为TGG,将突变后的Ferritin基因连接到原核表达载pET28a得到重组质粒pET28a-Ferritin,转化大肠埃希菌BL21(DE3)得到重组菌BL/pET28a-Ferritin,IPTG诱导Ferritin蛋白表达并用镍柱亲和层析进行纯化。体外试验测定Ferritin蛋白的Fe2+结合特性,亚铁氧化酶活性和抗氧化能力。结果 Ferritin基因在H2O2或者CHP胁迫表达上调。成功构建能够表达全长Ferritin蛋白的重组质粒pET28a-Ferritin。诱导并纯化得到理论分子质量单位为22ku的重组Ferritin蛋白。结合Fe2+后,Ferritin蛋白的内源荧光值降低。Ferritin具有Fe2+氧化酶活性,能催化Fe2+生成Fe3+,并能够减少氧自由基的产生。结论解脲支原体Ferritin基因在氧化胁迫条件下表达上调,其表达产物具有亚铁氧化酶活性和抗氧化功能。
- 代国知李冉辉游晓星陈虹亮吴移谋
- 关键词：解脲支原体铁蛋白活性氧
- 基础医学专业研究生培养中存在的问题及对策被引量：4
- 2014年
- 基础医学研究生教育是我国医学专业培养高级科研人才的主要方式。经过多年的教育实践,我国无论是在研究生培养的数量还是质量上都取得了一定的成绩,但目前针对基础医学专业研究生培养方面还存在明显的不足。本文对普通医学院校基础医学专业研究生培养中存在的问题进行了剖析,并提出基础医学研究生教育应控制招生规模,从培养方式和管理体制方面进行改革和完善,最终培养出高素质的基础医学创新人才。
- 游晓星李冉辉朱翠明李忠玉吴移谋
- 关键词：研究生教育
- 人型支原体毒力相关蛋白D的原核表达与纯化被引量：1
- 2016年
- 目的原核表达并纯化人型支原体(Mycoplasma hominis,Mh)毒力相关蛋白D(Virulence-associated protein,VapD)。方法从GenBank查找Mh VapD基因序列,设计引物并进行优化,合成VapD片段并以此为模板,PCR扩增VapD,然后用EcoRI和XhoI进行双酶切并连接表达载体pET28a,构建原核重组质粒pET28a-VapD,转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导目的蛋白表达,重组产物经镍柱亲和层析纯化。结果合成的VapD基因全长为303bp,连接原核表达载体pET28a得到重组质粒pET28a-VapD。重组质粒转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达分子质量标准为15ku的重组Mh VapD蛋白,与理论分子质量大小相符合。VapD蛋白具有可溶性,纯化后的目的蛋白电泳检测为单一条带。结论成功构建原核重组载体pET28a-VapD并纯化获得VapD蛋白,为进一步研究VapD蛋白的致病机制奠定了基础。
- 董巍檑马艳刘杰刘良专李冉辉何璐
- 关键词：人型支原体克隆蛋白纯化
- 鲍曼不动杆菌铁蛋白的抗氧化功能研究被引量：6
- 2014年
- 【目的】克隆鲍曼不动杆菌铁蛋白(Abferritin)基因,并研究其抗氧化功能。【方法】荧光定量PCR检测氧化应激下Abferritin基因的表达量,并将其基因克隆到表达载体p ET28a以构建重组质粒p ET28a-Abferritin,转化大肠杆菌BL21(DE3)得到重组菌BL/p ET28aAbferritin,IPTG诱导目的蛋白表达并利用镍柱亲和层析纯化该蛋白。比色法测定Abferritin蛋白的Fe2+氧化酶活性,自由基清除实验测定其抗氧化功能。菌落计数法观察重组大肠杆菌在H2O2应激条件下的存活率。【结果】Abferritin基因在氧化应激下表达增高。重组质粒在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达,通过Ni2+亲和层析纯化获得了Abferritin蛋白。该蛋白具有Fe2+氧化酶活性,能有效减少氧自由基的形成及提高大肠杆菌抵抗氧化应激的能力。【结论】氧化应激能诱导Abferritin基因表达上调,且该蛋白具有亚铁氧化酶活性和抗氧化功能。
- 谭潇李冉辉游晓星蒋传好黄泽智
- 关键词：鲍曼不动杆菌铁蛋白抗氧化活性
- 思想政治教育对基础医学研究生培养作用的思考
- 2014年
- 基础医学研究生教育肩负着医学发展的重任。随着我国医学模式的转变,基础医学研究生的思想和行为都受到了极大的影响。因此加强此类研究生的思想政治教育,不但能提高研究生的思想道德素质和价值导向,同时也能正确引导研究生在今后的医疗卫生事业以及科研工作的实践活动,从而有利于医学事业的健康发展。
- 游晓星李冉辉朱翠明李忠玉吴移谋
- 关键词：思想政治教育
