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VEGF165和SDF-1双基因共表达腺病毒载体的构建及其在大鼠缺血脑组织中的表达被引量：1: 2014年; 目的构建血管内皮生长因子（VEGF）165与基质细胞衍生因子（SDF）-1双基因共表达腺病毒载体Ad5-VEGF165-IRES．SDF-1，并观察其在缺血大鼠脑组织中的共表达情况。方法将VEGF165和SDF-1基因通过内部核糖体进入位点（IRES）进行定向连接，以同源重组的形式构建双基因共表达重组穿梭质粒pDC316-VEGF165-IRES-SDF-1，将其与骨架质粒pBHGlox-E1以脂质体转染HEK293细胞，获得有感染能力的重组腺病毒颗粒，经多轮扩增后获得纯化的腺病毒载体Ad5-VEGF165．IRES．SDF．1；以线栓法构建大鼠大脑中动脉栓塞（MCAO）模型，并以立体定向微量注射的方法将构建的病毒载体注入大鼠侧脑室，以RT-PCR和免疫印迹法观察其介导VEGF165和SDF-1基因在缺血脑组织中的共表达情况。结果PCR、双酶切和基因测序等结果显示，重组质粒和腺病毒载体构建正确，并能够介导VEGF165和SDF-1两种基因在缺血的大鼠脑组织内共表达。结论成功构建了携带VEGF165和SDF-1双基因的腺病毒载体Ad5一VEGFl65一IRES-SDF-1，Ad5-VEGF165-IRES-SDF-1可以介导VEGF165和SDF-1双基因在缺血大鼠脑组织内共表达。; 司俊臣扈国杰朱慧栗世如孟庆海姚维成丰育功栗世方; 关键词：血管内皮生长因子165 基质细胞衍生因子-1 内部核糖体进入位点

rAAV1介导血管内皮生长因子基因表达对大鼠脑缺血新生血管形成及神经功能恢复的影响被引量：4: 2009年; 目的探讨血管内皮生长因子（VEGF）基因治疗对大鼠脑缺血的治疗作用及其机制。方法成年雄性SD大鼠64只，分为对照组和治疗组，每组均32只，采用立体定向微量注射的方法将相同滴度的rAAV1-VEGF（治疗组）和rAAV1-LacZ（对照组）注人大鼠侧脑室，21d后制作大脑中动脉区缺血再灌注（MCAO）模型，于不同时间点对各组动物进行神经损伤程度评分（NSS），以免疫定量分析法检测各组大鼠脑组织中VEGF的表达量、以免疫组织化学染色检测脑内VEGF的表达部位和微血管密度（MVD），并行vWF和BrdU的免疫荧光双重标记，采用尾静脉注射FITC-葡聚糖法行脑微血管灌注成像，并对各组缺血半暗带区域的脑微血管灌注情况进行评估。结果（1）治疗组的NSS评分有明显改善；（2）VEGF可在脑内多个结构表达，其VEGF表达量是对照组的27倍；（3）治疗组MVD为157±13、对照组为89±9（P〈0．05），且治疗组半暗带区域可见大量BrdU阳性的内皮细胞，而对照组未见；（4）缺血半暗带区域微血管显影面积为（152617±13076）μm^2／mm^2，对照组为（91658±6577）μm^2／mm^2（P〈0．05）。结论rAAV1-VEGF可介导VEGF在大脑内表达，并对脑缺血大鼠神经功能的恢复具有促进作用，其治疗机制可能与VEGF促进新生血管形成并改善脑组织供血有关。; 栗世方孟庆海姚维成扈国杰李桂林李照建魏俊吉薄勇力张子衡王任直; 关键词：脑缺血重组腺相关病毒血管内皮生长因子新生血管形成

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扈国杰

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