张志芳 作品数:297 被引量:933 H指数:16 供职机构: 中国农业科学院生物技术研究所 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 国家高技术研究发展计划 国家重点基础研究发展计划 更多>> 相关领域: 农业科学 生物学 医药卫生 自动化与计算机技术 更多>>
病毒感染条件下家蚕ORC的表达变化 2010年 DNA复制原点识别复合体(origin recognition complex,ORC)识别并结合在DNA复制原点上,募集其他相关的复制因子组成复制前复合体(pre-replication complex,pre-RC)。ORC各个独立的亚基还具有非复制相关的功能。利用荧光定量PCR技术监测感染核型多角体病毒(BmNPV)后,家蚕五龄起蚕脂肪体组织中ORC各个亚基的表达的变化。在感染早期,ORC的拷贝数有所下降,随后表达量增加,并出现两个峰值。病毒感染36 h后,ORC各个亚基的表达量均下降。家蚕感染病毒后,脂肪体组织中ORC的表达趋势与病毒DNA复制的趋势相近,推测BmORC参与了病毒DNA的复制。 杨慧鹏 罗素娟 李轶女 张志芳 沈桂芳 张耀洲关键词:家蚕 ORC 实时荧光定量PCR 家蚕核型多角体病毒 家蚕无鳞毛品种培育方法研究 2011年 介绍了家蚕无鳞毛品种培育的专利技术,并以成虫翅无鳞毛突变品系P33和现行生产用蚕品种芙蓉、7532为亲本,采用杂交和回交等传统的育种技术,培育成无鳞毛蚕品种"新芙"和"日照"。家蚕无鳞毛蚕品种的培育和推广,有利于改善制种作业环境,保护蚕种产业人员的健康和有利于家蚕微粒子病的防控。 沈兴家 赵巧玲 唐顺明 张志芳关键词:家蚕 品种选育 成虫 鸡λ3干扰素、其突变体及其表达方法和应用 本发明公开了一种鸡λ3干扰素、其突变体及其表达方法和应用。本发明公开了鸡λ3干扰素突变体,其氨基酸序列为SEQ ID NO.3所示。本发明将鸡λ3干扰素突变体第150位氨基酸由谷氨酸突变成赖氨酸得到SEQ ID NO.5... 张志芳 李轶女 胡小元 赵泽 易咏竹 邵丽萍 杨鑫 刘兴健 赵璐璐 阿斯兰·梅赫布人工饲料组成对BmNPV-Bm表达系统外源基因表达活性的影响 被引量:3 2003年 为进一步提高家蚕杆状病毒—家蚕 (BmNPV Bm)表达系统的表达活性 ,通过改变人工饲料中桑叶粉、大豆粉、玉米粉和水分的添加量 ,探讨了人工饲料的营养组成对BmNPV Bm表达系统外源植酸酶基因表达活性的影响。在大豆粉含量相同的条件下 ,植酸酶基因表达活性随桑叶粉含量的增加而降低 ,桑叶粉含量为 10 %时表达量最高 ;在桑叶粉含量相同的情况下 ,大豆粉含量为 35 %时表达量最高 ;饲料含水量以添加干物重的 1 9倍时表达量最高。外源基因的表达活性与蚕体重的生长表现出一致的趋势。 尚金燕 马芳 王厚伟 崔为正 张志芳关键词:人工饲料 营养组成 外源基因 表达活性 杆状病毒表达系统 植酸酶基因 动物α干扰素和γ干扰素的表达方法 本发明公开了一种动物α干扰素和γ干扰素的表达方法,包括:将人或同种动物的α干扰素和γ干扰素在昆虫杆状病毒生物反应器中进行联合表达或共表达。本发明将人或同种动物的α干扰素基因和γ干扰素基因在同一昆虫杆状病毒生物反应器中进行... 张志芳 李金祥 李轶女 易咏竹 刘兴健 张金卫 丁农 钟鲁龙 王国增 沈桂芳来源于Pyrococcus furiosus的耐高温α-淀粉酶基因在衣藻叶绿体中的表达 被引量:6 2006年 来源于Pyrococcusfuriosus的耐高温α-淀粉酶是一种重要的酒精工业用酶,在植物中表达耐高温α-淀粉酶可以大大降低用植物秸秆生产酒精的成本。选择衣藻叶绿体基因组同源片段clpP-trnL-petB-chlL-rpl23-rpl2和壮观霉素抗性基因,构建了来源于Pyrococcusfuriosus的耐高温α-淀粉酶基因的衣藻叶绿体表达载体p64A。通过基因枪将其导入衣藻叶绿体中,经壮观霉素抗性(100mg/L)筛选,获得了9个抗性衣藻转化子。转化子经过抗性继代筛选后,经PCR、Southernblot检测分析及暗培养,证实耐高温α-淀粉酶基因已整合到衣藻叶绿体基因组中并得到表达。酶活性检测表明,转基因衣藻表达产物具有耐高温α-淀粉酶活性,每克鲜重衣藻最高达77.5u。实验结果证明在植物叶绿体中表达工业酶制剂是可行的。 杨宗岐 李轶女 张志芳 王勇 沈桂芳关键词:PYROCOCCUS 耐高温Α-淀粉酶 衣藻 固氮斯氏假单胞菌A1501 rpoN基因的表达方法 本发明公开了一种固氮斯氏假单胞菌A1501 <I>rpoN</I>基因的表达方法,该表达方法包括:构建<I>rpoN</I>基因的表达盒;将所构建的<I>rpoN</I>基因的表达盒插入到衣藻叶绿体表达载体上的衣藻叶绿体... 刘国宪 李轶女 张志芳 沈桂芳 程奇文献传递 Geobacillus sp.POT5 α-淀粉酶基因的克隆及表达 被引量:3 2007年 从高温环境土壤中分离到1株能在75℃生长并产生α-淀粉酶的菌株(POT5),扩增了其16Sr DNA核苷酸序列,序列分析表明该菌属于Geobacillus属.根据该属全基因序列测定数据中推定的α-淀粉酶基因,利用PCR方法从G.sp.POT5基因组中扩增得到该菌α-淀粉酶基因(amyP).序列分析表明该基因全长1.545 kb、G+C含量51.33%,编码514个氨基酸.构建重组表达质粒pET22b(+)-amyP,转化Escherichia coliBL21系统,表达产物经SDS-PAGE分析、活性染色及淀粉酶活力分析,表明amyP基因得到了表达,且产物具有生物学活性. 杨灵 侯瑛 余霖霖 刘国生 张志芳关键词:GEOBACILLUS 淀粉酶 基因表达 鸡α干扰素在家蚕中的表达及抗病毒活性测定 被引量:3 2014年 鸡α干扰素在防御病毒感染及治疗病毒性疾病中起着重要的作用。旨在利用家蚕杆状病毒表达系统研制有活性的鸡α干扰素。首先对鸡α干扰素基因(ChIFN-α)进行了优化与合成,将其克隆到杆状病毒转移载体pVL1393中,与ORF1629缺损的亲本病毒BmBcmid共转染,纯化重组病毒,再感染家蚕幼虫,收集蚕血淋巴以检测α干扰素基因的表达。Western blot分析结果显示,成功表达出分子量约为19 kD的鸡α干扰素。采用细胞病变抑制法在Vero-VSV*GFP系统中测定表达产物的抗病毒活性。所的表达的鸡α干扰素具有明显的抗病毒活性,活性不低于3.2×105 U/mL。利用杆状病毒载体系统成功地表达了具有抗病毒活性的鸡α干扰素的成熟蛋白,为开发廉价高效的鸡干扰素生物制剂奠定了物质基础。 李田田 杨灵 易咏竹 沈桂芳 张志芳 李轶女关键词:家蚕 杆状病毒表达系统 抗病毒活性 家蚕核多角体病毒DNA复制起始点hr3的结构功能 被引量:13 1995年 从家蚕核多角体病毒(BmNPV)基因组克隆得到含同源重复序列3(hr3)的Pst I K片断。证明含hr3的质粒DNA以野生型BmNPV为辅助病毒,在BmN细胞中能够复制,表明hr3是BmNPV的DNA复制起始点。BmNPV的hr3以野生型苜蓿尺蠖核多角体病毒(AcNPV)为辅助病毒转染Sf9细胞亦得到复制,说明与AcNPV复制有关的因子亦能作用于BmNPV的复制起始点。测定了hr3的全序列,并和AcNPV的hr序列作了比较,对hr可能采取的进化方式作了讨论。 张志芳 张颖 吕鸿声 李载平 吴祥甫关键词:家蚕 核多角体病毒 DNA