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二硫苏糖醇提取纯化Cavl.2钙通道片段CT3蛋白被引量：2: 2015年; 目的探讨二硫苏糖醇(DTT)有助于Pre Scission蛋白酶切除重组蛋白GST-CT3标签GST的方法。方法在大肠埃希菌BL21中转化入p GEX-6P-3/CT3重组质粒并诱导其表达,用B-PER提取纯化重组蛋白GST-CT3,在10 mmol/L DTT存在的情况下Pre Scission蛋白酶切除GST标签得到高浓度的CT3蛋白,进行SDS-PAGE电泳鉴定CT3蛋白。结果不含DTT情况下,Pre Scission蛋白酶很难切除重组蛋白GST-CT3的标签蛋白GST,而在10 mmol/L DTT存在的情况下,Pre Scission蛋白酶能够切除重组蛋白GST-CT3的标签蛋白GST,得到高浓度的CT3蛋白。结论 10 mmol/L DTT有助于Pre Scission蛋白酶切除重组蛋白GST-CT3的标签蛋白GST,得到高浓度的CT3蛋白。; 孙宇封瑞杨磊毛楠胡慧媛孙雪菲郝丽英; 关键词：重组蛋白心肌细胞钙通道

Ca_v1.2钙通道GST-CT1蛋白片段与胞浆钙调蛋白提取纯化的比较被引量：3: 2016年; 目的对比分析心肌Ca_V1.2钙通道片段GST-CT1融合蛋白与胞浆钙调蛋白(calmodulin,CaM)提取与纯化方法的异同。方法将pGEX-6p-3/CT1和pGEX-6p-3/CaM重组质粒转入E.coli BL21菌株,筛选得到转化成功的菌株并用IPTG诱导其表达,GS-4B beads分离纯化,SDS-PAGE凝胶电泳鉴定目的蛋白及其相对纯度,Pull down assay方法鉴定GST-CT1融合蛋白和CaM蛋白的生物学活性。结果采用超声破碎法,应用N-laurylsarcosine和Triton X-100处理后提取的GST-CT1融合蛋白浓度和纯度显著高于未用两者处理的对照组,而N-laurylsarcosine和Triton X-100对胞浆蛋白CaM的提取和纯化无明显影响。结论细胞膜通道蛋白GST-CT1的提取和纯化方法与胞浆蛋白Ca M存在明显差别。; 晏珊封瑞杨磊孙宇王千慧郭凤赵美眯孙雪菲郝丽英; 关键词：钙通道钙调蛋白

心肌L型钙通道钙依赖性调节研究新进展被引量：6: 2013年; L型钙通道(L-type calcium channel,LTCC)是钙离子(Ca2+)进入细胞内的主要途径,它是心肌中重要的离子通道,参与心脏的收缩与舒张。LTCC是由α1、α2/δ、β、γ五个亚单位构成的复合物,并且由多基因编码。LTCC的功能受Ca2+、CaM、CaBP1、Calpastatin以及CaMKII等蛋白质的调节,且其具有钙离子依赖性。近年来新的研究表明LTCC也可以进行自我调节。LTCC失调导致多种严重的心脏疾病,因此了解其调节机制具有重要的意义。本文结合了我们实验室和国内外关于心肌LTCC的钙依赖性调节的研究新进展做一下概述。; 孙宇胡慧媛郝丽英; 关键词：心肌 L型钙通道钙离子

变性再复性方法提取高纯度Cav1.2片段GST-CT1及其生物活性的鉴定被引量：3: 2014年; 目的探寻诱导谷胱甘肽转移酶(GST)与Cav1.2钙通道片段CT1重组的易形成包涵体的大分子融合蛋白的提取与纯化的方法。方法在E.coli BL21中转化入p GEX-6p-3/CT1重组质粒并诱导表达,采用GST包涵体变性复性试剂盒和非离子去污剂B-PER分离纯化GST-CT1融合蛋白,用Pull down assay方法鉴定GST-CT1融合蛋白及其生物活性。结果应用GST包涵体变性复性试剂盒和非离子去污剂B-PER能够分离得到高纯度的易形成包涵体的GST-CT1融合蛋白,且分离纯化的GST-CT1融合蛋白具有与钙调蛋白结合的生物活性。结论操作简易的GST包涵体变性复性法能够针对易形成包涵体的GST-CT1融合蛋白进行分离和纯化,且得到的蛋白具有生物学活性。; 孙宇封瑞孙威胡慧媛郝丽英; 关键词：包涵体钙离子通道

阴道涂片法鉴定大鼠生理周期的应用评价被引量：18: 2014年; 目的通过检测大鼠血液中雌二醇含量确定阴道涂片方法的可靠性。方法对20只雌性大鼠通过阴道涂片方法分为动情间期组(n=5)、动情前期组(n=4)、动情期组(n=6)、动情后期组(n=5),经腹主动脉取血,采用化学发光免疫分析法检测血清中雌二醇的含量。结果在动情间期,阴道涂片以白细胞为主,雌二醇含量小于125 pmol/L;在动情前期,以有核上皮细胞为主,雌二醇含量最小值为125 pmol/L;在动情期,以角化上皮细胞为主,雌二醇含量仅有一点大于125 pmol/L;在动情后期,有核上皮细胞、角化上皮细胞及白细胞均可见,雌二醇含量小于125 pmol/L;符合雌二醇在生理周期各阶段的变化。结论可选择雌二醇含量较低的动情后期和动情间期雌性大鼠进行实验,采用阴道涂片方法鉴定雌性大鼠生理周期基本可靠。; 印丹丹封瑞任丽菲胡慧媛高青华孙宇孙雪菲郝丽英; 关键词：阴道涂片生理周期雌二醇

急性心肌梗死大鼠钙离子调控相关基因表达的变化: 2013年; 目的探讨急性心肌梗死大鼠心肌组织中L型钙通道α1,β亚单位(Cacna1c、Cacnb2)、兰尼碱受体(Ryr2)、肌浆网钙ATP酶(Serca2a)、钠-钙交换体(Ncx1)等钙离子调控相关基因表达的变化。方法采用左冠状动脉前降支结扎法制备大鼠心肌梗死模型,术后6 h经TTC染色法观察并计算心肌梗死体积,经Real-time PCR法检测梗死区心肌组织中Cacna1c、Cacnb2、Ryr2、Serca2a、Ncx1 mRNA表达情况。结果与假手术组不同,模型组大鼠冠脉结扎后ECG可见明显的S-T段改变,且伴有不同程度的心律失常。模型组大鼠心肌梗死体积为(38.36±8.59)%,显著高于假手术组。与假手术组相比,模型组大鼠心肌L型钙通道α1,β亚单位mRNA表达水平差异无统计学意义(P>0.05),而Ryr2、Serca2a、Ncx1 mRNA的表达均显著减少(P<0.05,P<0.01)。结论钙离子调控相关基因Ryr2、Serca2a、Ncx1在大鼠急性心肌梗死中扮演重要角色,其表达异常可能是导致梗死后心肌收缩和舒张功能障碍的机制之一。; 胡慧媛孙德日赵妍郭凤孙宇曹永刚郝丽英; 关键词：急性心肌梗死基因表达

生理周期对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的影响: ＜正＞目的通过检测大鼠血液中雌二醇含量确定阴道涂片方法的可靠性,并探讨生理周期对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤的影响。方法①将雌性大鼠通过阴道涂片方法分为动情前期组、动情期组、动情后期、动情间期组,经腹主动脉取血,采用化学发...; 印丹丹封瑞胡慧媛高青华孙宇赵美眯郭凤郝丽英; 文献传递

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孙宇