张雪雁
- 作品数：16 被引量：19H指数：2
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- EB病毒LMP1 CCT蛋白特异性结合短肽的筛选
- 2006年
- 目的筛选能与EBVLMP1CCT蛋白高效结合的短肽。方法利用亲和层析和酶切的方法纯化CCT蛋白,并用CCT蛋白筛选噬菌体12肽库。通过夹心ELISA方法分析噬菌体克隆与CCT蛋白的亲和力。通过硝酸纤维膜斑点印迹法进行阳性克隆鉴定。并对阳性克隆进行测序分析。结果对肽库进行3轮筛选后,噬菌体克隆具有良好的富集效果。ELISA方法提示筛选出来的噬菌体克隆能与CCT蛋白高效结合。硝酸纤维膜斑点印迹法证实阳性率达到100%,测序结果显示噬菌体上的短肽有共同序列:IQMPPKWPWPAA。结论从噬菌体肽库中筛选到的噬菌体短肽IQMPPKWPWPAA为探讨LMP1致瘤机理、开发抗鼻咽癌短肽药物及基因疫苗奠定了实验基础。
- 余琳张雪雁杨英马桂璋
- 关键词：LMP1
- p38γMAPK蛋白在直肠癌组织中的表达及临床意义
- 目的:探讨人直肠癌中p38γMAPK蛋白的表达及其临床意义。方法:应用免疫组织化学法检测54例直肠癌组织、近癌旁组织、癌周正常组织和15例腺瘤息肉组织中p38γ蛋白表达情况。结果:p38γ蛋白的表达主要定位于胞质中,仅少...
- 张雪雁曾山崎曹杰杜洪肖焕擎朱郇悯麦璟莹
- 关键词：直肠癌免疫组织化学
- 文献传递
- 弓形虫SAG1基因成熟蛋白编码区在大肠杆菌中的表达被引量：1
- 2004年
- 目的:克隆并表达弓形虫SAG1基因成熟蛋白编码区片段,为下一步表达蛋白纯化奠定基础。 方法:将弓形虫SAG1基因成熟蛋白编码区片段克隆入高效融合表达载体pET32α,转化大肠杆菌BL21(DE3), 37℃、IPTG诱导表达,SDS PAGE分析表达产物。结果:成功构建重组质粒pET32α SAG1,经诱导后表达出含 外源基因的融合蛋白,SDS PAGE分析表达产物分子质量约44kDa。结论:弓形虫SAG1成熟蛋白编码区在原 核表达系统pET32α/BL21(DE3)中获得成功表达,为下一步表达蛋白纯化提供试验依据。
- 马长玲胡旭初张雪雁沈浩贤李小敏陈新宇陈代雄
- 关键词：弓形虫SAG1基因大肠杆菌
- EB病毒LMP1-CTAR2结构域的原核表达及蛋白质纯化被引量：1
- 2010年
- 目的:构建LMP1-CTAR2原核表达载体,纯化LMP1羧基端活化区2(CTAR2)蛋白。方法:通过RT-PCR技术从B95-8细胞中扩增EBVLMP1 CTAR2 cDNA,克隆至PGEM-T载体后测序。运用亚克隆技术构建PGEX-6P-3-CTAR2重组表达载体。用SDS-PAGE与western blot对表达产物进行鉴定,利用Sepharose 4B亲和层析柱对表达产物进行分离和纯化。结果:PCR扩增出225 bp的基因片段,测序结果与已知的LMP1 CTAR2序列吻合。成功构建PGEX-6P-3-CTAR2原核表达载体,western blot分析表明表达产物能与抗LMP1单克隆抗体特异结合。成功分离出Mr约37000的PGEX-6P-3-CTAR2融合蛋白,纯化出Mr约15000的LMP1 CTAR2蛋白。结论:成功获得EBV LMP1 CTAR2蛋白,可用于噬菌体筛库和CTAR2致瘤机制研究。
- 余琳张雪雁李孜
- 关键词：EPSTEIN-BARR病毒原核表达蛋白质纯化
- EB病毒LMP1与细胞信号转导被引量：1
- 2003年
- EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)是Epstein和Barr于1964年最先从非洲恶性淋巴瘤组织培养中发现的一种病毒,在分类学上将EBV归入疱疹病毒γ亚科嗜淋巴细胞病毒属的DNA病毒.
- 张雪雁马桂璋
- 关键词：EBV信号转导
- EB病毒潜伏膜蛋白1羧基端活化区域2蛋白特异性结合短肽的筛选
- 2011年
- 目的 利用噬菌体12肽库筛选能与EB病毒潜伏膜蛋白1（LMPl）羧基端活化区域（CTAR）2蛋白特异性结合的短肽.方法 用纯化的CTAR2蛋白筛选噬菌体12肽库.通过夹心ELISA方法分析噬菌体克隆与CTAR2蛋白的亲和力.利用硝酸纤维膜斑点印迹法进行阳性克隆鉴定,并对阳性克隆进行测序及序列分析.结果 CTAR2蛋白对噬菌体12肽库进行3轮筛选,第3轮的产率是第1轮的143倍[（3.0×10^-6）/（2.1×10^-8）],噬菌体克隆得到较好的富集.ELISA方法提示筛选出来的噬菌体克隆能与CTAR2蛋白高效结合.硝酸纤维膜斑点印迹法证实阳性率达到100％.测序结果显示噬菌体上的短肽有共同序列：GLKHHSPGLLLY.结论 筛选出与CTAR2蛋白特异性结合的短肽序列GLKHHSPGLLLY,为研究LMP1致瘤机制和开发拮抗LMP1蛋白的小分子短肽类药物提供实验依据.
- 张雪雁杨英余琳
- 关键词：EB病毒潜伏膜蛋白1噬菌体随机肽库
- 结肠癌患者CX_3CL_1的表达情况与术后预后的相关性分析被引量：1
- 2010年
- 目的探讨结肠癌组织中CX3CL1的表达情况、临床意义及其与术后预后分析的相关性。方法应用免疫组织化学法检测104例结肠癌病人的石蜡切片中CX3CL1的表达情况,用χ2检验来分析CX3CL1的临床意义,用Kaplan-Meier方法及建立Cox回归模型来分析CX3CL1表达情况与结肠癌术后预后的相关性。结果 CX3CL1高表达组占所有结肠癌病人的61.54%。CX3CL1的表达与年龄、性别、肿瘤大小、肿瘤位置、Dukes分期、组织分化程度无明显相关(P>0.05),但与淋巴结转移相关(P<0.05)。CX3CL1高表达组(n=64)比低表达组(n=40)有更长的生存期(P=0.0096)。Cox回归模型分析表明,CX3CL1表达可作为判断结肠癌患者术后生存和预后的独立指标(RR=2.4;P=0.0135)。结论 CX3CL1可作为结肠癌的独立预后因素,结肠癌中CX3CL1高表达提示更好的预后。
- 曾山崎曹杰张雪雁曾军陈金培张伟健刘宏杰
- 关键词：CX3CL1结肠癌预后因素
- EB病毒LMP1蛋白CTAR23结构域的原核表达及纯化被引量：1
- 2004年
- 目的获得纯化的LMP1CTAR23结构域蛋白。方法用RT-PCR方法从B95-8细胞中扩增EBVLMP1CTAR23结构域的cDNA,将其克隆至PGEM-Teasy载体后进行测序鉴定。亚克隆至原核表达载体PGEX-6P-3,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导重组菌株表达。用SDS-PAGE与Westernblot对表达产物进行鉴定,用Sepharose4B亲和层析柱对表达产物进行纯化,PreScissionProteas酶对融合蛋白进行解离。结果扩增的LMP1CTAR23长度为357bp,测序结果与已知序列吻合。获得PGEX-6P-3-CTAR23原核表达菌株,Westernblot表明重组蛋白能被LMP1单克隆抗体特异结合。获得约42000u的PGEX-6P-3-CTAR23融合蛋白,分离纯化出约13000u的LMP1CTAR23蛋白。结论成功获得EBVLMP1CTAR23蛋白,为研究LMP1致瘤机制,研制生物抗癌药物奠定基础。
- 张雪雁杨英马桂璋
- 关键词：EB病毒LMP1原核表达
- 组织型转谷氨酰胺酶与人非小细胞肺癌细胞侵袭力的关系及其机制
- 2013年
- 目的:研究组织型转谷氨酰胺酶(tTG)表达与人非小细胞肺癌(NSCLC)细胞株A549和PAα侵袭力的关系,及其与表皮生长因子受体(EGFR)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)等肿瘤侵袭相关基因之间的关系。方法:Transwell法检测细胞株A549和PAα的侵袭力;RT-PCR法、Real-Time PCR法及Western blot检测A549和PAα细胞株中tTG、EGFR和MMP-2的转录和表达水平,观察使用tTG或EGFR抑制剂后PAα细胞中tTG、EGFR、p-EGFR和MMP-2的表达水平变化。结果:PAα细胞株的侵袭能力为A549的165.3倍(P<0.05)。PAα细胞株的tTG、EGFR转录水平为A549细胞株的650.68(P<0.05)和34.4(P<0.001)倍。PAα细胞株的tTG、p-EGFR表达水平高于A549细胞株,MMP-2的转录水平在A549和PAα细胞株之间的差异没有统计学意义(P>0.1),但PAα的MMP-2表达水平高于A549。结论:PAα相对于A549具有高的侵袭力;其机制可能与EGFR的高表达和磷酸化、tTG和MMP-2的高表达有关;tTG可调控MMP-2的水平但它本身不受EGFR信号通路的调控。
- 朱郇悯汤娟娟黎银燕刘嘉熙韦雪梅王飞陈晓湘张雪雁李孜
- 关键词：组织型转谷氨酰胺酶侵袭力表皮生长因子受体
- EB病毒LMP1 CTAR23蛋白特异性结合短肽的筛选被引量：2
- 2010年
- 目的利用噬菌体12肽库筛选能与EB病毒(EBV)LMP1 CTAR23蛋白高效结合的短肽。方法利用亲和层析柱加酶切的方法纯化CTAR23蛋白,并用其筛选噬菌体12肽库。通过夹心ELISA法分析噬菌体克隆与CTAR23蛋白的亲和力。通过硝酸纤维膜斑点印迹法进行阳性克隆鉴定,并对阳性克隆进行测序及序列分析。结果对12肽库进行3轮筛选后,噬菌体克隆具有良好的富集效果。ELISA提示筛选出来的噬菌体克隆能与CTAR23蛋白高效结合。硝酸纤维膜斑点印迹法证实阳性率达到100%,测序结果显示噬菌体上的短肽有共同序列HVSLHKHYPTAS。结论噬菌体短肽HVSLHKHYPTAS为研究LMP1致瘤机理、开发拮抗LMP1蛋白的小分子短肽类药物奠定坚实的基础。
- 余琳张雪雁杨英
- 关键词：EB病毒潜伏膜蛋白1噬菌体随机肽库
